一种具有胰蛋白酶抑制功能的多肽及其表达方法技术
A polypeptide with trypsin inhibition function and its expression method
The invention belongs to the field of biological engineering, in order to provide a strong specificity of inhibition, no neurotoxicity of Ornithoctonus huwena trypsin inhibitor, and provides a method for transformation and expression of the spider toxin polypeptide. Methods: HW11c40 gene mutation Ornithoctonus huwena model using PCR mutagenesis method, construct mutant expression vector pET (+) 40B HW11c40J, transformed the vector in specific host cells successfully expressed and the recombinant protein with high purity. The recombinant protein has a very weak inhibitory effect on potassium channels and no neurotoxicity. It is a specific and highly specific trypsin inhibitor. It provides new drug molecules for the treatment of acute pancreatitis and other diseases.
【技术实现步骤摘要】
一种具有胰蛋白酶抑制功能的多肽及其表达方法
本专利技术属于蛋白质组学领域，具体涉及一种具有胰蛋白酶抑制功能的多肽及其表达方法。
技术介绍
虎纹捕鸟蛛是中国特有的一种大型有毒蜘蛛，主要分布于我国南部高山地区。虎纹捕鸟蛛毒液中包含多种活性物质。属于Kunitz型毒素的HWTX-XI(虎纹捕鸟蛛毒素-XI)是一种很强的胰蛋白酶抑制剂，比广泛应用于临床的牛胰蛋白酶抑制剂(BPTI)的抑制活性高28.5倍，可同时还具有阻断钾离子通道的作用，在动物身上表现出较弱的神经毒性。中国专利CN101979411A报道的HWTX-XI突变体依然保留着神经毒性，在治疗急性胰腺炎的动物实验中效果并不理想。HW11c40是从虎纹捕鸟蛛毒腺中克隆到的新基因。利用生物信息学分析新基因HW11c40所编码的Kunitz型蜘蛛多肽，和HWTX-XI比对，序列一致性为85.4％，具有胰蛋白酶抑制关键活性残基K14，但不具有钾离子通道抑制的关键活性残基R25。以HWTX-XI的结构(PDB收录号：2JOT)为模板，利用SWISS-MODEL工作站进行三维空间结构的建模，发现HW11c40和HWTX-XI...
【技术保护点】
一种具有胰蛋白酶抑制功能的多肽，其特征在于与SEQ ID NO:1有95％及以上的同源性的多肽编码序列。
【技术特征摘要】
1.一种具有胰蛋白酶抑制功能的多肽，其特征在于与SEQIDNO:1有95％及以上的同源性的多肽编码序列。2.一种具有胰蛋白酶抑制功能的多肽的表达方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)以含有HW11c40基因的克隆载体为模板设计并合成引物，进行PCR定点突变，构建比原基因多编码15个氨基酸的表达载体pET-40b(+)-HW11c40J；(2)筛选阳性突变子并进行基因测序；(3)以pET-40b(+)-HW11c40J表达载体为模板设计引物，通过PCR删除多余的15个氨基酸的编码序列，并纯化扩增表达载体；(4)将步骤(3)所得表达载体转化至宿主细胞并筛选获得阳性克隆；(5)将步骤(4)阳性克隆菌进行传代培养并诱导表达，纯化重组蛋白。3.根据权利要求2所述的一种具有胰蛋白酶抑制功能的多肽的表达方法，其特征在于步骤(1)所述的引物序列为：HW11c40J-1f:CCGGAATTCCATAGATACATGCCTTGAACCC，HW11c40J-1r:CCGCTCGAGTTA...
【专利技术属性】
技术研发人员：霍林巨，罗玉娇，张常昕，夏艳东，司品法，张允雷，刘一佑，金伟，雷兰婷，
申请(专利权)人：湖南甲骨文生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43
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