表达α‑1抗胰蛋白酶（AAT）的遗传修饰的间充质干细胞制造技术

本发明专利技术涉及用作药物的遗传修饰的间充质干细胞，所述药物治疗没有α‑1抗胰蛋白酶(AAT)缺乏症的受试者的与炎症和/或不想要的免疫应答相关的医学病症，其中所述干细胞包含外源核酸，所述外源核酸包含(i)α‑1抗胰蛋白酶(AAT)编码区，所述α‑1抗胰蛋白酶(AAT)编码区可操作地连接于(ii)启动子或启动子/增强子组合。

The expression of alpha 1 antitrypsin (AAT) genetic modified mesenchymal stem cells

The invention relates to the genetic modification of drug mesenchymal stem cells, the drug therapy is not alpha 1 antitrypsin (AAT) deficiency in subjects with inflammatory and / or unwanted immune response related medical conditions, wherein the stem cells contain exogenous nucleic acid, the exogenous nucleic acid contains (I) alpha 1 antitrypsin (AAT) encoding region, the 1 alpha antitrypsin (AAT) encoding region is operably connected to the (II) promoter or promoter / enhancer combination.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达α-1抗胰蛋白酶(AAT)的遗传修饰的间充质干细胞
本专利技术涉及用作药物的遗传修饰的间充质干细胞，所述药物治疗没有α-1抗胰蛋白酶(AAT)缺乏症的受试者的与炎症和/或不想要的免疫应答相关的医学病症，其中所述干细胞包含外源核酸，所述外源核酸包含可操作地连接于(ii)启动子或启动子/增强子组合的(i)α-1抗胰蛋白酶(AAT)编码区。
技术介绍
间充质干细胞(MSC)是存在于骨髓和其他组织中的非造血来源的细胞。MSC一般被认为是多能成体祖细胞，其具有分化为有限数目的细胞谱系如成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞的能力。基于这种直接分化为这些末期表型的能力，已经对MSC作为治疗实体的用途进行了研究，包括MSC促进或提高骨修复和用于修复软骨缺损的用途(Vilquin和Rosset,再生医学(RegenerativeMedicine)2006:1,4,p589以及Veronesi等人,干细胞和发育(StemCellsandDevelopment)2013；22,p181)。已经描述了用于许多治疗性适应症的MSC的分离和培养，并且这代表了针对治疗炎症相关障碍的有前途的方法(例如WO2010/119039)。已知MSC展示了施用于患者后的免疫逃逸特性。已经显示MSC展示了在移植同种异体供体材料情况下有利的免疫调节作用(LeBlanc等人,Lancet2004:363,p1439)，从而减少了潜在致病的同种异体反应性和排斥。此外，已知MSC显示了抗肿瘤发生的作用，例如抗卡波西肉瘤(Khakoo等人,JExpMed2006:203,p1235)。MSC治疗还可以在创伤愈合中起治疗作用。可以经由全身注射进行MSC的治疗递送，然后MSC归巢并移入损伤的部位(Kidd等人,干细胞(StemCells)2009:27,p2614)。虽然MSC对受伤的组织具有再生作用是明显的，但是它们作为感兴趣的治疗性转基因蛋白的递送载体的用途尚未被充分地探索。炎性疾病和与不想要的免疫应答有关的疾病代表了世界上健康问题和死亡率的重要原因。例如，炎性疾病(如肺部疾病或自身免疫性疾病)代表了需要改善炎症调节以提供有效治疗的医学病症。肺部疾病(如呼吸系统疾病)可能严重影响患者的健康，并且涵盖影响肺的器官和组织的许多病理状况。作为肺部疾病的一个例子，呼吸系统疾病包括上呼吸道、气管、支气管、细支气管、肺泡、胸膜和胸膜腔以及呼吸的神经和肌肉的病症。呼吸系统疾病是全球死亡的主要原因之一。肺部感染(如肺炎和肺结核)、肺癌和慢性阻塞性肺疾病(COPD)在2008年期间在世界上一共造成950万人死亡，占全球死亡总数的六分之一。根据世界卫生组织，四种呼吸系统疾病类别出现在全球十大死因之中，它们共占死亡人数的六分之一，以及损失的伤残调整生命年(disability-adjustedlife-years)的十分之一。在欧盟的28个国家中，这些疾病占死亡人数的八分之一。为了减少炎症，治疗通常涉及抗炎药物(如皮质类固醇)的使用。鉴于肺部疾病的流行，需要新的治疗策略。自身免疫疾病是与个体对抗其身体的细胞、物质或组织的免疫应答相关的医学病症。一般人群中很少数人患有可能是急性或慢性的自身免疫性疾病，并且往往在长时间内衰弱。在自身免疫性疾病和炎性疾病两者中，例如针对身体自身组织或蛋白质的自身免疫性疾病中，医学病症通常通过人类适应性免疫系统和/或固有免疫系统的反应产生。具有重要意义的自身免疫性疾病的一个例子是1型糖尿病。1型糖尿病占所有糖尿病病例的5％至10％。全球每年约有80000名青年被诊断出患有1型糖尿病，据估计在美国共有300万人患有1型糖尿病(Chiang等人,糖尿病护理(DiabetesCare)2014:37,pp2034-55)。在患有1型糖尿病的患者中，胰腺β-细胞被β-细胞自身抗原、巨噬细胞、树突状细胞、B淋巴细胞和T细胞淋巴细胞参与的自身免疫反应破坏。由于这些患者缺乏胰腺β细胞，所以胰岛素的产生减少，导致血液和尿液中的葡萄糖水平升高。目前的治疗方法通常依赖于调节胰岛素水平，而不直接解决潜在的免疫系统病理学。具有重要意义的炎性疾病的一个例子是关节炎，例如痛风(痛风性关节炎)。痛风是一种医学病症，其特征通常是在特定位置的复发性急性炎症性关节炎，其导致肿胀和关节疼痛。大脚趾底部的跖趾关节是通常受影响的区域。痛风通常被公认是由血液中尿酸水平升高所引起，导致尿酸结晶，晶体沉积在患者体内的关节、肌腱和周围组织中。治疗通常涉及抗炎药的使用，例如非类固醇抗炎药(NSAID)或皮质类固醇，或阻止尿酸产生的药物。许多抗炎剂是已知的，如类固醇和非类固醇药剂，其用于治疗如关节炎的病症。然而，这些药物中的许多经常导致不想要的副作用，尤其是长时间使用后。对进一步的抗炎剂的需求是明显的，特别是在治疗对轻度或短期治疗反应不良和/或导致需要长期治疗的患者的不想要的副作用的炎性疾病或自身免疫性疾病的情况下。α-1抗胰蛋白酶(也称为A1AT、AAT、PI、SERPINA1)是约52kDa的糖蛋白，其是最丰富的内源丝氨酸蛋白酶抑制剂(SERPIN超家族)之一。AAT被认为是急性期蛋白，从而在急性炎症时AAT浓度可以提高许多倍。α-1抗胰蛋白酶缺乏症(α-1抗胰蛋白酶缺乏症，A1AD)是导致α1-抗胰蛋白酶(A1AT)生产缺陷的医学障碍，导致血液和肺部中A1AT活性降低和肝细胞中过多的异常A1AT蛋白的沉积。SERPINA1中存在多于75种已知的不同突变，由此90％的AATD病例是由于PI*Z错义突变：Glu342Lys。AAT缺乏症导致慢性的不受抑制的组织分解，由此嗜中性粒细胞弹性蛋白酶自由地分解肺泡间隙弹性蛋白，导致呼吸道并发症如气道炎症和肺气肿。尽管已经提出了用于重组功能性AAT的基因治疗方法，但AAT缺乏症的治疗仍然是个挑战。例如，US2014/0142161A描述了通过使用基于重组腺相关病毒(rAAV)的载体增强AAT的表达来用于治疗AAT缺乏症的基因治疗方法。Li等人(JHepatol2011:54,pp930-8)、Ghaedi等人(TissueandCell2010:42,pp181-9)和Li等人(MolTher2010:18,pp1553-8)描述了表达AAT的遗传修饰的间充质干细胞，并讨论了其在治疗AAT缺乏症方面，特别是在治疗肝脏疾病方面的潜在用途。鉴于A1AD引起的疾病的严重程度，需要新的策略来增强患病受试者的AAT产生。尽管最近在治疗AAT缺乏症中取得了初步进展，但是在未患有AAT缺乏症的受试者中，AAT在细胞治疗方法中的治疗潜能仍然很大程度上未被探索。Ghaedi等人(JGeneMed2011:13,pp171-80)证明了表达AAT的间充质干细胞对人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)的细胞毒作用，并讨论了所述间充质干细胞作为血管生成抑制剂的可能用途。根据本专利技术人的认识，基于通过MSC的转基因AAT的表达在治疗炎性或自身免疫疾病中的细胞治疗的应用之前未被提出。
技术实现思路
鉴于现有技术，基于本专利技术的技术问题是提供供选择的和/或改进的治疗炎性疾病和与不想要的免疫应答相关的疾病的手段。通过独立权利要求的特征解决这个问题。通过从属权利要求提供了本专利技术的优选实施方式。因此，本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
用作药物的遗传修饰的间充质干细胞，所述药物治疗没有α‑1抗胰蛋白酶(AAT)缺乏症的受试者的与炎症和/或不想要的免疫应答相关的医学病症，其中，所述干细胞包含外源核酸，所述外源核酸包含(i)α‑1抗胰蛋白酶(AAT)编码区，所述α‑1抗胰蛋白酶(AAT)编码区可操作地连接于(ii)启动子或启动子/增强子组合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.08 EP 15150454.5;2015.10.28 EP 15191934.71.用作药物的遗传修饰的间充质干细胞，所述药物治疗没有α-1抗胰蛋白酶(AAT)缺乏症的受试者的与炎症和/或不想要的免疫应答相关的医学病症，其中，所述干细胞包含外源核酸，所述外源核酸包含(i)α-1抗胰蛋白酶(AAT)编码区，所述α-1抗胰蛋白酶(AAT)编码区可操作地连接于(ii)启动子或启动子/增强子组合。2.根据前述权利要求中任一项所述的用作药物的遗传修饰的细胞，其中，所述外源核酸由病毒载体组成或包括病毒载体，更优选地由反转录病毒载体组成或包括反转录病毒载体。3.根据前述权利要求中任一项所述的用作药物的遗传修饰的细胞，其中，所述病毒载体是γ反转录病毒载体。4.根据前述权利要求中任一项所述的用作药物的遗传修饰的细胞，其中，所述启动子或启动子/增强子组合是组成型启动子。5.根据前述权利要求中任一项所述的用作药物的遗传修饰的细胞，其中，所述组成型启动子是EFS、PGK或EF1α启动子。6.根据前述权利要求中任一项所述的用作药物的遗传修饰的细胞，其中，所述启动子或启动子/增强子组合是诱导型启动子。7.根据前述权利要求中任一项所述的用作药物的遗传修饰的细胞，其中，在施用后所述细胞分化时所述启动子是诱导型的。8.根据前述权利要求中任一项所述的用作药物的遗传修饰的细胞，其中，所述启动子是炎症特异性启动子，优选地，其中，所述启动子由炎性介质或炎性细胞因子诱导和/或当遗传修饰的间充质干细胞接近于发炎组织时诱导所述启动子。9.根据前述权利要求中任一项所述的用作药物的遗传修饰的细胞，其中，所述启动子是Tie2启动子。10.根据前述权利要求中任一项所述的用作药物的遗传修饰的细胞，其中，所述启动子是RANTES启动子。11.根据前述权利要求中任一项所述的用作药物的遗传修饰的细胞，其中，所述启动子是HS...

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯蒂娜·根特尔，莎宾·盖格尔施雷德泽克，费利克斯·赫尔曼，拉尔夫·哈斯，达里亚·拉丽莎·弗尔斯特，
申请(专利权)人：埃普塞斯有限责任两合公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE