细胞穿透性肽制造技术

本申请提供了细胞穿透性肽，其任选地包括与之连接的运载物部分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞穿透性肽序列表本申请含有已经以ASCII格式电子提交的序列表，并且通过引用将其全部合并入本文。所述ASCII副本于2015年11月2日创建，名称为113123-89625_SL.txt，大小为5,622字节。专利
本专利技术涉及能穿透细胞并任选地将运载物(cargo)分子携带到细胞内的肽。下文引用或依赖的所有文件均通过引用明确合并入本文。专利技术背景大量有吸引力的药物靶标是细胞内蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)。然而，PPI不易于被传统分子调节，它们太小并且对于典型地不能穿过细胞膜的较大化合物例如肽而言是难以接近的。细胞穿透性肽(CPP)是一类多样的肽，典型地具有5-30个氨基酸，不同于大多数肽，它们能穿过细胞膜。自从发现第一个CPPpenetratin以来(Derossi等人,Biol.Chem.,269,10444-10450,1994)，CPP已被用于各种应用。CPP可以在体外和体内作为核酸(Lehto等人.Exp.Op.DrugDelivery,9,823-836,2012)、小分子、蛋白质和其它肽的载体起作用(Copolovici等人,ACSNano,8,1972-1994,2014)。CPP不仅能用于在细胞内携带功能性肽，而且还能并入功能基序。最初，细胞摄取被认为是通过质膜的直接渗透发生的(Prochiantz,Curr.Opin.CellBiol,12,400-406,2000)，但是现在知道，胞吞作用对细胞摄取有重要贡献(Fotin-Mleczek等人,Curr.Pharm.Design,11,3613-3628,2005)。鉴于这些最近的结果，作为CPP的肽的说明并不意味着特定的细胞输入机制，而是指肽促进与其共价或非共价缀合的运载物分子的细胞摄取的能力。在本领域中存在对给需要其的患者或个体施用肽或肽-运载物缀合物的新CPP的需求。专利技术概述本专利技术涉及包含SEQIDNo.1的序列的肽：XA-XB-XC-XD-XE-XF-XG-XH(SEQIDNo.1)，其中：XA不存在或者是Lys或Phe-Ile；XB是Met、正亮氨酸、Lys或Asp；XC、XD、XE、XF和XG彼此独立地是疏水性氨基酸、Asp或Lys；且XH不存在或者是Met、Asp或Leu-Leu-Ile，所述肽任选地包含与所述的SEQIDNo.1的序列上的位置连接的运载物部分以形成肽-运载物缀合物。本专利技术还涉及包含治疗有效量的肽-运载物缀合物的药物组合物。本专利技术还涉及用于治疗癌症或者病毒性、中枢神经系统、炎性、免疫或代谢性疾病或病症的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的肽-运载物缀合物。本专利技术还涉及编码肽的分离的核苷酸和包含所述分离的核苷酸的载体。专利技术详述应当理解，已经简化了本专利技术的图和描述，以阐述与清楚理解本专利技术有关的要素，同时为了清楚起见，去除了典型的肽合成中存在的许多其它要素。本领域的普通技术人员会认识到，在实施本专利技术中其它要素和/或步骤也是期望的和/或需要的。然而，由于这些要素和步骤在本领域中是众所周知的，并且因为它们对更好地理解本专利技术没有帮助，所以本文不讨论这类要素和步骤。本文的公开内容涉及本领域技术人员已知的这类要素和方法的所有这类变型和调整。此外，本文所给出和阐述的实施方案仅用于举例目的，不意味着在本专利技术的描述中它们是排他性的或限制性的。本文所提及的所有肽序列都是按照通常的惯例书写的，其中N-末端氨基酸位于左侧，C-末端氨基酸位于右侧。两个氨基酸残基之间的短线表示肽键。在氨基酸具有异构体形式的情况下，除非另有明确说明，否则其是所代表的氨基酸的L型。为了方便描述本专利技术，使用各种氨基酸残基的常规和非常规缩写。这些缩写是本领域技术人员熟知的，但为了清楚，将其列在下面：Asp＝D＝天冬氨酸；Ala＝A＝丙氨酸；Arg＝R＝精氨酸；Asn＝N＝天冬酰胺；Gly＝G＝甘氨酸；Glu＝E＝谷氨酸；Gln＝Q＝谷氨酰胺；His＝H＝组氨酸；Ile＝I＝异亮氨酸；Leu＝L＝亮氨酸；Lys＝K＝赖氨酸；Met＝M＝甲硫氨酸；Phe＝F＝苯丙氨酸；Pro＝P＝脯氨酸；Ser＝S＝丝氨酸；Thr＝T＝苏氨酸；Trp＝W＝色氨酸；Tyr＝Y＝酪氨酸；Val＝V＝缬氨酸；Nle＝正亮氨酸；Fluo＝羧基荧光素；Ado＝9-(Fmoc-氨基)-3,6-二氧杂-辛酸。氨基酸可以是L-或D-型。D-氨基酸以小写字母表示，L-氨基酸以大写字母表示。为了方便，且如本领域技术人员公知的那样，使用以下缩写或符号来表示本文所用的部分、试剂等：Et2O是乙醚；hr是小时；TIS是三异丙基硅烷；ACN是乙腈，Fmoc是9-芴基甲氧基羰基；DMF是二甲基甲酰胺；DIPEA是N,N-二异丙基-乙基胺；TFA是三氟乙酸；HOBT是N-羟基苯并三唑；BOP是六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)；HBTU是六氟磷酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲；(ES)+-LCMS是电喷雾液相色谱-质谱；DIEA是二异丙基乙基胺；MeOH是甲醇；DCM是二氯甲烷。用于本专利技术的疏水性氨基酸包括Leu、Ile、Phe、Trp、Val、Met、Cys、Tyr和Ala。因此，在本专利技术的一个实施方案中，提供了一种肽，其包含SEQIDNo.1的序列：XA-XB-XC-XD-XE-XF-XG-XH(SEQIDNo.1),其中：XA不存在或者是Lys或Phe-Ile；XB是Met、正亮氨酸、Lys或Asp；XC、XD、XE、XF和XG彼此独立地是疏水性氨基酸、Asp或Lys；且XH不存在或者是Met、Asp或Leu-Leu-Ile，所述肽任选地包含与所述的SEQIDNo.1的序列上的位置连接的运载物部分以形成肽-运载物缀合物。在本专利技术的另一个实施方案中，提供了包含SEQIDNo.1的序列的肽，其中疏水性氨基酸选自Leu、Ile、Phe、Trp、Val、Met、Cys、Tyr和Ala。在本专利技术的另一个实施方案中，提供了包含SEQIDNo.1的序列的肽，其中所述运载物部分是肽、多肽、蛋白质、小分子物质、药物、单核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、反义分子、双链以及单链DNA、RNA、人造或部分人造的核酸、低分子量分子、糖、质粒、抗生素物质、细胞毒性剂、抗病毒剂或者标签或标记物分子。在本专利技术的另一个实施方案中，提供了包含SEQIDNo.1的序列的肽，其中所述肽还包含内酰胺、硫醚或二硫键。在本专利技术的另一个实施方案中，提供了包含SEQIDNo.1的序列的肽，其中所述运载物部分与XH连接，或者在XH不存在的情况下与XG连接。在本专利技术的另一个实施方案中，提供了包含SEQIDNo.1的序列的肽，其中所述运载物部分与XA连接，或者在XA不存在的情况下与XB连接。在本专利技术的另一个实施方案中，提供了包含SEQIDNo.1的序列的肽，其中XA不存在。在本专利技术的另一个实施方案中，提供了包含SEQIDNo.1的序列的肽，其中XA是Lys或Phe-Ile。在本专利技术的另一个实施方案中，提供了包含SEQIDNo.1的序列的肽，其中XB是Met或正亮氨酸。在本专利技术的另一个实施方案中，提供了包含SEQIDNo.1的序列的肽，其中XB是Lys或Asp。在本专利技术的另一个实施方案中，提供了包含S本文档来自技高网...

【技术保护点】
肽，其包含SEQ ID No.1的序列：XA‑XB‑XC‑XD‑XE‑XF‑XG‑XH(SEQ ID No.1)，其中：XA不存在或者是Lys或Phe‑Ile；XB是Met、正亮氨酸、Lys或Asp；XC、XD、XE、XF和XG彼此独立地是疏水性氨基酸、Asp或Lys；且XH不存在或者是Met、Asp或Leu‑Leu‑Ile，所述肽任选地包含与所述的SEQ ID No.1的序列上的位置连接的运载物部分以形成肽‑运载物缀合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.22 US 62/095,1981.肽，其包含SEQIDNo.1的序列：XA-XB-XC-XD-XE-XF-XG-XH(SEQIDNo.1)，其中：XA不存在或者是Lys或Phe-Ile；XB是Met、正亮氨酸、Lys或Asp；XC、XD、XE、XF和XG彼此独立地是疏水性氨基酸、Asp或Lys；且XH不存在或者是Met、Asp或Leu-Leu-Ile，所述肽任选地包含与所述的SEQIDNo.1的序列上的位置连接的运载物部分以形成肽-运载物缀合物。2.权利要求1的肽，其中所述疏水性氨基酸选自Leu、Ile、Phe、Trp、Val、Met、Cys、Tyr和Ala。3.权利要求1的肽，其中所述运载物部分是肽、多肽、蛋白质、小分子物质、药物、单核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、反义分子、双链以及单链DNA、RNA、人造或部分人造的核酸、低分子量分子、糖、质粒、抗生素物质、细胞毒性剂、抗病毒剂或者标签或标记物分子。4.权利要求1的肽，其中：XA不存在；XB是Met或正亮氨酸；XC、XD和XE独立地是疏水性氨基酸；XF和XG独立地是疏水性氨基酸；XH不存在或者是Met；且其中XH或在XH不存在的情况下XG任选地与所述运载物部分连接。5.权利要求1的肽，其中：XA不存在；XB是Met或正亮氨酸；XC、XD和XE独立地是Ile或Leu；XF和XG是Ile；XH不存在或是Met；且其中XG任选地与所述运载物部分连接。6.权利要求1的肽，其中：XA不存在或者是Lys或Phe-Ile；XB是正亮氨酸、Lys或Asp；XC、XD和XE独立地是疏水性氨基酸；XF和XG独立地是疏水性氨基酸；XH不存在或者是Met、Asp或Leu-Leu-Ile；XA或XB和XF、XG或XH任选地连接形成内酰胺桥；且其中XH或在XH不存在的情况下XG任选地与所述运载物部分连接。7.权利要求1的肽，其中：XA不存在或者是Lys或Phe-Ile；XB是正亮氨酸、Lys或Asp；XC、XD和XE独立地是Ile或Leu；X...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·米利迪，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH