本发明专利技术涉及一种细胞外泌体提纯装置及方法，提纯装置包括第一中空纤维柱和第二中空纤维柱，第一中空纤维柱内腔两端分别与原液瓶连通形成精滤回路，第二中空纤维柱内腔两端分别与中转瓶连通形成浓缩回路；第一中空纤维柱的外腔通过滤液管路与所述中转瓶连接，滤液管路上连接有第一手动夹；精滤回路上在所述原液瓶的出液口处依次连接有第一过滤膜和第一蠕动泵，浓缩回路上在中转瓶的出液口处连接有第二蠕动泵。本发明专利技术的提纯装置，将外泌体细胞原液先经过第一中空纤维柱进行过滤，然后再通过第二中空纤维柱进行浓缩，适用于大规模大量的上清液持续自动上样浓缩，大大节省了人工操作时间，可大规模制备含有外泌体的上清液，实现外泌体制备的标准化。泌体制备的标准化。泌体制备的标准化。
【技术实现步骤摘要】
一种细胞外泌体提纯装置及方法
[0001]本专利技术涉及细胞培养及提纯相关
，具体涉及一种细胞外泌体提纯装置及方法。
技术介绍
[0002]外泌体是由细胞内多泡小体与细胞质膜融合后释放进入细胞外环境的磷脂双分子层包封囊泡，直径约40-100nm，其在血清和体液中的丰度较高。但从血液或体液中分离外泌体的产量是非常低的。
[0003]从血液或细胞上清液中分离外泌体是一个很复杂的工程。现有的外泌体分离技术，如离心、超速离心、磁珠分离以及基于亲和捕获的方法，非常耗时，且纯度、处理量和重复性较差。其中离心和超速离心法耗时长、纯度低，磁珠和亲和捕获法容易导致外泌体表面修饰，即影响外泌体特性，又不容易祛除，不利于后续功能分析。
技术实现思路
[0004]本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种细胞外泌体提纯装置及方法。
[0005]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种细胞外泌体提纯装置，包括第一中空纤维柱和第二中空纤维柱，所述第一中空纤维柱内腔两端分别与所述原液瓶连通形成精滤回路，所述第二中空纤维柱内腔两端分别与中转瓶连通形成浓缩回路；所述第一中空纤维柱的外腔通过滤液管路与所述中转瓶连接，所述滤液管路上连接有第一手动夹；所述精滤回路上在所述原液瓶的出液口处依次连接有第一过滤膜和第一蠕动泵，所述浓缩回路上在所述中转瓶的出液口处连接有第二蠕动泵。
[0006]本专利技术的有益效果是：本专利技术的提纯装置，将外泌体细胞原液先经过第一中空纤维柱进行过滤，然后再通过第二中空纤维柱进行浓缩，适用于大规模大量的上清液持续自动上样浓缩，大大节省了人工操作时间，可大规模制备含有外泌体的上清液，实现外泌体制备的标准化。
[0007]在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。
[0008]进一步，所述浓缩回路上还连接有第三中空纤维柱，所述第三中空纤维柱与所述第二中空纤维柱并联布置。
[0009]采用上述进一步方案的有益效果是：第三中空纤维柱有助于外泌体的进一步浓缩纯化。
[0010]进一步，所述第一中空纤维柱的孔径为200-400nm，所述第二中空纤维柱的孔径为30-35nm，所述第三中空纤维柱的孔径为5-10nm。
[0011]进一步，所述精滤回路中，所述第一中空纤维柱的出液管路上安装有第一调压阀；所述浓缩回路中，所述第二中空纤维柱的出液管路上安装有第二调压阀，所述第三中空纤维柱的出液管路上安装有第三调压阀。
[0012]采用上述进一步方案的有益效果是：调压阀的设置，有利于整个精滤回路和浓缩回路中压力的稳定。
[0013]进一步，所述浓缩回路上，所述第二中空纤维柱和第三中空纤维柱的进液管路分别通过收获管路与收获瓶连接，所述收获管路上安装有第三蠕动泵和控制阀。
[0014]进一步，所述第一中空纤维柱、第二中空纤维柱和第三中空纤维柱的进液管路上分别安装有压力监测装置。
[0015]采用上述进一步方案的有益效果是：可对管路压力进行有效监控。
[0016]进一步，所述浓缩回路中，所述第二中空纤维柱和第三中空纤维柱的进液管路和出液管路上均安装有控制阀。
[0017]进一步，所述浓缩回路上连接有大气接入管，所述大气接入管上连接有第二过滤膜和控制阀。
[0018]采用上述进一步方案的有益效果是：大气接入管的设置有利于管路中压力稳定。
[0019]进一步，所述第二中空纤维柱的外腔通过第一废液管路与第一废液瓶连接，所述第三中空纤维柱的外腔通过第二废液管路与第二废液瓶连接，所述第一废液管路上连接有第二手动夹，所述第二废液管路上连接有第三手动夹。
[0020]采用上述进一步方案的有益效果是：可有利于浓缩剩余废液进行收集。
[0021]进一步，所述精滤回路上在所述原液瓶的进液口处通过第一输液管路连接第一盐水袋，所述第一中空纤维柱与所述中转瓶之间的管路上通过第二输液管路连接第二盐水袋，所述第一输液管路上连接有第一输液管夹，所述第二输液管路上连接有第二输液管夹。
[0022]采用上述进一步方案的有益效果是：盐水袋的设置，有利于清洗管路和浓缩液收集。
[0023]一种采用上述提纯装置进行细胞外泌体提纯的方法，包括以下步骤：
[0024]步骤1，设备上样：向进液瓶中灌入细胞外泌体原液样品，利用成品泵将样品泵到原液瓶中，打开第一调压阀、第二调压阀、第三调压阀；关死第一手动夹、第二手动夹、第三手动夹；利用第一蠕动泵将原液瓶中的样品泵入到精滤回路的第一中空纤维柱中；
[0025]步骤2，开始第一次浓缩：打开第一手动夹，关死第一调压阀，将经过第一中空纤维柱过滤的样品滤液进入中转瓶中，中转瓶液量增加到一定量时，关死第二手动夹，打开第二调压阀；待第二中空纤维柱的浓缩回路全部充满样品滤液之后打开第二手动夹，关死第二调节阀；
[0026]此时第一蠕动泵和第二蠕动泵均同时运行，一次浓缩提纯的细胞外泌体留在第二中空纤维柱中，浓缩废液进入到第一废液瓶中；
[0027]步骤3，收集第一次浓缩液：当样品全部用完之后，中转瓶液量快见底的时候，打开第二输液管夹放入生理盐水，打开第二调压阀、关死第二手动夹；通过第二蠕动泵将生理盐水泵入到第二中空纤维柱中对其内的细胞外泌体清洗，并通过收获管路及其上的第三蠕动泵将一次浓缩液泵入到收获瓶中进行收获；
[0028]步骤4，开始第二次浓缩：打开第三调压阀、关死第三手动夹；第三中空纤维柱内腔循环管路全部充满样品液之后打开第三手动夹，关死第三调节阀，待中转瓶液量全部浓缩完毕之后停止；
[0029]步骤5，收集第二次浓缩液：打开第三调压阀、关死第三手动夹；同S6进行收集；
[0030]步骤6，清洗：多次重复清洗内腔，每清洗完一次就倒掉原液瓶和中转瓶中的液体，直到液体不浑浊为止；多次重复清洗外腔，每清洗完一次就倒掉原液瓶和中转瓶中的液体，直到液体不浑浊为止；
[0031]步骤7，第一中空纤维柱、第二中空纤维柱、第三中空纤维柱、精滤回路和浓缩回路以及收获管路中均灌入NaOH保养。
[0032]本专利技术的细胞外泌体提纯方法采用中空纤维柱的浓缩方案，细胞外泌体原液先经过一个300nm孔径的第一中空纤维柱，把细胞外泌体原液里面直径比较大的颗粒杂质过滤掉，然后再通过一个30nm孔径的第二中空纤维柱进行浓缩，可根据需要再通过一个7nm孔径的第三中空纤维柱进行再次浓缩，最终可将细胞外泌体原液浓缩至一定体积，可以适用于大规模大量的细胞外泌体原液持续自动上样浓缩，大大节省了人工操作的成本和时间。
附图说明
[0033]图1为本专利技术细胞外泌体提纯装置的流程图。
[0034]附图中，各标号所代表的部件列表如下：
[0035]1、第一中空纤维柱；2、第二中空纤维柱；3、第三中空纤维柱；4、进液瓶；5、原液瓶；6、中转瓶；7、第一废液瓶；8、第二废液瓶；9、收获瓶；10、第一过滤膜；11、第二过滤膜；12、第一调压阀；13、第二调压阀；14、第三本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种细胞外泌体提纯装置，其特征在于，包括第一中空纤维柱和第二中空纤维柱，所述第一中空纤维柱内腔两端分别与原液瓶连通形成精滤回路，所述第二中空纤维柱内腔两端分别与中转瓶连通形成浓缩回路；所述第一中空纤维柱的外腔通过滤液管路与所述中转瓶连接，所述滤液管路上连接有第一手动夹；所述精滤回路上在所述原液瓶的出液口处依次连接有第一过滤膜和第一蠕动泵，所述浓缩回路上在所述中转瓶的出液口处连接有第二蠕动泵。2.根据权利要求1所述一种细胞外泌体提纯装置，其特征在于，所述浓缩回路上还连接有第三中空纤维柱，所述第三中空纤维柱与所述第二中空纤维柱并联布置。3.根据权利要求2所述一种细胞外泌体提纯装置，其特征在于，所述第一中空纤维柱的孔径为200-400nm，所述第二中空纤维柱的孔径为30-35nm，所述第三中空纤维柱的孔径为5-10nm。4.根据权利要求2所述一种细胞外泌体提纯装置，其特征在于，所述精滤回路中，所述第一中空纤维柱的出液管路上安装有第一调压阀；所述浓缩回路中，所述第二中空纤维柱的出液管路上安装有第二调压阀，所述第三中空纤维柱的出液管路上安装有第三调压阀。5.根据权利要求2所述一种细胞外泌体提纯装置，其特征在于，所述浓缩回路上，所述第二中空纤维柱和第三中空纤维柱的进液管路分别通过收获管路与收获瓶连接，所述收获管路上安装有第三蠕动泵和控制阀。6.根据权利要求2所述一种细胞外泌体提纯装置，其特征在于，所述第一中空纤维柱、第二中空纤维柱和第三中空纤维柱的进液管路上分别安装有压力监测装置；所述浓缩回路中，所述第二中空纤维柱和第三中空纤维柱的进液管路和出液管路上均安装有控制阀。7.根据权利要求1所述一种细胞外泌体提纯装置，其特征在于，所述浓缩回路上连接有大气接入管，所述大气接入管上连接有第二过滤膜和控制阀。8.根据权利要求4至7任一项所述一种细胞外泌体提纯装置，其特征在于，所述第二中空纤维柱的外腔通过第一废液管路与第一废液瓶连接，所述第三中空纤维柱的外腔通过第二废液管路与第二废液瓶连接，所述第一废液管路上连接有第二手动夹，所述第二废液管路上连接有第三手...
【专利技术属性】
技术研发人员：顾雨春，
申请(专利权)人：北京呈诺医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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