本发明专利技术提供使灵长类多能干细胞分化成为造血谱系细胞的方法。本发明专利技术还提供灵长类多能干细胞分化产生的造血谱系细胞以及利用这些细胞的方法和包含这些细胞的试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及干细胞生物学领域。背景多能干细胞能在培养中连续增殖并在合适的培养条件下分化成为所有三种原胚 层内胚层、中胚层和外胚层的代表性谱系限制性细胞类型(美国专利号5,843,780; 6,200,806 ； 7,029,913 ； Shamblott 等.，(1998) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95 13726 ； Takahashi 等.，(2007) Cell 131(5) 861 ； Yu 等.，(2007) Science318 5858)。为特定 谱系限制性类型细胞明确适当的生长条件将能实际上提供无限的细胞类型以供研究和治 疗应用。能使多能干细胞分化成为造血谱系细胞将特别有用。造血谱系细胞由中胚层发 育产生，包括白细胞和红细胞，二者分别构成免疫和循环系统。无限提供这些细胞将为 更完全地了解免疫系统和循环系统的发育和功能提供必需的工具。也能了解调节有益和 有害免疫应答的策略。免疫系统可提供先天或非特异性免疫应答，以及适应性或特异性免疫应答。适 应性免疫应答是持久的保护性应答，大多数疫苗方案试图刺激的正是这种应答。参与适 应性免疫应答的细胞包括淋巴细胞(T细胞和B细胞)以及树突状细胞(DC)。T细胞和 B细胞通过特异性识别病原体上表达的抗原表位而消除靶病原体。T细胞具有专门适合 靶向病毒感染细胞和肿瘤细胞的细胞毒性能。B细胞分泌的抗体能结合靶抗原并激活补 体系统促进对靶标的裂解和调理作用。两种应答的特征均是记忆应答，因此有长期保护 作用。DC在启动适应性免疫应答中起着至关重要的作用。它们将与主要组织相容性复 合物(MHC)结合的抗原呈递给淋巴细胞，因此提供了产生适应性免疫应答的初始刺激。 DC的这种迅捷提供可能是使宿主产生治疗性或预防性免疫应答的方式。许多研究证明DC可能是产生适应性免疫应答的载体(参见，例如Mayordomo 等.，(1995)Nature Med 1 1297 ； Celluzi 等.，(1996) J.Exp.Med.183 283 ； Su 等.， (1998) J.Exp.Med. 188 809)，包括研究了用放射线照射DC的作用(参见，例如Cao 等.(2004) Cell Biology International 28 223 ； Merrick 等.，(2005) British Journal Of Cancer 92 1450 ； Young 等.(1993) Blood 81(11) 2987 ； Denfield 等.(2001) Journal Of Leukocyte Biology 69 548 ； Dudda 等.(2004) Journal of Investigative Dermatology 122 945)。树突状细胞的潜能与多能干细胞的应用前景促使众多研究人员尝试了使多能干 细胞分化成为DC或它们的前体细胞(参见，例如美国专利号7,247,480 ；美国专利申请 公布号 2002/0086005 ； 2003/0153082 ； 2006/0275901 ； 2006/0147432 ； 2006/0063255 ； 2006/0147432 ； Fairchild 等.， (2005) InternationallmmunopharmacolOgy 5 13 ； Tacken等.，(2007) Nature Reviews Immunology7 790 ； Senju 等.，(2007) Stem Cells 25 (11) 2720 ； Sluvkin 等.，(2006) J oflmmunology 176 2924 ； Li 等.，(2001)Blood 98(2) 335 ； Kaufman 等.，(2001) ProcNatl Acad Sci 98(19) 10716 ； Chadwick 等.，(2003) Blood 102(3) 906 ； Zhan 等.，(2004) Lancet 364 163 ； Fairchild 等.，(2000) Current Biology 10 1515 ； Kennedy 等.，(2007)Blood 109(7) 2679 ； Ng 等.，(2005)Blood 106(5) 1601 ； Fehling 等.，(2003)Development 130 4217 ； Lu 等.，(2004)Blood 103(11) 4134 ； Zambidis 等.，(2005)Blood 106(3) 860 ； Bandi 等.，(2008)AIDS Research and Therapy 5:1; Pick 等.，(2007) Stem Cells 25 2206)。许多研究人员依赖基质细胞和/或饲养细胞来培养和/或使他们的干细胞分化。 采用饲养细胞和基质细胞费力、费钱、费时且难以放大。一些研究人员他们的方案采用 动物产品，例如动物血清。然而，采用动物产品本身伴有细胞污染动物传染因子的风 险。还有其他研究人员依赖于随机或设计不佳的分化方案，导致不可预计的结果并且通 常产率低。本领域需要从多能干细胞分化产生的造血谱系细胞和产生这些细胞的方法，这 些方法应可放大、经济、有效、稳定、安全和能提供良好产率。本文所述的本专利技术各种 实施方式符合这些需要和其它需要。专利技术概述在某些实施方式中，本专利技术提供使灵长类多能干细胞(pPS)体外分化成为造血 谱系细胞的方法。该PPS细胞可以是适合分化成为人造血谱系细胞的人多能干细胞。所 述造血谱系细胞可包括，例如不成熟的树突状细胞GmDC)、成熟的树突细胞(mDC)、 骨髓前体细胞、单核细胞。在某些实施方式中，本专利技术提供使pPS细胞体外分化成为中胚层细胞的方法。使pPS细胞分化成为造血谱系细胞，可包括使细胞，例如pPS细胞体外接触分 化混合液，该混合液包含多种外源性细胞因子和/或细胞表面表达蛋白的多种外源性配 体(包括，例如细胞因子受体的外源性配体，如能特异性结合细胞因子受体的抗体)， 从而使细胞群分化成为具有不同表型，例如造血谱系细胞表型的细胞，同时仍基本保持 相同的基因型。合适的外源性细胞因子包括以下多种粒细胞_巨噬细胞集落刺激因 子(GM-CSF)、骨形态形成性蛋白4CBMP-4)、血管内皮生长因子(VEGF)、干细胞因 子(SCF)、血小板生成素(TPO)、胎肝激酶配体(FLT3L)、白介素4(IL_4)和白介素 3 (IL-3)。述及具有相同基因型的细胞时不是暗示不能通过遗传学人工操作这些细胞(下 文描述了包括遗传学改变细胞的实施方式)，或不是暗示改变极少(例如，低于整个基因 组的某百分比)或可能自发产生(例如，在非编码区)，而仅是提出使pPS细胞分化成为 造血谱系细胞的行为本身不会导致基因型改变。亲代(未分化细胞)与其分化后代之间 的遗传学相同性通常类似于同卵双生子之间所见的遗传学相同性。在某些实施方式中，可不用血清而实施pPS细胞体外分化成为造血谱系细胞的 方法。在一些实施方式中，可不用饲养细胞而实施pPS细胞分化成为造血谱系细胞的方 法。在本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种使灵长类多能干细胞分化成为不成熟树突细胞的方法，包括使灵长类多能干细胞接触多种外源性细胞因子，所述细胞因子包括粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和骨形态形成蛋白４（ＢＭＰ－４）。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2008-3-27 61/039,835;US 2008-7-16 61/081,2421.一种使灵长类多能干细胞分化成为不成熟树突细胞的方法，包括使灵长类多能 干细胞接触多种外源性细胞因子，所述细胞因子包括粒细胞_巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF)和骨形态形成蛋白4CBMP-4)。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括使灵长类多能干细胞接触以下一种 或多种血管内皮生长因子(VEGF)、干细胞因子(SCF)、胎肝激酶配体(FLT3L)、血小 板生成素(TPO)、白介素4 (IL-4)和白介素3 (IL-3)。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述灵长类多能干细胞是人胚胎干细胞。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在无血清条件下使灵长类多能干细胞分化 成为不成熟的树突细胞。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在无饲养细胞条件下培养灵长类多能干细 胞，使灵长类多能干细胞分化成为不成熟的树突细胞。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在无基质细胞条件下使灵长类多能干细胞 分化成为不成熟的树突细胞。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括使所述不成熟的树突细胞接触成熟 混合液而使不成熟树突细胞成熟。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述成熟混合液包含以下一种或多 种肿瘤坏死因子α (TNFa)、白介素Ιβ( β)、干扰素Y(IFNY)、前列腺素 E2(PGE2)、聚肌苷酸聚胞苷酸(POLYI:C)、干扰素a (IFNa )、CD40配体(CD40L) 和粒细胞_巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，还包括使所述成熟树突细胞接触抗原。10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述抗原是核酸分子。11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述核酸分子是RNA分子。12.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述抗原是肽。13.如权利要求9所述的方法，其特征在于，还包括使所述成熟树突细胞接触射线源。14.一种使灵长类多能干细胞分化成为不成熟树突细胞的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：S曾，AS马宗达，K西本，A雷迪，J莱布罗斯基，
申请(专利权)人：杰龙公司，
类型：发明
国别省市：US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。