稳定表达FGF-1蛋白细胞株的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种稳定表达FGF‑1蛋白细胞株的构建方法。在pLenti‑CMV‑Gag‑Mcherry‑Puro载体的Not I和Avr II多克隆位点处插入FGF‑1基因，用构建好的pLenti‑CMV‑FGF‑1‑Emcherry‑Puro重组质粒与病毒包装质粒共转染293T细胞，培养、出毒、收取病毒上清、过滤得重组慢病毒液。将包装好的重组慢病毒感染293T细胞，通过嘌呤霉素筛选及鉴定，得稳定表达FGF‑1蛋白细胞株。本发明专利技术利用重组慢病毒系统制备一种融合标签蛋白并能稳定表达FGF‑1蛋白的细胞株，该细胞株为研究FGF‑1蛋白的生物学功能提供一个很好的工具。

Construction of a cell line stably expressing fibroblast growth factor-1 protein

The invention discloses a construction method for stably expressing fibroblast growth factor 1 protein cell line. Fibroblast growth factor 1 gene was inserted at the not I and Avr II polyclonal sites of pLenti CMV Gag Mcherry Puro vector. The constructed recombinant plasmid pLenti CMV Fibroblast growth factor 1 Emcherry Puro was co-transfected into 293;T cells with viral packaging plasmid, and the recombinant lentivirus solution was cultured, collected and filtered. 293T cells were infected with the packaged recombinant lentivirus, and then purinomycin was screened and identified to obtain a stable cell line expressing fibroblast growth factor-1 protein. The present invention utilizes recombinant lentivirus system to prepare a cell line which can stably express fibroblast growth factor 1 protein and provides a good tool for studying the biological function of fibroblast growth factor 1 protein.

【技术实现步骤摘要】
稳定表达FGF-1蛋白细胞株的构建方法
本专利技术设计医学分子生物学
，尤其是一种稳定表达FGF-1蛋白细胞株的构建方法。
技术介绍
目前，全球超过4亿成人患有糖尿病，估计未来10年会增加到6亿人以上。糖尿病是一种受遗传、环境和生活习惯综合影响导致的慢性代谢疾病，主要分为胰岛素依赖型糖尿病(type1diabetesmellitus，T1DM)、非胰岛素依赖型糖尿病(type2diabetesmellitus，T2DM)和妊娠期糖尿病。其临床表现为人体自身不能产生胰岛素或者不能利用胰岛素，导致血糖高于正常血糖范围，从而引起一些并发性疾病。糖尿病及其并发症降低了患者的预期寿命和生活质量，而且每年糖尿病的死亡率、发病率和相关的卫生保健支出都在逐步上升。常规糖尿病治疗药物大多存在疗效不持久、副作用较多及易出现胰岛素耐受等弊端。因此，迫切需要研发更有效与更安全的糖尿病治疗药物。2014年，发现新型的调节血糖因子——酸性成纤维细胞生长因子(acidicfibroblastgrowthfactor，aFGF或FGF1)，同时具备胰岛素增敏效果，为治疗胰岛素抵抗的T2DM带来了新的希望。近年本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种稳定表达FGF‑1蛋白细胞株的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：1)FGF‑1基因的扩增；2)将FGF‑1基因与载体pLenti‑CMV‑Gag‑Mcherry‑Puro连接，构建重组慢病毒表达质粒pLenti‑CMV‑FGF‑1‑Emcherry‑Puro；3)将重组慢病毒表达质粒pLenti‑CMV‑FGF‑1‑Emcherry‑Puro与慢病毒包装质粒psPAX2及pVSV‑G共转染293T细胞，48h后，收集上清，72000×g离心4h获得高度浓缩的慢病毒颗粒；4)将包装好的重组慢病毒CMV‑mcherry‑LVP转染293T细胞，通过嘌呤霉素筛选阳性细胞株，对阳性细胞株进行...

【技术特征摘要】
1.一种稳定表达FGF-1蛋白细胞株的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：1)FGF-1基因的扩增；2)将FGF-1基因与载体pLenti-CMV-Gag-Mcherry-Puro连接，构建重组慢病毒表达质粒pLenti-CMV-FGF-1-Emcherry-Puro；3)将重组慢病毒表达质粒pLenti-CMV-FGF-1-Emcherry-Puro与慢病毒包装质粒psPAX2及pVSV-G共转染293T细胞，48h后，收集上清，72000×g离心4h获得高度浓缩的慢病毒颗粒；4)将包装好的重组慢病毒CMV-mcherry-LVP转染293T细胞，通过嘌呤霉素筛选阳性细胞株，对阳性细胞株进行细胞免疫荧光鉴定，获得稳定表达FGF-1蛋白细胞株。2.根据权利要求1所述的稳定表达FGF-1蛋白细胞株的构建...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭建军，田莹，檀军，赵帅，郑玉林，陈緖美，尹志勇，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州,52