The present invention provides a method from the blood component IV purified alpha 1 antitrypsin. It includes ion exchange gel chromatography, ultrafiltration concentration and molecular sieve chromatography. The method in the chromatographic process, not the purpose of protein elution, avoid using high salt buffer, simplify the steps of the process, reduce the alpha 1 antitrypsin degeneration risk, use of blood components of IV waste, has considerable application prospect.
【技术实现步骤摘要】
一种纯化α1-抗胰蛋白酶的方法
本专利技术属于蛋白质纯化领域，具体涉及一种纯化α1-抗胰蛋白酶的方法。技术背景血液制品(Bloodproducts)，是指由健康人血浆或经特异免疫的人血浆，经分离、提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分，以及血液细胞有形成份。目前，按照血液制品不同作用，可将其分为人血白蛋白、免疫球蛋白类、凝血因子类、特殊蛋白及微量蛋白和纤维蛋白粘合剂五大类。在过去几十年里，因治疗和预防用血液制品的大量研制与应用，使原本无法治愈和控制的疾病获得了有效遏制，因此，世界各国对其品种和工艺进行了深入的研发，主要采用的是低温乙醇技术提纯血液制品，如Cohn和N-K法。低温乙醇法是以混合血浆为原料，逐级降低酸度(pH7.0降到pH4.0),提高乙醇浓度(从0升到40％)，同时降低温度(从2℃降到-2℃)，各种蛋白在不同条件下以组分(粗制品)的形式分步从溶液中析出，并通过离心或过滤分离出来。根据粗制品沉淀的先后次序分别称为“冷沉淀”、“组分1”、“组分2”、“组分3”、“组分4”和“组分5”。蛋白分子量越大(如凝血因子)越先析出，分子量越小(如白蛋白)越后...
【技术保护点】
一种纯化α1‑抗胰蛋白酶的方法，其特征在于，以血浆组分IV为原料，包括下述步骤：(1)对血浆组分IV进行离子交换凝胶层析，收集流穿液I；再次对流穿液I进行离子交换凝胶层析，收集流穿液II；(2)对步骤(1)得到的流穿液II进行超滤浓缩，得到浓缩液；(3)对步骤(2)得到的浓缩液进行分子筛层析，得到纯化的α1‑抗胰蛋白酶。
【技术特征摘要】
1.一种纯化α1-抗胰蛋白酶的方法，其特征在于，以血浆组分IV为原料，包括下述步骤：(1)对血浆组分IV进行离子交换凝胶层析，收集流穿液I；再次对流穿液I进行离子交换凝胶层析，收集流穿液II；(2)对步骤(1)得到的流穿液II进行超滤浓缩，得到浓缩液；(3)对步骤(2)得到的浓缩液进行分子筛层析，得到纯化的α1-抗胰蛋白酶。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)包括：用缓冲液平衡层析柱，调节血浆组分IV的pH，让其流经层析柱，收集流穿液I；用缓冲液平衡层析柱，调节流穿液I的pH，让其流经层析柱，收集流穿液II。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)包括：使用DEAE-Sepharose-FF作为层析介质进行第一次层析，先以pH6.50.05mol/LTris-HCl缓冲液平衡层析柱，再将血浆组分IV的pH调至6.5，将其以60cm/h线速度流经层析柱，收取流穿液I；再以DEAE-Sepharose-FF作为层析介质进行第二次层析，以pH7.10.05mol/LTris-HCl缓冲液平衡层析柱，调整流穿液I的pH为7.1，将其以60cm/h线速度流经层析柱，收取流穿液II。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤(1)之前包括将所述血浆组分IV进行预处理的步骤，所述预处理的步骤包括：取血浆组分Ⅳ，加入缓冲液溶解、离心、弃沉淀、取上清液I；对上清液I进行盐析，静置过夜，离心，弃沉淀，取上清液II；对上清液II进行透析除盐，收集透析液。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)包括：使用30KD分子截留管离心，使用pH8.20.05mol/L的Tris-HCl缓冲液，将步骤(1)得到的流穿液II浓缩15倍。6.根据权利要求1所述的方法，其特征...
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