一种复合诱导培养基以及采用该培养基诱导脐带间充质干细胞成神经元样细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种复合诱导培养基，包括DA、DB、DC三种分化培养液，采用该复合诱导培养基诱导脐带间充质干细胞成神经元样细胞的方法是：首先采用DA分化培养液对脐带间充质干细胞预诱导2天；然后采用DB分化培养液分化诱导1天；最后采用DC分化培养液维持诱导1天；观察诱导后的神经元样细胞形态特征，检测诱导后神经分化相关基因mRNA水平，检测诱导神经元样细胞神经元迁移蛋白DCX、神经元特异性烯醇化酶NSE表达情况：DCX表达阳性者为神经前体细胞,NSE表达阳性者为神经元样细胞。本发明专利技术将诱导过程分为三阶段，每阶段诱导时采用不同的培养基，诱导时间短，诱导效率高，诱导分化的神经元样细胞存活稳定，移植后无排斥。

【技术实现步骤摘要】
一种复合诱导培养基以及采用该培养基诱导脐带间充质干细胞成神经元样细胞的方法
本专利技术涉及干细胞神经分化技术，尤其是涉及一种复合诱导培养基，本专利技术还涉及采用该培养基诱导脐带间充质干细胞成有较高存活水平的神经元样细胞的方法。
技术介绍
临床上，中枢神经系统损伤会导致脑、脊部神经细胞大量死亡，神经功能永久缺失，且很难自我修复。鉴于目前快速提取神经干细胞仍未有稳定的解决方案，因此对其他来源的干细胞进行诱导以获取数目稳定、功能完备的神经元样细胞的策略被科学界寄予厚望。较其他来源干细胞，脐带间充质干细胞(humanumbilicalcordmesenchymalstemcell,HUCMSC)具有采集痛苦小、自我更新快、增殖能力强、无免疫排斥、无伦理争议等特点。如何高效定向诱导HUCMSC成神经元样细胞，对于神经环路、突触连接的重塑和恢复有巨大的临床应用价值。细胞分化是一种动态、可逆的程序性重调，合适的诱导微环境可促进成神经分化基因有序表达，启动相关通路，导致MSC跨系分化。现有神经分化策略主要包括：抗氧化剂诱导、生长因子诱导、中药诱导、细胞共培养诱导等方案。常用的分化方案虽能诱导神经元样本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种复合诱导培养基，其特征在于：包括DA、DB、DC三种分化培养液，所述DA、DB、DC三种分化培养液的配制方法分别为：DA分化培养液是由每1000ml DMEM‑LG培养基中添加40ml FBS和10μg bFGF组成，其中bFGF的终浓度达10 ng/ml；DB分化培养液是由每1000ml的DMEM‑LG培养基中添加50ml Cerebrolysin、4mg Forskolin、5mg Insulin、0.36mg Hydrocortisone、1.86g KCl、7g NaCl、2.2g NaHCO3、190mg NaH2PO4、95mg MgCl2、222mg CaCl2、1.8g D...

【技术特征摘要】
1.一种复合诱导培养基，其特征在于：包括DA、DB、DC三种分化培养液，所述DA、DB、DC三种分化培养液的配制方法分别为：DA分化培养液是由每1000mlDMEM-LG培养基中添加40mlFBS和10μgbFGF组成，其中bFGF的终浓度达10ng/ml；DB分化培养液是由每1000ml的DMEM-LG培养基中添加50mlCerebrolysin、4mgForskolin、5mgInsulin、0.36mgHydrocortisone、1.86gKCl、7gNaCl、2.2gNaHCO3、190mgNaH2PO4、95mgMgCl2、222mgCaCl2、1.8gD-glucose组成；其中各组分的终浓度达到5%Cerebrolysin、10μMForskolin、5μg/mlInsulin、1μMhydrocortisone、2.5mMKCl、120mMNaCl、26mMNaHCO3、1.25mMNaH2PO4、1mMMgCl2、2mMCaCl2、10mMD-glucose；DC分化培养液是由每1000ml的DMEM-F12培养基中添加10...

【专利技术属性】
技术研发人员：关方霞，马珊珊，邢衢，王欣欣，黄团结，孟楠，杨波，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南,41