一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法，该方法具体步骤如下：取人体胚胎干细胞接种在BG02培养基上；细胞培养至汇合状态后，消化后接种于新的饲养层细胞上；制备单细胞悬液，将细胞悬液接种至六孔培养板中，培养3‑4d对胚胎干细胞进行预诱导；将细胞种至0.9％甲基纤维素的半固体培养基中，每天更换培养液，细胞培养至汇合状态后，消化传代，接种于新的饲养层细胞上，得到造血干细胞。本发明专利技术提供了一种胚胎干细胞通过人工诱导分化为造血干细胞的方法，胚胎干细胞具有非特异性，能够进行长期的增殖和自我更新，同时还具有分化能力，所述制备方法为大量获取造血干细胞提供了一种有效途径，对临床治疗中造血干细胞的移植具有重要意义。

A method for differentiation of artificial induced pluripotent stem cells into hematopoietic stem cells

The present invention discloses a kind of induced pluripotent stem cells to differentiate into hematopoietic stem cell method, the method includes the following steps: taking human embryonic stem cells were inoculated in BG02 medium; cells were cultured to confluence after digestion after inoculated into new feeder cells; preparation of single cell suspension cells suspension were inoculated in 6-well culture plates, cultured for 3 4D pre induction of embryonic stem cells; the semi solid cells to 0.9% methylcellulose medium, the medium was changed every day, the cells were cultured to confluence after digestion and passage, inoculated into new feeder cells, obtained hematopoietic stem cells. The present invention provides a kind of embryonic stem cells differentiation into cells by artificial methods of hematopoietic stem, embryonic stem cells have nonspecific, capable of long-term proliferation and self-renewal, but also has the ability of differentiation, the preparation method for obtaining hematopoietic stem cells provides a kind of effective way, has important significance in the clinical treatment of hematopoietic stem cell transplantation.

【技术实现步骤摘要】
一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法
本专利技术属于生物医学领域，特别是涉及一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法。
技术介绍
造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，是一个异质性的群体，具有长期自我更新的能力和分化成各类成熟血细胞的潜能。它是研究历史最长且最为深入的一类成体干细胞，对研究各类干细胞，包括肿瘤干细胞，具有重要指导意义。血液系统中的成熟细胞寿命极短，因此在人的一生中，造血干细胞需要根据机体的生理需求适时的补充血液系统各个成熟细胞组分。同时在损伤、炎症等应激状态下，造血干细胞也扮演着调节和维持体内血液系统各个细胞组分的生理平衡的角色。1961年TillJE,McCullochEA用小鼠体内脾结节方法第一次证实了造血干细胞的存在。八十年代后，Weissman等多个实验室相继通过细胞表面标记分离出高度纯化的不同阶段的造血干祖细胞。在小鼠造血干细胞的研究中，造血干细胞的分离是通过细胞表面标记LineageSca-1c-kit或者细胞代谢方面的特性(侧群细胞)借助于流式细胞仪实现的。九十年代通过引入CD34这个细胞表面标记区分小鼠中长期造血干细胞和短期造血干细胞。进入二本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法，其特征在于，该方法具体步骤如下：S1、取人体胚胎干细胞接种在BG02培养基上；S2、培养过程中每天更换培养液，细胞培养至汇合状态后，消化后接种于新的饲养层细胞上，传代比例1:5‑6；S3、取生长良好的胚胎干细胞，制备单细胞悬液，将细胞悬液接种至六孔培养板中，六孔培养板中加入DMEM/F12培养液，培养3‑4d对胚胎干细胞进行预诱导；S4、将S3中预诱导结束的细胞PBS反复吹打，离心沉淀后加入胰蛋白酶消化，之后3‑4×10

【技术特征摘要】
1.一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法，其特征在于，该方法具体步骤如下：S1、取人体胚胎干细胞接种在BG02培养基上；S2、培养过程中每天更换培养液，细胞培养至汇合状态后，消化后接种于新的饲养层细胞上，传代比例1:5-6；S3、取生长良好的胚胎干细胞，制备单细胞悬液，将细胞悬液接种至六孔培养板中，六孔培养板中加入DMEM/F12培养液，培养3-4d对胚胎干细胞进行预诱导；S4、将S3中预诱导结束的细胞PBS反复吹打，离心沉淀后加入胰蛋白酶消化，之后3-4×107/L的细胞密度接种至0.9％甲基纤维素的半固体培养基中，每天更换培养液，细胞培养至汇合状态后，37℃条件下加入2-3mg/ml胶原酶Ⅳ进行消化传代，接种于新的饲养层细胞上，传代比例1:5，得到造血干细胞。2.根据权利要求1所述的一种人工诱导多能干细胞分化...

【专利技术属性】
技术研发人员：张正亮，
申请(专利权)人：安徽惠恩生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34