tsh和iss双基因共表达菌株的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种

Construction method and application of TSH and ISS double gene co expression strains

The invention discloses one kind of the invention.

【技术实现步骤摘要】
tsh和iss双基因共表达菌株的构建方法及其应用
本专利技术属于基因工程领域，涉及一种双基因表达菌株的构建方法及其应用，具体地说是一种tsh和iss双基因共表达菌株的构建方法及其应用。
技术介绍
禽大肠杆菌病（Aviancolibacillosis，AC）,是由禽致病性大肠杆菌（AvianpathogenicEscherichiacoli，APEC）引起鸡、火鸡及其他禽类局部或全身性肠外感染的总称，临床上以大肠杆菌性脐炎、蜂窝织炎、输卵管炎、腹膜炎和肿头综合征及败血症（心包炎、肝周炎、气囊炎）等较为常见，受染禽群死亡率增高、胴体废弃率增加、生长率及饲料转换率下降，是目前阻碍世界养禽业特别是肉鸡业健康发展的最为严重的细菌性传染病，其所造成的经济损失每年高达数百万美元。多年的生产实践表明，禽大肠杆菌病通过消除易感因素或药物防控的效果甚微，加之随着耐药菌株及药物残留问题的增加，禽产品质量安全愈来愈受到人们的重视。因此，开辟非抗生素途径特别是通过接种疫苗防控禽大肠杆菌病的发生和流行、减少禽产品污染及保证食品安全，具有广阔的发展前景。然而，由于大肠杆菌血清型众多且不同血清型甚至同血清型的不同菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种

【技术特征摘要】
2017.07.14 CN 20171057533641.一种tsh和iss双基因共表达菌株的构建方法，其特征在于，它按照如下的步骤依次进行：（Ⅰ）双基因克隆以禽致病性大肠杆菌质粒为模板，利用PCR分别对温度敏感血凝素tsh基因和增强血清抵抗iss基因进行扩增，在PCR扩增过程中，tsh基因的引物序列如下：上游引物：5’-CCGGAATTCATGAACAGAATTTATTCTCTTCGC-3’，下游引物：5’-CCCAAGCTTTCAGAATGAATAACGAATATTAGCGT-3’iss基因的引物序列如下：上游引物：5’-GGAAGATCTTAGGATTCTGCCGTTTTTA-3’，下游引物：5’-CCGCTCGAGCATATCGATGGGCAACTA-3’；（Ⅱ）tsh基因和iss基因连接pETDuet-1质粒将扩增后的目的基因连接至克隆载体中，转化克隆菌、筛选阳性克隆、酶切后回收带有酶切位点的目的基因，将带有酶切位点的目的基因连接至表达载体中，转化克隆菌、筛选阳性克隆菌，提取鉴定后的pETDuet-1/tsh/iss质粒；（Ⅲ）转化表达菌及目的基因的共表达将pETDuet-1/tsh/iss质粒转入表达菌株BL21(DE3)中，诱导表达蛋白。2.根据权利要求1所述的tsh和iss双基因共表达菌株的构建方法，其特征在于：步骤（Ⅰ）中，所述PCR扩增tsh基因后，产物的长度为4134bp；扩增iss基因后，产物的长度为346bp。3.根据权利要求1所述的tsh和iss双基因共表达菌株的构建方法，其特征在于步骤（Ⅰ）中，所述PCR扩增tsh基因和iss基因的具体过程如下：（Ⅰ1）将O78血清型的禽致病性大肠杆菌菌株划线接种于伊红美兰琼脂平板，37℃培养16h后，挑取单个菌落接种于5mLLB液体培养基中，37℃200rpm振荡培养16h后提取质粒；（Ⅰ2）以该质粒为模板，扩增tsh基因和iss基因；PCR扩增tsh基因的体系为：模板5.0μL、2×HIFIMix30μL、10μmM上游引物和下游引物各3μL、ddH2O19μL；PCR扩增iss基因的体系为：模板2.5μL、2×HIFIMix25μL、10μmM上...

【专利技术属性】
技术研发人员：石虎，王振华，马兴树，陈淑芳，杨广平，
申请(专利权)人：河北科星药业有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13