一种靶标间皮素的CAR-NK细胞制备方法技术

本发明专利技术公开了一种靶标间皮素的CAR‑NK细胞制备方法。该方法包括如下步骤：使NK细胞表达融合蛋白，得到靶标间皮素的CAR‑NK细胞；所述融合蛋白为将NK细胞表面激活受体CD244的IgG样结构域更换为间皮素的特异性抗体后得到的重组蛋白。所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.1所示。本发明专利技术的技术方案对于间皮素过量表达的肿瘤的治疗具有积极效果，可以用于间皮素过量表达的肿瘤，如卵巢癌和胰腺癌的独立治疗或联合治疗。本发明专利技术具有重大的应用价值。

A preparation method of target mesothelin CAR-NK cells

The present invention discloses a preparation method of target mesothelin CAR NK cells. The method includes the following steps: making NK cells express fusion protein and obtaining target mesothelin CAR -NK cells; the fusion protein is a recombinant protein obtained by replacing the IgG-like domain of NK cell surface activated receptor CD244 with a specific antibody to mesothelin. The amino acid sequence of the fusion protein is shown in SEQ ID No.1. The technical scheme of the invention has a positive effect on the treatment of tumors over-expressed by mesothelin, and can be used for independent or combined treatment of tumors over-expressed by mesothelin, such as ovarian cancer and pancreatic cancer. The invention has great application value.

【技术实现步骤摘要】
一种靶标间皮素的CAR-NK细胞制备方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种靶标间皮素的CAR-NK细胞制备方法。
技术介绍
近年来，嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，CAR)修饰的T细胞(CAR-T)在白血病研究中取得了重大突破，为血液肿瘤患者带来了新的希望。但是伴随着对血液肿瘤显著疗效的同时，CAR-T治疗也存在着一些问题，比如脱靶效应、细胞因子风暴、插入突变等，并且对实体瘤尚未取得显著疗效。研发新的具有强大抗肿瘤作用的效应细胞具有重要的理论意义和临床应用价值。NK细胞因其特殊的识别靶细胞的机制、短暂的生理周期、广泛的肿瘤杀伤能力等优势，被视为同样有潜力通过CAR修饰增强其抗肿瘤能力的效应细胞。NK细胞是一类对肿瘤细胞具有强力杀伤作用且MHC非依赖的淋巴细胞，其对肿瘤细胞的识别主要依赖于其表面活化性受体和抑制性受体的相互交叉调控。当识别肿瘤细胞之后，NK细胞通过释放杀伤介质穿孔素和颗粒酶使靶细胞凋亡、表达膜TNF家族分子诱导靶细胞凋亡和抗体依赖的细胞毒作用等多种途径杀伤肿瘤细胞。但是由于肿瘤患者体内NK细胞数量、质量的下降和肿瘤逃逸机制的存在，其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备靶标间皮素的CAR‑NK细胞的方法，包括如下步骤：使NK细胞表达融合蛋白，得到靶标间皮素的CAR‑NK细胞；所述融合蛋白为将NK细胞表面激活受体CD244的IgG样结构域更换为间皮素的特异性抗体后得到的重组蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种制备靶标间皮素的CAR-NK细胞的方法，包括如下步骤：使NK细胞表达融合蛋白，得到靶标间皮素的CAR-NK细胞；所述融合蛋白为将NK细胞表面激活受体CD244的IgG样结构域更换为间皮素的特异性抗体后得到的重组蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：将含有所述融合蛋白的编码基因的重组载体导入NK细胞，得到表达所述融合蛋白的NK细胞，即为所述靶标间皮素的CAR-NK细胞。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述融合蛋白自N端到C端依次由CD244(2B4)的上膜信号区、单链抗体区和“CD244(2B4)的跨膜结构与CD244(2B4)的胞内结构区”组成。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述CD244(2B4)的上膜信号区的氨基酸序列为SEQIDNo.1的第1-21位所示；所述单链抗体区的氨基酸序列为SEQIDNo.1的第22-265位所示；所述“CD244(2B4)的跨膜结构与CD244(2B4)的胞内结构区”的氨基酸序列为SEQIDNo.1的第266-420位所示；进一步地，所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQIDNo.1所示。5.根据权利要求2至4中任一所述的方法，其特征在于：所述融合蛋白的编码基因中编码所述CD244(2B4)的上膜信号区的核苷酸序列为SEQIDNo.2的第1-63位所示；所述融合蛋白的编码基因中编码所述单链抗体区的核苷酸序列为SEQIDNo.2的第64-795位所示；所述融合蛋白的编码基因中编码所述“CD244(2B4)的跨膜结构与CD244(2B4)的胞内结构区”的核苷酸序列为SEQIDNo.2的第796-1263位所示；进一步地，所述融合蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾雨春，尹乐，
申请(专利权)人：北京呈诺医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11