一种以胎盘为来源的造血干细胞提取及冻存方法技术

本发明专利技术提供了一种以胎盘为来源的造血干细胞提取及冻存方法，其中提取方法包括：对采集到的胎盘及母血进行清洗和检测；用灌洗液对检测合格的胎盘分多次进行灌洗得到含造血干细胞的灌洗液；对提取到的含造血干细胞的灌洗液进行浓缩纯化，得到造血干细胞群。本发明专利技术中造血干细胞提取过程采用的灌洗方法设备简单，操作方便，且封闭的灌洗系统能够有效避免空气中细菌的感染，该灌洗方法提取造血干细胞的回收率非常高，有效避免了资源浪费。造血干细胞的冻存过程采用程序控温，并根据造血干细胞冻存过程中的升温及降温的规律设定相应的冻存速率，能最大限度的保护造血干细胞不受损伤。

【技术实现步骤摘要】
一种以胎盘为来源的造血干细胞提取及冻存方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种以胎盘为来源的造血干细胞提取及冻存方法。
技术介绍
造血干细胞，是从卵黄囊全能间叶细胞分化而来的最原始的造血细胞，是体内所有血细胞的前体，是一类具有自我更新能力并能分化为各种血细胞前体细胞，最终生成包括红细胞、白细胞和血小板在内的各种血细胞，同时也可以分化成其他细胞。因此，其广泛应用于治疗恶性血液病、重型再生障碍性贫血、某些实体瘤、某些异常免疫病、某些遗传病、代谢病和极重度骨髓型急性放射病。同时，造血干细胞移植也是为癌症患者重建正常的造血和免疫功能的有效手段。据研究表明胎盘组织中造血干细胞的含量是脐带血中造血干细胞含量的8-10倍，造血干细胞的数量大，且胎盘作为分娩后的废弃物，不需要侵入性过程来获取，且其造血干细胞的含量和增殖能力也具有明显优势，因此，以胎盘为来源进行造血干细胞移提取的方法能有效解决骨髓或动员后外周血来源不足，脐带血中造血干细胞数量不够成人使用等技术难题。然而，目前以胎盘为来源的造血干细胞分离提取方法主要为机械酶解法和传统灌洗法两种。机械酶解法虽然能获取数量较多的细胞，但其中的造血干细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以胎盘为来源的造血干细胞提取方法，其特征在于，包括：步骤A、对采集到的胎盘及母血进行清洗和检测；步骤B、用灌洗液对检测合格的胎盘分多次进行灌洗得到含造血干细胞的灌洗液；步骤C、对提取到的含造血干细胞的灌洗液进行浓缩纯化，得到造血干细胞群。

【技术特征摘要】
1.一种以胎盘为来源的造血干细胞提取方法，其特征在于，包括：步骤A、对采集到的胎盘及母血进行清洗和检测；步骤B、用灌洗液对检测合格的胎盘分多次进行灌洗得到含造血干细胞的灌洗液；步骤C、对提取到的含造血干细胞的灌洗液进行浓缩纯化，得到造血干细胞群。2.根据权利要求1所述的以胎盘为来源的造血干细胞提取方法，其特征在于，步骤A具体包括：A1、先用75%酒精喷洒胎盘外表面1～5min，再用组织保护液清洗胎盘外表面的残留血液和血凝块，得到胎盘和母血样本；A2、对所述胎盘和母血样本进行健康指标检测。3.根据权利要求1所述的以胎盘为来源的造血干细胞提取方法，其特征在于，步骤B具体包括：B1、将注入软管头插入胎盘脐动脉中，并将回收软管头插入脐静脉中，再用止血钳夹紧；B2、将灌洗液通过注入软管头注入胎盘，然后通过回收软管头来回收，得到含造血干细胞的灌洗液；B3、重复上述步骤B2，并将获得的含造血干细胞的灌洗液混合。4.根据权利要求3所述的以胎盘为来源的造血干细胞提取方法，其特征在于，所述步骤B中，分三次进行灌洗，其中，第一次灌洗过程的灌洗液为：含有5～10%胎牛血清、0.1～0.5mg/mL肝素钠、0.01～0.1mg/mL酚妥拉明、0.01～0.1mg/mL氯丙嗪的基础培养基灌洗液；第二次灌洗过程的灌洗液为：含有5～10%胎牛血清、0.1～0.5mg/mL肝素钠、0.005～0.1mg/mL趋化因子受体拮抗剂、0.005～0.1mg/mL粒细胞集落刺激因子的基础培养基灌洗液；第三次灌洗过程的灌洗液为：含有0.1～0.5mg/mL肝素钠、0.01～0.05mg/mL胶原酶Ⅷ、0.01-0.03mg/mL胰酶的生理盐水灌洗液。5.根据权利要求4所述的以胎盘为来源的造血干细胞提取方法，其特征在于，第一次灌洗过程的条件为：以每秒钟3滴灌洗液的速度灌洗2小时，灌洗10...

【专利技术属性】
技术研发人员：王进辉，李东升，许峻荣，陈智聪，杨阳，钟翠婷，于莉，
申请(专利权)人：广东唯泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44