诱导性多能干细胞向造血干细胞分化的方法及其培养基技术

本发明专利技术涉及一种诱导性多能干细胞向造血干细胞分化的方法及其培养基。所述方法包括：将经预处理后的iPS用添加了重组来源的细胞因子组合Ⅰ的改进拟胚体形成培养基悬浮后离心，将离心后聚集在一起的iPS进行培养，获得拟胚体；再用添加了重组来源的细胞因子组合Ⅱ的造血干细胞诱导培养基培养，获得造血干细胞。该方法需要的初始iPS细胞量少，拟胚体形态整齐、发育和分化阶段统一；整个过程耗时短，操作简单；不涉及动物源性细胞和成分，大大提高了iPS来源的造血干细胞的安全性，为利用患者自身的iPS大规模生产临床应用级别的造血干细胞提供了一种新的途径和方法。

Differentiation of induced pluripotent stem cells into hematopoietic stem cells and its culture medium

The present invention relates to a method for inducing pluripotent stem cells to differentiate into hematopoietic stem cells and its culture medium. The method comprises the following steps: after pretreatment of iPS by adding the modified cytokine combination of recombinant derived embryoid body formation medium suspension after centrifugation, will after centrifugation together iPS were cultured to obtain embryoid bodies; and then add a group of cytokines recombinant sources of hematopoietic stem and II medium induced cells, obtained hematopoietic stem cells. The initial amount of iPS cells the method needs less, to be unified form neat, embryo development and differentiation stage; the whole process of short time, simple operation; not involved in cell and animal derived ingredients, greatly improves the security of the cells of iPS hematopoietic stem, provides a new way and method for the use of patients the large-scale production of iPS clinical application level of hematopoietic stem cells.

【技术实现步骤摘要】
诱导性多能干细胞向造血干细胞分化的方法及其培养基
本专利技术涉及细胞工程领域，尤其是涉及一种无血清无动物源性诱导性多能干细胞向造血干细胞分化的方法及其培养基。
技术介绍
临床上普遍使用造血干细胞移植，用于白血病、非霍奇金淋巴瘤、地中海贫血等病的治疗。造血干细胞的主要来源是脐带血、骨髓。如果直接进行骨髓移植，则需要进行人体的白细胞抗原配型，否则发生免疫排异会危及患者生命。现有脐带血库储存的造血干细胞免疫原性弱，但数量供不应求，使其在疾病中的临床应用中受到限制。诱导性多能干细胞(inducedpluripotentstemcells,iPS)的出现成功地绕开了免疫原性和伦理性两个最关键的问题，而且来源广泛，可以建立患者特定的iPS细胞，做到个体化治疗，将为干细胞移植大规模在临床应用提供了可能性(SontagS,Metal.ModellingIRF8DeficientHumanHematopoiesisandDendriticCellDevelopmentwithEngineerediPSCells.StemCells.2017Apr；35(4):898-908.)。目前,iPS定向分化为本文档来自技高网...

【技术保护点】
诱导性多能干细胞向造血干细胞分化的方法，包括如下步骤：S1.将诱导性多能干细胞进行预处理；S2.收集经步骤S1预处理后的诱导性多能干细胞，用添加了重组来源的细胞因子组合Ⅰ的改进拟胚体形成培养基悬浮后离心，将离心后聚集在一起的诱导性多能干细胞在所述添加了重组来源的细胞因子组合Ⅰ的改进拟胚体形成培养基中培养，获得拟胚体；S3.收集步骤S2获得的拟胚体，用添加了重组来源的细胞因子组合Ⅱ的造血干细胞诱导培养基培养，获得造血干细胞。

【技术特征摘要】
1.诱导性多能干细胞向造血干细胞分化的方法，包括如下步骤：S1.将诱导性多能干细胞进行预处理；S2.收集经步骤S1预处理后的诱导性多能干细胞，用添加了重组来源的细胞因子组合Ⅰ的改进拟胚体形成培养基悬浮后离心，将离心后聚集在一起的诱导性多能干细胞在所述添加了重组来源的细胞因子组合Ⅰ的改进拟胚体形成培养基中培养，获得拟胚体；S3.收集步骤S2获得的拟胚体，用添加了重组来源的细胞因子组合Ⅱ的造血干细胞诱导培养基培养，获得造血干细胞。2.如权利要求1所述的诱导性多能干细胞向造血干细胞分化的方法，其特征在于：步骤S1中所述预处理包括如下步骤：将诱导性多能干细胞先用DPBS洗，再用0.5mMEDTA消化，最后用完全培养基终止消化。3.如权利要求1所述的诱导性多能干细胞向造血干细胞分化的方法，其特征在于：步骤S2中，所述改进拟胚体形成培养基为将常规的拟胚体形成培养基中动物源性细胞和成分替换为人血清白蛋白。4.如权利要求3所述的诱导性多能干细胞向造血干细胞分化的方法，其特征在于：所述改进拟胚体形成培养基中所述人血清白蛋白的终浓度为1-5mg/ml。5.如权利要求4所述的诱导性多能干细胞向造血干细胞分化的方法，其特征在于：所述改进拟胚体形成培养基包含如下组分：IMDM液体培养基30-50％(体积百分含量)；含L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的F12营养培养基30-50％(体积百分含量)；人血清白蛋白1-5mg/ml；聚乙烯醇5％(体积百分含量)；无蛋白杂交瘤细胞培养基II5％(体积百分含量)；L-丙氨酰-L-谷氨酰胺2mM；胰岛素-转铁蛋白-硒10ug/ml；和/或，所述重组来源的细胞因子组合Ⅰ为干细胞因子、人血管内皮细胞生长因子和人骨形成蛋白4，其添加于所述改进拟胚体形成培养基中的终浓度分别为：30-50ng/ml、15-25ng/ml和15-25ng/ml。6.如权利要求1所述的诱导性多能干细胞向造血干细胞分化的方法，其特征在于：步骤S2中，所述离心的条件为：1400...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾春雨，魏强，
申请(专利权)人：北京呈诺医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11