本发明专利技术提供了一类新的肽核酸衍生物，其示出良好的细胞穿透以及对核酸的强结合亲和性。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及经化学修饰以显示出良好细胞穿透和强核酸亲和性的肽核酸衍生 物。附图简述附图说明图1提供了由反相HPLC纯化Oligo 17之前和之后的HPLC层析谱。图2提供了 Oligo 17纯化批次的MALDI-TOF质谱。图3提供了 Oligo 17针对互补或错配DNA的随温度变化的光吸收图。图4 (a)和4 (b)提供了分别用Oligo 1和Oligo 2以5 μ M对HeLa细胞处理之后 1、2、3和24小时的共聚焦显微镜图像(63 X物镜)。图5 (a)禾Π 5(b)提供了分别用OKgo 6和OKgo 7以2.5 μ M对MCF-7细胞处理之 后0.5和1小时的共聚焦显微镜图像(63Χ物镜)。图6 (a)和6 (b)提供了分别用Oligo 1和Oligo 6以1 μ M对HeLa细胞处理之后6或者24小时的共聚焦显微镜图像(40Χ物镜)。图7 (a)和7 (b)提供了分别用Oligo 21和Oligo 28以2 μ M对JAR细胞处理之后24小时的共聚焦显微镜图像(40Χ物镜)。图7 (C)和7 (d)提供了分别用Oligo 21和Oligo 28以,2 μ M对Α549细胞处理之 后24小时的共聚焦显微镜图像(40Χ物镜)。图7 (e)和7 (f)提供了分别用Oligo 21和Oligo 28以2 μ M对HeLa细胞处理之后12小时的共聚焦显微镜图像(40Χ物镜)。图7 (g)提供了用Oligo 21以2 μ M对HeLa细胞处理之后24小时的共聚焦显微 镜图像(40Χ物镜)。图8 (a)、8 (b)和 8 (C)提供 了在用 2 μ M 的 Oligo 22 分别对 HeLa、A549 和 JAR 细胞处理之后24小时的共聚焦显微镜图像(40X物镜)。图9提供了 JAR细胞的蛋白印迹结果，所沭细胞用5 μ M或者10 μ MOligo 9处 理、5 μ M或者10 μ M OligQ 10处理、用5μ M或者10μ M的每个寡聚物共处理，以及空白(无寡聚物处理)。图10是本专利技术PNA寡聚物的代表性结构。
技术介绍
寡核苷酸已经用于许多不同生物学目的，包括基因表达的反义抑制、PCR(聚合 酶链反应)、通过基因芯片进行的诊断分析等等。由于寡核苷酸以序列特异性的方式与 核酸如DNA和RNA相互作用，因此其在可预测地调节细胞内涉及DNA或者RNA的生 物过程时是非常有用处的。然而与小分子药物不同，寡核苷酸不易于穿透哺乳动物细胞 膜，因此除非对其进行适当修饰或者配制以易于穿透浆膜，否则几乎不能影响细胞内生 物过程。作为药物靶标的蛋白质:蛋白质介导许多不同的细胞功能。并不令人吃惊的是 可发现目前市场上大多数药物通过调节蛋白质功能而显示治疗活性。例如，非留体类抗炎药物阿司匹林抑制称作环加氧酶的酶而发挥其抗炎活性。氯沙坦结合并拮抗称作血管 紧张素II受体的跨膜受体的功能而发挥其抗高血压活性。罗格列酮(Rosiglitazone)选择 性激活称作过氧化物增殖物激活受体Y (PPARy)的细胞内受体而引发其抗糖尿病活性。 依那西普(Etanercept)是一种融合蛋白，其结合称作肿瘤坏死因子_ α (TNF- α )的细胞因 子并且中和TNF-α的生物活性从而发挥其抗风湿活性。赫赛汀(Herceptin)是通过选择 性结合在某些类型乳腺癌细胞中过表达的erbB2治疗乳腺癌的单克隆抗体。蛋白质合成的反义抑制蛋白质由DNA(2-脱氧核糖核酸)编码。在对细胞刺 激的应答中，DNA在细胞核中被转录产生前-mRNA(前信使核糖核酸)。前_mRNA的 内含子部分被酶剪接掉而产生mRNA(信使核糖核酸)，然后其被易位至胞质区室。在 细胞质中，称作核糖体的翻译机制的复合物结合mRNA并随着其扫描沿mRNA编码的遗 传信息而进行蛋白质合成(Biochemistry vol 41, 4503-4510，2002 ； Cancer Res.vol 48， 2659-2668, 1988)。以序列特异性方式结合至mRNA或者前-mRNA的寡核苷酸被称作反义寡核苷酸 (AO)。AO在细胞质中可以紧密结合mRNA并且抑制由沿着mRNA的核糖体进行的蛋白 质合成。AO需要存在于细胞内以抑制其靶蛋白质的合成。AO可以紧密结合细胞核中 前-mRNA并且影响前-mRNA的剪接，产生改变了序列的mRNA及因此而改变了的蛋白质。0IoB0 ι1ONAB:核铖基非天然寡核苷酸DNA或者RNA的寡核苷酸易于被内源核酸酶降解,限制了 其治疗用途。迄今为止，已经开发并深入研究了许多类型的非天然寡核苷酸(Clin.Exp. Pharmacol.Physiol.vol 33, 533-540，2006)。其中一些显示出与 DNA 和 RNA 相比更强的 代谢稳定性。上面提供的是一些具代表性的非天然寡核苷酸的化学结构。这些寡核苷酸 可预测地如DNA或者RNA —样地结合互补核酸。硫代磷酸寡核苷酸(PTO)是一种DNA类似物，其每个单体的主链磷酸氧原子之 一由硫原子所取代。这种小的结构改变使得PTO对于核酸酶降解具有相当抗性(Arai.Rev. Biochem.vol 54，367-402，1985)。回顾PTO与DNA的结构相似性，它们都不易穿透大多数类型哺乳动物细胞中 的细胞膜。然而，对于一些大量表达DNA转运蛋白的细胞，DNA和PTO显示出良 好的细胞穿透。全身性施用的PTO已知易于分布至肝和肾(NucleicAcids Res.vol 25，3290-3296, 1997)。为了促进在体外PTO的细胞穿透，脂转染法已被广泛实施。然而，脂转染物理 性地改变了细胞膜，引起细胞毒性，因此对于长期治疗性用途并不理想。在过去的二十年，对反义PTO及PTO变体进行了临床评估以治疗癌症、免疫疾 病、代谢疾病等(Biochemistry vol 41，4503-4510，2002 ； Clin.Exp.Pharmacol.Physiol.vol 33，533-540，2006)。许多这种反义药物候选物并未成功，部分由于PTO的不良细胞穿 透所致。为了克服不良的细胞穿透，需要高剂量施用PTO以达到治疗活性。然而，已 知PTO与剂量依赖性毒性相关，如延长的凝血时间、补体激活、肾小管肾病、Kupffer细 胞激活以及免疫刺激包括脾肿大、淋巴增生、单核细胞侵润(Clin.Exp.Pharmacol.Physiol. vol 33，533-540, 2006)。已经发现许多反义PTO对于具有显著的来自肝或肾的影响的疾病显示出适当的 临床活性。ISIS-301012(mipomersen)是PTO类似物，其抑制涉及LDL胆固醇转运的 蛋白质apoB-100的合成。Mipomersen很可能由于其在肝脏中的优先分布而在某些动脉 硬化患者群中显示出适当的临床活性(www.medscape.com/viewarticle/556073 于2009 年2月19日访问)。ISIS-113715是反义PTO类似物，其抑制合成蛋白酪氨酸磷酸酶 IB(PTPlB)，且发现其在II型糖尿病患者中显示出治疗活性(Curr.Opin.Mol.Ther.vol 6， 331-336， 2本文档来自技高网...
【技术保护点】
式Ⅰ所示肽核酸衍生物或者其药物可接受的盐： ＊＊＊ 式Ⅰ 其中， Ｎ是等于或者大于５的整数； Ｓ↓［１］，Ｓ↓［２］，……，Ｓ↓［ｎ－１］，Ｓ↓［ｎ］，Ｔ↓［１］，Ｔ↓［２］，……，Ｔ↓［ｎ－１］和Ｔ↓［ｎ］独立地表示氢基（ｈｙｄｒｉｄｏ）、氘基（ｄｅｕｔｅｒｉｄｏ）、取代或者未取代的烷基、或者取代或者未取代的芳基； Ｘ和Ｙ独立地表示独立地表示氢基、氘基、羟基、取代或者未取代的烷氧基、取代或者未取代的芳氧基、取代或者未取代的氨基、取代或者未取代的烷基、取代或者未取代的酰基、取代或者未取代的磺酰基、或者取代或者未取代的芳基； Ｚ表示氢基、氘基、羟基、取代或者未取代的烷氧基、取代或者未取代的芳氧基、取代或者未取代的氨基、取代或者未取代的烷基、或者取代或者未取代的芳基； Ｂ↓［１］，Ｂ↓［２］，……，Ｂ↓［ｎ－１］和Ｂ↓［ｎ］独立地选自天然核碱基，包括腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶，以及非天然核碱基；并且， Ｂ↓［１］，Ｂ↓［２］，……，Ｂ↓［ｎ－１］和Ｂ↓［ｎ］中至少一个独立地表示具有取代或者未取代的氨基的非天然核碱基，所述氨基与负责其适当核碱基配对性质的部分共价连接。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑信，李钟旭，金希娟，朴贤真，金美兰，
申请(专利权)人：CTI生物公司，
类型：发明
国别省市：KR
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