一种软骨细胞的增殖培养基及增殖培养方法技术

本发明专利技术公开了一种软骨细胞的增殖培养基及增殖培养方法，1L培养基中包括以下组分：人参皂苷Rg1 2‑8mg/L、丹参酮1‑4mg/L、红花粉0.5‑1.5mg/L、牛膝总皂苷1.0‑2.0mg/L、维生素C 10‑20mg/L、L‑谷氨酰胺2‑5v/v％、胎牛血清12‑20v/v％、鸡胚提取物3‑8v/v％，剩余为高糖DMEM液体培养基。本发明专利技术通过特定配方组成软骨细胞的增殖培养基，其配方中各组分相互作用，可有效促进软骨细胞的增殖，采用该培养基培养软骨细胞，在短期内可获得数量较多的软骨细胞，且细胞的活率较高。

A chondrocyte proliferation medium and proliferation culture method

The invention discloses a culture method of cartilage cell proliferation and matrix proliferation, 1L medium comprises the following components: ginsenoside Rg1 2 8mg/L, tanshinone 4mg/L, 1 safflower powder 0.5 1.5mg/L, total saponins of Achyranthes 1 2.0mg/L, vitamin C 10 20mg/L, L glutamine 2 amide 5v/v%, fetal bovine serum 12 20v/v%, 3 8v/v% chick embryo extract, high glucose DMEM medium for residual liquid. The culture medium through the specific composition of cartilage cell proliferation in the formula, each interaction, which can effectively promote the proliferation of chondrocytes, the cultured cartilage cells, cartilage cells to obtain a large number in the short term, and the cell survival rate is higher.

【技术实现步骤摘要】
一种软骨细胞的增殖培养基及增殖培养方法
本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种软骨细胞的增殖培养基及增殖培养方法。
技术介绍
关节软骨是一种由软骨细胞、软骨基质和Ⅱ型胶原组成的透明软骨，关节的创伤和炎症均可引起关节软骨的损伤。由于关节软骨再生能力有限，如果人软骨先天缺损或者后天损伤或缺损时，通常不会再生，难以自行修复。关节软骨的损伤会导致患者的关节反复疼痛和活动受限，严重影响了患者的日常生活。作为治疗人软骨疾病的现有方法，有从自身的其他部位采集软骨组织移植到缺损部位的方法，但存在采集部位和数量有限的问题。因此，关节软骨的损伤修复一直是骨科研究的重要课题之一。软骨组织工程技术是在体内外培养、扩增软骨种子细胞，并且以较高浓度将其种植于具有良好的生物相容性和降解性的支架材料上构建组织工程软骨，然后植入到组织缺损部位，完成组织的修复和重建。软骨组织工程的最终目的就是得到高质量的修复组织和长期有效的功能，为病人最终解决痛苦。从这种意义上看，组织工程方法是目前治疗关节软骨损伤最有希望的方法，是目前软骨损伤修复研究的主要方面。近年来，研究者致力于应用组织工程学治疗修复关节软骨损伤的研究但其前提条件是获取足够数量的软骨细胞，即关节软骨细胞的体外培养及扩增问题。使用软骨细胞移植的方法存在三个问题，即：侵袭采集部位的问题，细胞数量及增殖的问题与维持形态时间的问题。针对第一个问题，侵袭采集部位的问题，是指采集用于培养软骨的软骨时导致该部位缺损、凹陷等畸形或功能障碍，现有常用解决方案是采集肋软骨组织用于后续细胞分离培养。针对第三个问题，长期维持形态的问题，是指由培养的软骨再生的组织长期未被吸收，是否可以持续维持其形态的问题，这取决于第二个问题的解决。目前的研究者或者医务人员认为，如果能获得足够量的软骨细胞，就能解决第三个问题或者至少能够缓解患者疼痛，因为软骨的缺损导致骨与骨之间相互碰撞摩擦从而刺激或损伤神经，产生剧烈疼痛，但是在骨与骨之间存在足够量的细胞就会显著缓解上述问题。因此需要提供一种可显著促进软骨细胞增殖的培养基及培养方法。
技术实现思路
针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供了一种软骨细胞的增殖培养基及增殖培养方法，该增殖培养基和增殖培养方法可有效促进软骨细胞的增殖，在短期内就可以获得数量较多的软骨细胞，获得的细胞活率也较高。为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种软骨细胞的增殖培养基，1L培养基中包括以下组分：人参皂苷Rg12-8mg/L、丹参酮1-4mg/L、红花粉0.5-1.5mg/L、牛膝总皂苷1.0-2.0mg/L、维生素C10-20mg/L、L-谷氨酰胺2-5v/v％、胎牛血清12-20v/v％、鸡胚提取物3-8v/v％，剩余为高糖DMEM液体培养基。进一步地，1L培养基中包括以下组分：人参皂苷Rg14-7mg/L、丹参酮2-4mg/L、红花粉0.8-1.2mg/L、牛膝总皂苷1.2-1.8mg/L、维生素C12-20mg/L、L-谷氨酰胺2-4v/v％、胎牛血清15-18v/v％、鸡胚提取物4-6v/v％，剩余为高糖DMEM液体培养基。进一步地，1L培养基中包括以下组分：人参皂苷Rg16mg/L、丹参酮3mg/L、红花粉1.0mg/L、牛膝总皂苷1.5mg/L、维生素C18mg/L、L-谷氨酰胺3v/v％、胎牛血清16v/v％、鸡胚提取物5v/v％，剩余为高糖DMEM液体培养基。进一步地，鸡胚提取物通过以下方法制备得到：去除鸡胚中鸡眼，然后进行匀浆，再用等体积的DMEM稀释，在20-25℃，30-80r/min条件下搅拌2-3h，然后转移至-80℃条件下冻存48-96h后解冻，离心，收集上清液，经过滤除菌后得到鸡胚提取物。进一步地，红花粉通过以下方法制备得到：将红花干燥后，用液氮研磨至粒径为150-200目，制得。采用上述培养基培养软骨细胞，其培养方法包括：将软骨细胞接种于含3-5％FBS的高糖DMEM液体培养基中培养1天，然后再接种到本专利技术培养基中培养4-8天。进一步地，所述软骨细胞的接种密度为6-8×104/cm2。进一步地，培养软骨细胞时的培养条件为5％CO2，37℃。本专利技术提供的一种软骨细胞的增殖培养基及增殖培养方法，具有以下有益效果：本专利技术通过特定配方组成软骨细胞的增殖培养基，其配方中各组分相互作用，可有效促进软骨细胞的增殖，采用该培养基培养软骨细胞，在短期内可获得数量较多的软骨细胞，且细胞的活率较高。具体实施方式实施例1一种软骨细胞的增殖培养基，1L培养基中包括以下组分：人参皂苷Rg12mg/L、丹参酮1mg/L、红花粉0.5mg/L、牛膝总皂苷1.0mg/L、维生素C10mg/L、L-谷氨酰胺2v/v％、胎牛血清12v/v％、鸡胚提取物3v/v％，剩余为高糖DMEM液体培养基。其中，鸡胚提取物通过以下方法制备得到：去除鸡胚中鸡眼，然后进行匀浆，再用等体积的DMEM稀释，在20℃，30r/min条件下搅拌3h，然后转移至-80℃条件下冻存48h后解冻，离心，收集上清液，经过滤除菌后得到鸡胚提取物。红花粉通过以下方法制备得到：将红花干燥后，用液氮研磨至粒径为150-200目，制得。培养方法：将软骨细胞(本专利技术使用来自小鼠胚细胞的软骨细胞样分化的ATDC5(RIKENBANY、RBC0565)培养细胞株)以8×104个/cm2的密度接种到96孔板，每孔添加100μL含5％FBS的高糖DMEM液体培养基中，于5％CO2，37℃，培养1天，然后用不含血清的高糖DMEM培养基洗涤1次，然后再在上述培养基中，在37℃条件下继续培养4天。实施例2一种软骨细胞的增殖培养基，1L培养基中包括以下组分：人参皂苷Rg18mg/L、丹参酮4mg/L、红花粉1.5mg/L、牛膝总皂苷2.0mg/L、维生素C20mg/L、L-谷氨酰胺5v/v％、胎牛血清20v/v％、鸡胚提取物8v/v％，剩余为高糖DMEM液体培养基。其中，鸡胚提取物通过以下方法制备得到：去除鸡胚中鸡眼，然后进行匀浆，再用等体积的DMEM稀释，在25℃，80r/min条件下搅拌2h，然后转移至-80℃条件下冻存96h后解冻，离心，收集上清液，经过滤除菌后得到鸡胚提取物。红花粉通过以下方法制备得到：将红花干燥后，用液氮研磨至粒径为150-200目，制得。培养方法：将软骨细胞(本专利技术使用来自小鼠胚细胞的软骨细胞样分化的ATDC5(RIKENBANY、RBC0565)培养细胞株)以8×104个/cm2的密度接种到96孔板，每孔添加100μL含5％FBS的高糖DMEM液体培养基中，于5％CO2，37℃，培养1天，然后用不含血清的高糖DMEM培养基洗涤1次，然后再在上述培养基中，在37℃条件下继续培养4天。实施例3一种软骨细胞的增殖培养基，1L培养基中包括以下组分：人参皂苷Rg14mg/L、丹参酮2mg/L、红花粉0.8mg/L、牛膝总皂苷1.2mg/L、维生素C12mg/L、L-谷氨酰胺2v/v％、胎牛血清15v/v％、鸡胚提取物4v/v％，剩余为高糖DMEM液体培养基。其中，鸡胚提取物通过以下方法制备得到：去除鸡胚中鸡眼，然后进行匀浆，再用等体积的DMEM稀释，在25℃，60r/min条件下搅拌2h，然后转移至-80℃条件下冻本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种软骨细胞的增殖培养基，其特征在于，1L培养基中包括以下组分：人参皂苷Rg12‑8mg/L、丹参酮1‑4mg/L、红花粉0.5‑1.5mg/L、牛膝总皂苷1.0‑2.0mg/L、维生素C 10‑20mg/L、L‑谷氨酰胺2‑5v/v％、胎牛血清12‑20v/v％、鸡胚提取物3‑8v/v％，剩余为高糖DMEM液体培养基。

【技术特征摘要】
1.一种软骨细胞的增殖培养基，其特征在于，1L培养基中包括以下组分：人参皂苷Rg12-8mg/L、丹参酮1-4mg/L、红花粉0.5-1.5mg/L、牛膝总皂苷1.0-2.0mg/L、维生素C10-20mg/L、L-谷氨酰胺2-5v/v％、胎牛血清12-20v/v％、鸡胚提取物3-8v/v％，剩余为高糖DMEM液体培养基。2.根据权利要求1所述的软骨细胞的增殖培养基，其特征在于，1L培养基中包括以下组分：人参皂苷Rg14-7mg/L、丹参酮2-4mg/L、红花粉0.8-1.2mg/L、牛膝总皂苷1.2-1.8mg/L、维生素C12-20mg/L、L-谷氨酰胺2-4v/v％、胎牛血清15-18v/v％、鸡胚提取物4-6v/v％，剩余为高糖DMEM液体培养基。3.根据权利要求2所述的软骨细胞的增殖培养基，其特征在于，1L培养基中包括以下组分：人参皂苷Rg16mg/L、丹参酮3mg/L、红花粉1.0mg/L、牛膝总皂苷1.5mg/L、维生素C18mg/L、L-谷氨酰胺3v/v％、胎牛血清16v/v％、鸡胚提取物5v/v％，剩余为高糖DMEM液体培...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡小东，王健，赵翔，熊华强，宋彩霞，王仁杰，邱阳，黄启程，李国焱，唐玲，叶劲涛，曹玉昊，
申请(专利权)人：重庆斯德姆生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50