一种肿瘤特异性抗原TSP70及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种肿瘤特异性抗原TSP70及其应用。一种肿瘤特异性抗原TSP70，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术所述的非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌及乳腺癌等肿瘤特异性抗原TSP70在制备非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌及乳腺癌等肿瘤诊断试剂中的应用。本发明专利技术提供了新的一种肿瘤特异性抗原TSP70，该抗原在人非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌及乳腺癌等肿瘤细胞中表达阳性率高，表达特异性也高，免疫电镜证实TSP70蛋白位于细胞的胞膜、胞浆和胞核中；既可作为标准品用于制备非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌及乳腺癌等肿瘤诊断试剂，也可用于制备治疗或预防非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌及乳腺癌等肿瘤的药物。

A tumor specific antigen TSP70 and its application

The present invention relates to a tumor specific antigen TSP70 and its application. A tumor specific antigen TSP70, the amino acid sequence is shown as SEQ ID NO.1. The tumor specific antigen TSP70, such as non-small cell lung cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer and breast cancer, is applied in the preparation of tumor diagnostic reagents for non-small cell lung cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer and breast cancer. The invention provides a tumor specific antigen TSP70, the antigen positive expression rate in human non-small cell lung cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer and breast cancer cells, specific high expression, immune electron microscopy confirmed the cellular membrane and TSP70 protein located in the cytoplasm and in the nucleus; not only can be used as a standard for the preparation of diagnostic reagent for non-small cell lung cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer and breast cancer, can be used for preparing drugs for the treatment or prevention of non-small cell lung cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer and breast cancer.

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤特异性抗原TSP70及其应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种肿瘤特异性抗原TSP70及其应用。
技术介绍
非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和乳腺癌等肿瘤是当今世界范围内最常见、恶性程度及死亡率高的恶性肿瘤。随着人口持续增长和人口老龄化的加剧，加之生活方式、社会、经济、环境等变化，恶性肿瘤，尤其是肺癌的发病率和死亡率呈明显上升趋势。每年确诊的肺癌病例约161万，占恶性肿瘤的12.7％，肺癌相关死亡约138万例，占癌症相关死亡的18.2％。肺癌也是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在我国大多数地区占第一位。非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer，NSCLC)占肺癌总数的80％～85％，包括肺腺癌、肺鳞癌和大细胞肺癌等。然而，目前尚无理想的非小细胞肺癌等肿瘤的特异性标志物。单克隆抗体是寻找肿瘤相关抗原的重要工具。然而，单克隆抗体针对的并非某个蛋白质的全序列，而是蛋白质上由数个氨基酸或糖基组成抗原表位。抗原表位可以由蛋白质上连续的数个氨基酸构成，称之为线性表位；也可以由蛋白质序列上彼此不连续，但形成一定空间构象的数个氨基酸构成，称之为构象表位。最小的抗原表位只含有4～6个氨基酸残基或糖基。由于不同的蛋白质可以具有相同的抗原表位，因此单克隆抗体通常会对应携带相同表位的多个蛋白质。所以，从已知单克隆抗体无法直接推断其所针对蛋白抗原的氨基酸序列。非小细胞肺癌是人类死亡率最高的癌症。尽管不同国家组织学分型不同，肺腺癌是目前最普遍的类型。由于缺乏有效的早期诊断的手段，2012年肺癌导致的死亡人数为1590000。五年生存率根据肺癌阶段和地区的差异在4％-17％之间。如果癌症能在较早阶段诊断到，它们的预后将会得到有效提高。肺癌的生存率与临床诊断的分期直接相关。滞后的诊断使治疗变得更加困难。因此，早期诊断及精准分化程度的判断能明显降低肺癌尤其小的实体瘤和磨玻璃样结节的病患致死率。多种影像学手段可用来诊断肿瘤，例如计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)和超声造影(CEUS)。然而，它们对于肿瘤的早期诊断缺乏足够的特异性和敏感性。因此，临床急需肿瘤特异性的显像，即肿瘤分子影像(靶向分子成像)检查诊断的新技术方法。肿瘤的分子影像检查虽然比常规的影像学检查的诊断价值高，但是分子影像检查需要明确的肿瘤分子靶标，以及能够识别这种靶标的特异性的抗体。肿瘤特异性的单抗由于较好的准确性，做分子靶向成像时能比传统的非特异性成像技术更早诊断到肿瘤。但是，到目前为止，很少有诊断肺癌的分子影像方面单抗的报道。分子影像诊断将使临床医生不仅能在初期阶段看到微肿瘤的位置，而且还能显示肿瘤的临床特点和生物学过程。虽然分子影像学检查能够早期特异性地诊断肿瘤，然而肿瘤的分子靶标(生物标志物)的发现十分困难，由于现有的肿瘤标志物多为非肿瘤起源或属于肿瘤细胞的非结构蛋白，现有的肿瘤标志物不适合作为肿瘤分子影像检查的靶标。如对肺癌起宿主免疫反应的c4d和PTX3等。甲状腺转录因子-1(TTF-1)和NapsinA作为肺腺癌的标志物被熟知，但目前还没有这些分子的靶向成像技术报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和乳腺癌等肿瘤的特异性抗原TSP70。本专利技术的又一目的是提供该抗原的应用。本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：一种肿瘤特异性抗原TSP70，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；所述的肿瘤选自非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和/或乳腺癌。TSP70蛋白是通过免疫亲和层析的方法分离得到，测序结果与数据库比对结果显示其为一种尚未见报导的新蛋白。所述的肿瘤抗原TSP70的氨基酸序列在其蛋白质三维结构分析其相应配体的设计和筛选中的应用。本专利技术所述的肿瘤特异性抗原TSP70在制备治疗肿瘤的药物中的应用；所述的肿瘤选自非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和/或乳腺癌。本专利技术所述的肿瘤特异性抗原TSP70优选在制备治疗非小细胞肺癌的药物中的应用。本专利技术所述的肿瘤特异性抗原TSP70在制备非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和乳腺癌等肿瘤诊断试剂中的应用。本专利技术所述的肿瘤特异性抗原TSP70优选在制备非小细胞肺癌诊断试剂中的应用。所述的肿瘤抗原TSP70作为分子影像靶标在制备检查非小细胞肺癌早期分子影像诊断或预后试剂中的应用。一种肿瘤诊断试剂，含有本专利技术所述的肿瘤特异性抗原TTSP70作为标准物质；所述的肿瘤选自非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和/或乳腺癌；优选非小细胞肺癌。一种治疗或预防人肿瘤的药物组合物，至少含有本专利技术所述的肿瘤特异性抗原TSP70；所述的肿瘤选自非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和/或乳腺癌；优选非小细胞肺癌。本专利技术所述的肿瘤特异性抗原TSP70能够刺激机体产生免疫反应，同适量的佐剂一起制备成预防肿瘤的药物。TSP70在肿瘤细胞中特异性高表达，并对肿瘤细胞的增殖和转移具有促进作用，因此TSP70在抗肿瘤药物筛选中具有应用价值。同时，TSP70也可以作为抗癌药物作用靶点。与本专利技术所述的肿瘤抗原TSP70特异性结合的抗体。所述的抗体优选单克隆抗体或多克隆抗体。TSP70的单克隆抗体在制备检查非小细胞肺癌的分子影像诊断试剂中的应用。检查非小细胞肺癌的分子影像诊断试剂，包含荧光染料标记的TSP70的单克隆抗体或偶联TSP70的单克隆抗体的免疫磁珠。所述的分子影像诊断试剂，进一步选自荧光染料CF488标记NJ001、近红外荧光染料CF750标记的NJ001或者偶联单克隆抗体NJ001的免疫磁珠。所述的免疫磁珠粒径优选180nm。有益效果：本专利技术提供了新的一种非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和乳腺癌等肿瘤特异性抗原TSP70，该抗原在人非小细胞肺癌等肿瘤中表达阳性率高，表达特异性也高，免疫电镜证实TSP70蛋白位于细胞的胞膜、胞浆和胞核中；因此可作为分子影像靶标在制备检查非小细胞肺癌早期分子影像诊断或预后试剂。流式细胞分析与Transwell实验表明TSP70具有抗细胞凋亡和促侵袭转移的功能，是上述所述及相应肿瘤细胞的干性蛋白，为肿瘤生长活跃的干性肿瘤细胞所特有的肿瘤蛋白。该抗原既可作为标准品用于制备非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和乳腺癌等肿瘤诊断试剂，也可用于制备治疗或预防非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和乳腺癌等肿瘤的药物，是诊断与治疗的双功能靶标(生物标志物)。本专利技术还提供了检查非小细胞肺癌的分子影像诊断试剂，利用本专利技术检查试剂，33例肺腺癌病人直接免疫荧光(directimmunofluorescence,DIF)检测，结果有32例呈阳性(阳性率97％)，并且结果与肿瘤组织学分级有很好的相关性；同时，7例肺部良性疾病DIF结果均为阴性。在小鼠体内能监测到荧光信号，并且强度与肿瘤负荷有一致性。注射了NJ001-磁珠的小鼠做分子靶向micro-CT扫描的信号强度比注射生理盐水和裸磁珠(未偶联单克隆抗体NJ001的磁珠)的小鼠有明显增强(P<0.05)。并且，与传统micro-CT扫描相比较，使用了CF750-NJ001的荧光扫描提早3周发现肺内肿瘤，分子靶向micro-CT扫描提早2周发现肿瘤。本专利技术中，为了验证TSP70可作为肺腺癌新的分子靶点，首先用CF488-NJ001来体外检测临床肺本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肿瘤抗原TSP70，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述的肿瘤选自非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和/或乳腺癌。

【技术特征摘要】
2016.10.28 CN 20161096237401.一种肿瘤抗原TSP70，其特征在于氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；所述的肿瘤选自非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和/或乳腺癌。2.权利要求1所述的肿瘤抗原TSP70的氨基酸序列在其蛋白质三维结构分析其相应配体的设计和筛选中的应用。3.权利要求1所述的肿瘤抗原TSP70在制备治疗肿瘤药物中的应用；所述的肿瘤选自非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和/或乳腺癌。4.权利要求1所述的肿瘤抗原TSP70在制备肿瘤诊断试剂中的应用；所述的肿瘤选自非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌和/或乳腺癌。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于权利要求1所述的肿瘤抗原TSP70在制备非小细胞肺癌诊断试剂中的应用。6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于权利要求1所述的肿瘤抗原TSP70作为分子影像靶标在制备非小细胞肺癌早期分子影像诊断或预后的试剂中的应用。7.一种非小细胞肺癌诊...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘世扬，徐建，
申请(专利权)人：南京麦科林生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32