本发明专利技术提供了一种草鱼FSRP‑3在培养基中的应用，还相应提供一种添加草鱼FSRP‑3的草鱼肌卫星细胞专用培养基。本发明专利技术的草鱼肌卫星细胞专用培养基，包括基础培养基和添加物，其中添加物包括：草鱼FSRP‑3、草鱼源血清提取物、丙酮酸钠、谷氨酸和维生素E。本发明专利技术的草鱼肌卫星细胞专用培养基，能使草鱼肌肉卫星细胞旺盛生长、节省细胞培养周期，具有高效、稳定等特点，具有广阔的市场前景。
【技术实现步骤摘要】
草鱼FSRP-3在培养基中的应用以及草鱼肌卫星细胞专用培养基
本专利技术属于动物细胞培养
，尤其涉及一种草鱼肌卫星细胞的专用培养基。
技术介绍
肌肉是具有多向分化潜能的成体干细胞储存库。肌肉中至少存在两种干细胞：肌卫星细胞(musclesatellitecells，MSC)和肌源干细胞(musclederivedsterncells，MDSC)，由于肌卫星细胞占了绝大部分，因此肌肉干细胞主要指肌卫星细胞。肌卫星细胞只存在于骨骼肌内，而心肌和平滑肌内没有肌卫星细胞。高等脊椎动物出生后其肌纤维数目不会增加，主要依靠肌纤维增长增粗来维持身体生长，只有肌肉受损伤等因素刺激时肌卫星细胞才被激活、分化和自我更新，但鱼类胚后发育过程中肌纤维不仅能增长增粗，而且在幼体时期肌纤维增殖即数量增加能力很强。鱼类幼体增殖的肌纤维来源于成熟肌纤维周围肌卫星细胞的不断激活、分化和自我更新。因此，鱼类是研究内源因素对肌卫星细胞的激活、分化和自我更新调控的理想研究模型。2002年Stoiber利用电子显微镜在硬骨鱼类的骨骼肌中首次观察到卫星样细胞，2010年后有关鱼类肌卫星细胞分离与培养已有一些报道。由于鱼类种类繁多，每种鱼肌肉组织都有其自身特点，已报道培养基多为海水鱼适宜培养基，淡水鱼特别是草鱼相关培养基未见报道，采用已报道相关培养基培养的草鱼肌肉卫星细胞生长速度、细胞密度和细胞活性都未达到实验要求。FSRP-3（Follistatin-relatedprotein3，卵泡抑素相关蛋白-3）作为一种新的抑制型单链糖基化蛋白是在慢性淋巴结白血病病人的B细胞中发现的。FSRP-3具有多种生理功能，包括细胞增殖与凋亡、新陈代谢、分化和免疫反应等。FSRP-3几乎在所有的间质谱系细胞均有表达，特别是在成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、成纤维细胞内表达更多，因为这些细胞可由转化生长因子TGF、IL-IB、TNF-a、IL-6等诱导表达FSRP-3。因此开发一种添加FSRP-3草鱼肌肉卫星细胞专用培养基既为阐明淡水鱼类肌卫星细胞分化过程的分子调控机理，以期为更深一步揭示鱼类肌肉胚后生长发育调控机制奠定基础，也将为我国鱼类肉质品质改良和促进水产业优质、高效和健康发展提供重要的理论依据。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，克服以上
技术介绍
中提到的不足和缺陷，提供一种专用于草鱼肌卫星细胞、能使草鱼肌肉卫星细胞旺盛生长、节省细胞培养周期的培养基。为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为：一种草鱼FSRP-3在培养基中的应用，所述培养基添加的营养物质包括草鱼FSRP-3，所述培养基用于草鱼肌卫星细胞的培养。上述的应用，优选的，所述草鱼FSRP-3通过以下方法获得：收集草鱼早期胚胎并破碎，将胚胎破碎液以1200-1500r/min离心10-15min，静置后取上清液过含草鱼FSRP-3单抗层析柱，获得纯化草鱼FSRP-3。作为一个总的专利技术构思，本专利技术还提供一种草鱼肌卫星细胞专用培养基，包括基础培养基和添加物，所述添加物包括：草鱼FSRP-3（草鱼卵泡抑素相关蛋白-3）、草鱼源血清提取物、丙酮酸钠、谷氨酸和维生素E。上述的草鱼肌卫星细胞专用培养基，优选的，按培养基体积计，所述添加物的含量为：草鱼FSRP-30.2-2mg/L、草鱼源血清提取物1-10mg/L、丙酮酸钠5-20mg/L、谷氨酸2-10mg/L、维生素E5-20mg/L。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：（1）本专利技术首次提出草鱼FSRP-3（草鱼卵泡抑素相关蛋白-3）在草鱼肌卫星细胞培养基中的应用。FSRP-3是富含半胱氨酸的单链糖基化蛋白，其在动物卵泡胎盘和睾丸中表达最高，FSRP-3过表达可以减少脂肪堆积和肥胖的发生，改善肌肉胰岛素敏感性。本专利技术申请人在进行大量试验探究后发现草鱼FSRP-3在早期胚胎中表达量非常高，而且经肌肉注射后草鱼肌纤维细胞核和肌卫星细胞阳性率显著性提高。基于这些前期实验结果，本专利技术设计提供了一种添加草鱼FSRP-3的草鱼肌卫星细胞的专用培养基，培养基中相应添加草鱼源血清提取物，其内含有的促草鱼生长因子，也能促进肌肉卫星细胞生长；在这两种核心添加物以及其余营养物质的协同作用下，本专利技术的专用培养基能明显促进草鱼肌肉卫星细胞生长、节省细胞培养周期。（2）本专利技术是综合运用分子生物学和细胞生物学原理，对草鱼肌肉卫星细胞生长分化特征深入研究基础上，研究开发的草鱼肌肉卫星细胞专用培养基具有高效、稳定等特点。（3）本专利技术生产工艺成熟、产品质量稳定、价格合理、核心技术先进和经济效益显著，研究开发的草鱼肌肉卫星细胞专用培养基是目前比较理想的培养基，具有广阔的市场前景。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是实施例1与对比例1中培养的草鱼肌肉卫星细胞的生长曲线比较图；图2是实施例2与对比例2中培养的草鱼肌肉卫星细胞的生长曲线比较图；图3是实施例3与对比例3中培养的草鱼肌肉卫星细胞中的FSRP-3蛋白的免疫荧光染色比较图（Pax7染色）。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本文专利技术做更全面、细致地描述，但本专利技术的保护范围并不限于以下具体实施例。除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本专利技术的保护范围。除非另有特别说明，本专利技术中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。实施例1：一种本专利技术的草鱼肌卫星细胞的专用培养基，包括基础培养基和添加物，按培养基体积计，添加物的含量为：草鱼FSRP-30.2-0.8mg/L、草鱼源血清提取物1-5mg/L、丙酮酸钠5-8mg/L、谷氨酸2-5mg/L和维生素E5-10mg/L，其中，草鱼FSRP-3通过以下方法获得：收集草鱼早期胚胎，将胚胎破碎后以1500r/min离心10min，静置后取上清液过含草鱼FSRP-3单抗层析柱，获得纯化草鱼FSRP-3。将本实施例的草鱼肌卫星细胞专用培养基用于草鱼肌卫星细胞的培养。实施例2：一种本专利技术的草鱼肌卫星细胞的专用培养基，包括基础培养基和添加物，按培养基体积计，其添加物的含量为：草鱼FSRP-30.2-0.7mg/L、草鱼源血清提取物1-3mg/L、丙酮酸钠5-5.5mg/L、谷氨酸2-2.5mg/L和维生素E5-6mg/L。其中，草鱼FSRP-3通过以下方法获得：收集草鱼早期胚胎，将胚胎破碎后以1500r/min离心10min，静置后取上清液过含草鱼FSRP-3单抗层析柱，获得纯化草鱼FSRP-3。将本实施例的草鱼肌卫星细胞专用培养基用于草鱼肌卫星细胞的培养。实施例3：一种本专利技术的草鱼肌卫星细胞的专用培养基，包括基础培养基和添加物，按培养基体积计，其添加物的含量为：草鱼FSRP-30.2-0.9mg/L、草鱼源血清提取物1-2.5mg/L、丙酮酸钠5-5.5mg/L、谷氨酸2-2.5mg/L和维生素E5本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种草鱼FSRP‑3在培养基中的应用，其特征在于，所述培养基添加的营养物质包括草鱼FSRP‑3，所述培养基用于草鱼肌卫星细胞的培养。
【技术特征摘要】
1.一种草鱼FSRP-3在培养基中的应用，其特征在于，所述培养基添加的营养物质包括草鱼FSRP-3，所述培养基用于草鱼肌卫星细胞的培养。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述草鱼FSRP-3通过以下方法获得：收集草鱼早期胚胎并破碎，将胚胎破碎液以1200-1500r/min离心10-15min，静置后取上清液过含草鱼FSRP-3单抗层析柱，获得纯化草鱼FSRP-3。3.一种...
【专利技术属性】
技术研发人员：褚武英，成嘉，李玉珑，吴萍，
申请(专利权)人：长沙学院，
类型：发明
国别省市：湖南,43
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