一种促进间充质干细胞软骨组织分化的方法技术

本发明专利技术公开了一种促进间充质干细胞软骨组织分化的方法，包括以下步骤：分离人间充质干细胞；然后在间充质干细胞中利用慢病毒稳定过表达NR2F2基因以及小RNA干扰技术下调NR2F2基因表达；间充质干细胞NR2F2基因过表达以及下调表达后3D细胞微球的培养；将人间充质干细胞、聚乙烯乙二醇二甲基丙烯酸酯、丙烯酸酯肽和2959光引发剂以及PBS混合制备生物墨水；使用生物打印机在生物打印纸上打印过表达NR2F2基因的3D水凝胶软骨组织；在软骨形成培养基及小鼠皮下培养3D水凝胶软骨组织21天以形成关节软骨组织。本发明专利技术操作简便、可重复性强，能够有效促进间充质干细胞软骨组织分化，能够为软骨组织工程的科学研究以及软骨损伤的临床治疗提供有益的参考。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物学和组织工程学
，具体涉及一种促进间充质干细胞软骨组织分化的方法。
技术介绍
为了维持3D打印精确的打印分辨率，在生物墨水中接种的细胞密度不宜过大，然而高密度细胞是组织工程中间充质干细胞生成细胞外基质的必要条件。间充质干细胞是具有多种功能的前体细胞，具有软骨、成骨及脂肪分化的能力，同时还能分泌多种细胞因子，在细胞凋亡、分化及免疫反应中具有重要的调控作用。间充质干细胞易于分离和收集，在生物打印过程中应用广泛。然而，在软骨分化过程中间充质干细胞过度增生依然是无法攻克的难题。研究发现NR2F2在调控肌肉和脂肪功能中具有重要作用，且NR2F2的激活与间充质干细胞成成骨分化以及肌肉生成相关。进一步实验发现NR2F2基因过低表达的内皮细胞有向间充质干细胞转化的趋势，然而NR2F2基因过高表达则呈现相反的结果。因此构建间充质干细胞NR2F2基因过高表达诱导软骨分化具有可行性和应用前景。组织工程的出现为软骨损伤的修复提供了一种新的、有效的治疗手段。通过生物3D打印并种植人间充质干细胞体外诱导分化构建功能关节软骨是一种极具科学研究和临床治疗意义的方法。同时，探讨NR2F2在间本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种促进间充质干细胞软骨组织分化的方法，其特征在于：包括以下步骤：a）分离人间充质干细胞，b）在间充质干细胞中利用慢病毒稳定过表达NR2F2基因以及小RNA干扰技术下调NR2F2基因表达，c）间充质干细胞NR2F2基因过表达以及下调表达后3D细胞微球的培养，d）将人间充质干细胞、聚乙烯乙二醇二甲基丙烯酸酯、丙烯酸酯肽和2959光引发剂以及PBS混合制备生物墨水，e）使用生物打印机在生物打印纸上打印过表达NR2F2基因的3D水凝胶软骨组织，f）在软骨形成培养基及小鼠皮下培养3D水凝胶软骨组织21天以形成关节软骨组织。

【技术特征摘要】
1.一种促进间充质干细胞软骨组织分化的方法，其特征在于：包括以下步骤：a）分离人间充质干细胞，b）在间充质干细胞中利用慢病毒稳定过表达NR2F2基因以及小RNA干扰技术下调NR2F2基因表达，c）间充质干细胞NR2F2基因过表达以及下调表达后3D细胞微球的培养，d）将人间充质干细胞、聚乙烯乙二醇二甲基丙烯酸酯、丙烯酸酯肽和2959光引发剂以及PBS混合制备生物墨水，e）使用生物打印机在生物打印纸上打印过表达NR2F2基因的3D水凝胶软骨组织，f）在软骨形成培养基及小鼠皮下培养3D水凝胶软骨组织21天以形成关节软骨组织。2.根据权利要求1所述的一种促进间充质干细胞软骨组织分化的方法，其特征在于：所述步骤a）中间充质干细胞来源于22岁男性骨髓捐献者，所有实验均使用第三代细胞。3.根据权利要求1所述的一种促进间充质干细胞软骨组织分化的方法，其特征在于：所述步骤b）中使用转染试剂将慢病毒pCDH-EF1-Nr2f2-T2A-GFP或pCDH-EF1-T2A-GFP序列与pCMV-VSVG及pCMV-dvpr共同转入293FT细胞中扩增培养，2-3天后离心收集上清液，慢病毒使用浓度为10MOI同时给予2mg/mL嘌呤霉素，其中NR2F2基因过表达效率达到初始含量的40倍以上。4.根据权利要求1所述的一种促进间充质干细胞软骨组织分化的方法，其特征在于：所述步骤b）小RNA干扰人骨髓间充质干细胞NR2F2基因的表达中使用的是脂质体转染试剂及OMEM，RNA使用终浓度调整为10nM，其中作用时间为72小时，转染效率达到80-90%。5.根据权利要求1所述的一种促进间充质干细胞软骨组织分化的方法，其特征在于：所述步骤c）中分别将NR2F2基因过表达组及其...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔晓峰，高桂芳，
申请(专利权)人：武汉枫霖科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42