含有大分子的、引入有细胞穿透肽的药物输送载体制造技术

本发明专利技术涉及含有脂质结构或聚合物颗粒的药物输送载体，该聚合物颗粒共价键合至细胞穿透AP-GRR肽(SEQ ID NO 1)，或者由含有所述肽的肽链改性。本发明专利技术还涉及包含所述药物输送载体和包封在所述载体内的生理活性成分的组合物。本发明专利技术的药物输送载体可有效地输送难以被输送至细胞的大分子，从而改善大分子的生物利用度。

【技术实现步骤摘要】
相关申请的交叉引用本申请要求于2015年10月15日提交的申请号为10-2014-0139024的韩国申请，以及2015年9月15日提交的申请号为10-2015-0130127的韩国申请的优先权，并且基于35U.S.C.§119要求由此产生的所有益处，其全部内容通过参考引入此处。
本专利技术涉及含有大分子的、引入有细胞穿透肽的药物输送载体。
技术介绍
通常，亲水性和大的物质不能通过细胞膜屏障穿透细胞。细胞膜防止大分子，如肽、蛋白质和核酸进入细胞。即使当它们通过称为细胞膜受体的内吞作用的生理机理而进入细胞时，在与溶酶体腔融合后，它们也会被降解。因此，利用它们治疗和预防疾病还存在很多障碍。因此，需要并且有必要开发能够有效将生物分子输送至细胞内，并且没有细胞毒性的新系统。目前已经出现几种方案。具体地，细胞穿透肽引起很大的关注是因为它们可改善大分子的利用值，该大分子为例如由于低的细胞膜透过性和短的体内半衰期而难以用作药物的治疗性蛋白质和基因。能够穿透进入细胞膜的肽主要为源自蛋白质的膜穿透肽，可大致分为三类。第一类为penetratin，一种源自氨基酸序列为SEQIDNO2的同源结构域的肽(Drosophilamelanogaster,氨基酸序列:ArgGlnIleLysIleTrpPheGlnAsnArgMetLysTrpLysLys)。它是在控制触角的基因(Antennapedia)的同源结构域中发现的，其是果蝇的同源蛋白(A.Joliotetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,(1991)88,1864)。同源蛋白是一种转录因子，且具有称为含有大约60个结合至DNA的氨基酸的同源结构域的结构。第二类为位于Tat蛋白的残基49-57之间的Tat49-57肽，Tat蛋白是一种导致获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的人类免疫缺陷病毒类型1(HIV-1)的转录相关蛋白。它具有SEQIDNO3的氨基酸序列(人类免疫缺陷病毒类型1,氨基酸序列:ArgLysLysArgArgGlnArgArgArg)(P.A.Wenderetal.,PNAS(2000)97,24,13003-13008)。第三类为基于膜转位序列(MTS)或信号序列的肽。发现它由受体蛋白识别，受体蛋白帮助将由RNA新和成的蛋白质定位在合适的细胞器官的膜上，以及结合至核定位信号(NLS)的MTS穿过细胞膜并在一些细胞类型的细胞核内积累。这是在源于结合至NLS肽的信号序列，例如卡波西肉瘤成纤维细胞生长因子1(K-FGF)、人β3整合素、HIV-1gp41等的疏水区内识别的，其中NLS肽源自核转录因子κB(NF-κB)、猿猴病毒40(SV40)T抗原、或K-FGF(Y.Linetal.,J.Biol.Chem.(1996)271,5305；X.Linetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1996)93,11819；M.C.Morrisetal.NucleicAcidsRes.(1997)25,2730；L.Zhangetal.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1998)95,9184；Chaloinetal.,Biochiem.Biochim.Res.Commun.(1998)243,601；Y.Linetal.,J.Biol.Chem.(1995)270,14255)。相关技术参考文献非专利文献：A.Joliotetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,(1991)88,1864.P.A.Wenderetal.,PNAS(2000)97,24,13003-13008.Y.Linetal.,J.Biol.Chem.(1996)271,5305.X.Linetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1996)93,11819.M.C.Morrisetal.NucleicAcidsRes.(1997)25,2730.L.Zhangetal.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1998)95,9184.Chaloinetal.,Biochiem.Biochim.Res.Commun.(1998)243,601.Y.Linetal.,J.Biol.Chem.(1995)270,14255.
技术实现思路
为了容易地将不能穿透入细胞的大分子物质输送至细胞内，本专利技术涉及提供包含细胞穿透肽和生理活性成分的组合物。一方面，本专利技术提供包含药物输送载体的组合物，该药物输送载体包含脂质结构或共价键合至AP-GRR肽或含有细胞穿透肽的肽链上的聚合物颗粒，以及包封在所述载体内的生理活性成分。由于将能够有效增加膜穿透性的AP-GRR肽引入其中，根据本专利技术的一方面的药物输送载体显著地改善了作为生理活性成分的、具有大分子量的大分子物质的输送。因此，根据本专利技术一方面的药物输送载体克服了多糖、酶、肽、药物、蛋白质等大分子生理活性成分不能很好地输送至细胞内的缺陷。附图说明图1展示了包含本专利技术以及对比实施例的药物输送载体的脂质体水溶液的透射电子显微图像；图2展示了用根据本专利技术一方面的携带荧光染料的药物输送载体处理细胞，并通过FACS分析其在细胞中的含量；图3展示了根据本专利技术一方面的携带罗丹明B的药物输送载体处理细胞，并利用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察细胞；图4展示了根据本专利技术一方面的携带葡聚糖-RITC的药物输送载体处理细胞，并利用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察细胞；图5展示了表明在PBS或一般脂质体中的罗丹明B和葡聚糖-RITC通过皮肤的吸收结果的显微图像；图6展示了表明在PBS或根据本专利技术一方面的药物输送载体中的罗丹明B和葡聚糖-RITC通过皮肤的吸收结果的显微图像；图7展示了通过皮肤吸收罗丹明B的定量结果；图8展示了通过皮肤吸收葡聚糖-RITC的定量结果。具体实施方式一方面，本专利技术还涉及一种药物输送载体，该药物输送载体包含脂质结构或共价键合至细胞穿透肽或含有细胞穿透肽的肽链的聚合物颗粒。根据本专利技术的一方面，可将生理活性成分包封在脂质结构中或聚合物颗粒中。根据本专利技术的一方面，脂质结构可以是脂质构造。根据本专利技术的一方面，聚合物颗粒可以是聚合物结构或聚合物构造。根据本专利技术的一方面，生理活性成分可以具有500Da或更大的数均分子量或重均分子量。具体地，生理活性成分可以是水溶性或水不溶性大分子。根据本专利技术的一方面，当药物输送载体包含脂质结构时，生理活性成分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药物输送载体，该药物输送载体包含共价键合至细胞穿透肽或含有细胞穿透肽的肽链的脂质结构或聚合物颗粒，其中生理活性成分被包封在所述脂质结构或所述聚合物颗粒内，所述生理活性成分为数均分子量或重均分子量为500Da或更大的水溶性或水不溶性大分子，且所述细胞穿透肽为具有Gly(Arg)n Gly Tyr Lys Cys(1≤n≤20)序列的肽。

【技术特征摘要】
2014.10.15 KR 10-2014-0139024;2015.09.15 KR 10-2011.一种药物输送载体，该药物输送载体包含共价键合至细胞穿透肽或含有细胞穿透肽
的肽链的脂质结构或聚合物颗粒，其中
生理活性成分被包封在所述脂质结构或所述聚合物颗粒内，
所述生理活性成分为数均分子量或重均分子量为500Da或更大的水溶性或水不溶性
大分子，且
所述细胞穿透肽为具有Gly(Arg)nGlyTyrLysCys(1≤n≤20)序列的肽。
2.根据权利要求1所述药物输送载体，其特征在于，所述水溶性或水不溶性大分子具
有的数据分子量或重均分子量为5,000Da或更大。
3.根据权利要求2所述的药物输送载体，其特征在于，所述水溶性或水不溶性大分子
具有的数据分子量或重均分子量为8,000Da或更大。
4.根据权利要求1所述的药物输送载体，其特征在于，所述n满足3≤n≤9。
5.根据权利要求1所述的药物输送载体，其特征在于，所述序列为SEQIDNO1(Gly
ArgArgArgArgArgArgArgArgArgGlyTyrLysCys)序列。
6.根据权利要求1所述药物输送载体，其特征在于，所述脂质结构或所述聚合物颗粒
包含双亲性聚合物。
7.根据权利要求6所述的药物输送载体，其特征在于，所述细胞穿透肽或包含细胞穿
透肽的所述肽链共价键合至所述双亲性聚合物。
8.根据权利要求6所述的药物输送载体，其特征在于，所述双亲性聚合物是选自具有
连接至透明质酸侧链的烷基化透明质酸、化学式1的聚(甲基丙烯酸-共-正烷基甲基丙烯酸
酯)无规共聚物、和化学式2的聚(甲基丙烯酸羟乙酯-共-正烷基甲基丙烯酸酯)无规共聚
物的一种或多种物质：
化学式1化学式2其中
7≤n≤22，且
x:y的摩尔比为90:10至50:50。
9.根据权利要求6所述的药物输送载体，其特征在于，所述药物输送载体包含占所述
脂质结构或所述聚合物颗粒和所述双亲性聚合物的总重量的1-50wt％的所述双亲性聚合物和
50-99wt％的所述脂质结构或所述聚合物颗粒。
10.根据权利要求6所述的药物输送载体，其特征在于，所述双亲性聚合物具有的数
均分子量为5,000-200,000Da。
11.根据权利要求1所述的药物输送载体，其特征在于，所述药物输送载体包含脂质
结构，并进一步包含胆固醇衍生物。
12.根据权利要求11所述的药物输送载体，其特征在于，所述脂质结构包含作为脂质
结构的二油基磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺
(DSPE-PEG-Mal)复合物中的一种或多种物质。
13.根据权利要求12所述的药物输送载体，其特征在于，所述药物输送载体包含摩尔
比为1.0-2.0:1.0-2.0:1.0-3.0:0.01-1.0的二油基磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、胆固醇衍生物
和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(DSPE-PEG-Mal)复合物。
14.根据权利要求1所述的药物输送载体，其特征在于，所述脂质结构为脂质体或乳
液。
15.根据权利要求14所述的药物输送载体，其特征在于，所述脂质体或所述乳液的脂
质成分为具有C12-C24脂肪酸链的磷脂或硝基脂。
16.根据权利要求15所述的药物输送载体，其特征在于，所述磷脂为选自以下的一种
或多种物质：天然磷脂，例如蛋黄卵磷脂(磷脂酰胆碱)、大豆卵磷脂、溶血卵磷脂、鞘磷脂、
磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、双磷脂酰甘油、心磷脂
和缩醛磷脂；通过一般方法由所述天然磷脂获得的加氢产物；合成磷脂，例如双十六烷基磷
酸酯、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二油酰基磷脂酰乙醇胺、
二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、桐酰磷脂酰胆碱、
桐酰磷脂酰乙醇胺和桐酰磷脂酰丝氨酸，及其水解产生的脂肪酸混...

【专利技术属性】
技术研发人员：林亨峻，朴录贤，崔尤利，裴日弘，高明辰，俞载元，申松锡，李存恒，
申请(专利权)人：株式会社爱茉莉太平洋，
类型：发明
国别省市：韩国;KR