本发明专利技术涉及一种用于天然存在的聚阴离子类；尤其是针对核酸类和葡糖氨基聚糖类的有控解聚的新方法。这种方法是以通过在亚铁盐的存在下过氧化氢的作用形成自由基系统为基础的。作用自由基清除剂可使该反应迅速停止在任一预先选择的水平上。（*该技术在2007年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一个用于有控解聚天然存在的聚阴离子，尤其是针对核酸类和葡糖氨基聚糖类的新方法。特别是本方法是用于对难以被解聚的肝素和硫酸皮肤素(DS)进行有控解聚的。本专利技术包含从天然聚阴离子类解聚所得的产品及当这些产品是用本专利权限范围的方法得到时，含有这些产品的药物组合物。当对实验模型或人类用口服或不经肠道的方法服药时，一些聚阴离子类的生物利用率和生物学效应取决于平均分子量(MW)的这一实验观察结果越来越引起人们的兴趣。例如，商品肝素由于当它被用作辅助因子时，对一种有效的蛋白酶禁阻剂[抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)]由于其激活性能，因而是一种众所周知的抗凝(血)剂。肝素是一种硫酸化的葡糖氨基聚糖，平均分子量为12，000D(道尔顿)，相当于约20个二糖单位并且在凝血过程中，它对5种名为FⅫ、FⅪ、FⅨ、FⅩ、FⅡ的因子起禁阻作用。用解聚方法可能得到分子量低于起始肝素的碎片。最近，发现平均分子量为4000～6000D的肝素片段(较低分子量的肝素)对一些因子起禁阻作用，而对其它因子不起禁阻作用，特别对一些在血(栓)性静脉类发作中的关键因子如FX不起禁阻作用。因此可以认为低平均分子量的肝素可作为比商品肝素具有较小出血危险的有效的抗血栓形成剂。已经观察到低平均分子量肝素的血液中的半寿期比商品肝素的长。因此，可以避开逐滴灌输和回缩现象实现一种长周期的疗法。低平均分子量肝素的另一个优点是不会干扰血小板凝集。这是一种不希望有的影响，以前曾引起病人在肝素服药期间严重的血栓血细胞减少症。可以描述另一个对于聚阴离子的与分子量有关的性质的例子，即与解聚有关的脱氧核糖核酸(DNA)的性质DNA由于它的平均分子量(高于106D)而不能经非肠道途径使用，但是在它被解聚后，它显示了很有意义的性质。事实上，平均分子量为25000～70000D的低聚脱氧核糖核苷酸(defibrotide)显示出抗超纤维蛋白溶解作用和免疫激发效应及预防梗塞的作用。由于很难实行天然聚阴离子类的有控的解聚，因此，进行许多试验来研究对于这些方法的合适操作条件。在实际操作中，有许多理由说明聚阴离子类的有控的解聚是一项困难的任务a)化学试制及目前所用的操作(亚硝酸、具塔-消除(bethaelimination)，氧化、酸或碱水解)会改变受影响键附近或其它区域中的分子结构而这对活性来说十分关键，并会因而产生可被认为是新的化合物而不是低聚物的进一步的物质。b)当必须把解聚停止在一个预先选定的水平上时，酶很难被控制。进一步说，有些聚阴离子类，如肝类、硫酸皮肤素和DNA不易受现有酶的影响。c)物理的或化学-物理分馏方法，例如用分子筛、超滤或选择性沉淀方法不适宜于大规模的经济的生产。因此，本专利技术的目的是通过化学反应模拟在动物组织(特别是在玻璃体尤其是软骨中)观察和研究出的导至透明质酸(HA)解聚的一些条件。在体内HA是一种在有连接作用的组织中发现的聚阴离子，被引发氧化-还原反应的一种自由基解聚。自由基(过氧化物和羟基)是由生物化学系统产生的，如在氧气和抗氧化载体如半胱氨酸、谷胱甘肽或抗坏血酸的存在下的黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶。在病理条件如局部炎症、内障、关节病及可能还有动脉粥样硬化的发作和发展中由自由基引发的天然大分子的裂解被认为是头等重要的。这种裂解是一种真正的过氧化水解(peroxydolysis)，除了引起碳-氧键的水解导至HA的解聚外不会引起分子内的变化。在一个化学实验室中模拟氧化-还原解聚的重要性是显而易见的，同样，利用自由剂消除剂使该反应迅速完全地停止在任何预定的水平上也是十分重要的。本专利技术方法的特征在于在作为自由基产生系统的催化有效量的亚铁盐和作为自由基清除剂的乙醇的存在下在加气反应(aereated)条件中使用过量的过氧化氢(化学计量数的2～5倍)以及用本方法从解聚后的天然聚阴离子类得到的产物。操作的pH为中性或微酸性[pH＝4.0～7.0]。操作温度的范围(温度上限为100℃)[20℃和80℃之间]允许稳定反应速度，主要是为了在过程控制中用粘度测定法测定平均分子量。这个方法一般可用于天然聚阴离子类的有控的化学解聚。尤其是，用这个方法可达到核酸和葡糖氨基聚糖如肝素和DS的有控解聚，而用酶的方式是难以使它们解聚的。下面的例子揭示了这个方法而并不是限止本申请的。例1把20克美国药典钠肝素溶于100毫升水中，在搅拌下加入4克氢型阳离子树脂(如AmberliteRIR-120)。一当pH降低到4.0～4.5时，把树脂滤出并把滤液收集在一个圆底烧瓶中，在一个水浴中及回流下加热滤液至80℃，然后在搅拌下把它加入通过混合4.0毫升30%H2O2和0.2毫升亚铁盐溶液(溶液A为与1.5Fe SO4·7H2O加入100毫升水中)而制备好的4.2毫升反应剂中。把其保持在80℃并经录其pH值。在预先设定的几个时间，从烧瓶中收集多份20毫升样品。对每份样品，在搅拌下迅速加入几滴0.1MNaOH以使pH增加到7.0，0.5毫升的NaCl溶液，逐滴加入25毫升乙醇及3.3毫升20% NaCl溶液。收集沉淀，用乙醇洗涤之，然后放入丙酮中。在真空烘箱中于50～60℃下把它干燥过夜，而且用粘度测定法控制这些样品的平均分子量及效能。结果总结在下表中时间 pHMW效能IU/mg % 残留H2O2(分)- 4.6 12，000 135 10030 4.3 6，000 82 6460 4.0 4，000 48 58120 3.6 ＜2，500 20 54180 3.5 ＜2，500 ＜20 47300 3.0 ＜2，500 ＜20 44例2把20克钠肝素于微酸性的pH＝5.6下溶于100毫升水中。把溶液在一个水浴中于回流下加热到50℃。然后加入通过混合4.0毫升30%H2O2和0.6毫升溶液A(见例1)制备好的4.6毫升的反应剂。把反应混合物保持在50℃并记录pH。在预先设定的几个时间内从烧瓶中收集几份20毫升样品。然而如例1那样处理样品。结果总结于下表中;时间 pHMW效能 % 残留 H2O2(分) IU/mg- 5.6 12，000 135 10030 5.3 10，000 114 9660 4.9 8，000 109 90120 4.8 7，000 75 83180 4.4 5，000 56 71- - - - -480 3.4 ＜2，500 ＜10 3例3把20g具有下列组成的天然存在的硫代粘多糖混合物20% 硫酸软骨素 (CHS)，50% 硫酸皮肤素 (DS)，30% 乙酰肝素硫酸盐 (HS)，(pH＝4.0 80℃下，30ppm二价铁)，进行如例1那样的处理，收集样品并纪录pH，评定其特性粘度和电泳。结果总结于下表中时间 pH 特性粘度 电泳(分) (dl/g) CHS DS HS- 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于天然存在聚阴离子类，特别是核酸类和葡糖氨基聚糖类的以自由基的产生（Ｏ↑［－］↓［２］和↓［０］Ｈ）为基础的有控解聚的方法，其中，自由基通过使过氧化氢和亚铁盐反应得到。
【技术特征摘要】
AR 1986-8-5 304,7991.一种用于天然存在聚阴离子类，特别是核酸类和葡糖氨基聚糖类的以自由基的产生(O-2和OH)为基础的有控解聚的方法，其中，自由基通过使过氧化氢和亚铁盐反应得到。2.根据权利要求1的一种方法，其中过氧化氢是过量的，为化学计量数的2～5倍。3.根据权利要求1的一种方法，其中两价铁盐以催化有效量加入。4.根据权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：维克托，鲍特斯坦，德茨，里卡多，雨果，多曼尼柯，弗南多，富歇，
申请(专利权)人：阿乔凯有限公司，
类型：发明
国别省市：AR[阿根廷]
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