哑铃结构寡核苷酸、包含其的核酸扩增用引物及利用该引物的核酸扩增方法技术

技术编号:16047227 阅读:124 留言:0更新日期:2017-08-20 06:29
本发明专利技术涉及哑铃结构寡核苷酸(dumbbell structure oligonucleotide,DSO)、包含其的核酸扩增用引物及利用该引物的核酸扩增方法,更具体而言,涉及一种在进行聚合酶链反应中,能够在每个第一周期的与模板结合之前排除非特异性扩增产物的利用了哑铃结构寡核苷酸的多重基因扩增及单核苷酸多态性分析方法。本发明专利技术在聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)时,利用哑铃结构寡核苷酸(dumbbell structure oligonucleotide,DSO),在常温下抑制非目的扩增产物,因而通过减少非特异扩增产物,能够高效提高敏感度和特异度,改进基因扩增方法,所述哑铃结构寡核苷酸通过附加任意碱基序列和3`‑末端模板依赖型特异碱基序列以及使该两种碱基序列连接的普适碱基对而生成,并且将所述哑铃结构寡核苷酸的5'‑末端寡核苷酸和3`‑末端寡核苷酸设计成在每个第一周期的与模板结合之前互补结合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】哑铃结构寡核苷酸、包含其的核酸扩增用引物及利用该引物的核酸扩增方法
本专利技术涉及哑铃结构寡核苷酸(dumbbellstructureoligonucleotide,DSO)、包含其的核酸扩增用引物及利用该引物的核酸扩增方法,更具体而言,涉及一种在进行聚合酶链反应中,能够在每个第一周期的与模板结合之前排除非特异性扩增产物的利用了哑铃结构寡核苷酸的多重基因扩增及单核苷酸多态性分析方法。
技术介绍
现在,研究人员为了获得基因试样而最普遍使用的方法是利用了DNA聚合酶的聚合酶链反应方法。聚合酶链反应中所利用的寡核苷酸被设计成结合于模板DNA相反一侧链。所述方法任意调节、设计能够与模板DNA结合的寡核苷酸的长度和碱基序列,从而具有能够只使靶基因的所需部位准确地扩增的优点,相反,由于一次反应只能使一个目的基因扩增,在要扩增的目的基因数量较多的情况下,存在需要重复执行同一作业的缺点。为了解决这种问题,正在致力于开发将两种以上的模板基因和与各个模板基因相应的引物混合成为一体而进行聚合链反应的诸多方法,而且,为了改善引物的结合特异性并据此能够实现产物的扩增而开发了许多方法。诸如降落PCR(Donet本文档来自技高网...
哑铃结构寡核苷酸、包含其的核酸扩增用引物及利用该引物的核酸扩增方法

【技术保护点】
一种以如下通式表示的哑铃结构寡核苷酸,通式:5'‑Ap‑Bq‑Cr‑3'其中,所述A代表包含具有与所述3'‑末端的连续碱基序列互补的碱基序列的核甘酸的5'‑低Tm特异性部位,所述B代表包含具有普适碱基的核甘酸的切割部位,所述C代表包含具有与模板核酸的特定连续碱基序列互补的碱基序列的核甘酸的3'‑高Tm特异性部位,所述p、q及r代表核甘酸数目。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种以如下通式表示的哑铃结构寡核苷酸,通式:5'-Ap-Bq-Cr-3'其中,所述A代表包含具有与所述3'-末端的连续碱基序列互补的碱基序列的核甘酸的5'-低Tm特异性部位,所述B代表包含具有普适碱基的核甘酸的切割部位,所述C代表包含具有与模板核酸的特定连续碱基序列互补的碱基序列的核甘酸的3'-高Tm特异性部位,所述p、q及r代表核甘酸数目。2.根据权利要求1所述的哑铃结构寡核苷酸,其特征在于,所述p包含3~5个核甘酸。3.根据权利要求1所述的哑铃结构寡核苷酸,其特征在于,所述q包含3~5个核甘酸。4.根据权利要求1所述的哑铃结构寡核苷酸,其特征在于,所述r包含18~30个核甘酸。5.根据权利要求1所述的哑铃结构寡核苷酸,其特征在于,所述5'-低Tm特异性部位的Tm低于所述3'-高Tm特异性部位的Tm。6.根据权利要求1所述的哑铃结构寡核苷酸,其特征在于,所述切割部位的Tm低于所述5'-低Tm特异性部位的Tm及所述3'-高Tm特异性部位的Tm。7.根据权利要求1所述的哑铃结构寡核苷酸,其特征在于,所述5'-低Tm特异性部位的Tm为10~30℃。8.根据权利要求1所述的哑铃结构寡核苷酸,其特征在于,所述切割部位的Tm为3~10℃。9.根据权利要求1所述的哑铃结构寡核苷酸,其特征在于,所述3'-高Tm特异性部位的Tm为50~65℃。10.根据权利要求1所述的哑铃结构寡核苷酸,其特征在于,所述普适碱基选自由脱氧肌苷、肌苷、7-脱氮-2'-脱氧肌苷、2-氮杂-2'-脱氧肌苷、2'-OMe肌苷、2'-F肌苷及它们的组合所构成的组中。11.根据权利要求1所述的哑铃结构寡核苷酸,其特征在于,所述哑铃结构寡核苷酸选自由序列号1至序列号35所构成的组中。12.一种包含以如下通式表示的哑铃结构寡核苷酸的核酸扩增用引物,通式:5'-Ap-Bq-Cr-3'其中,所述A代表包含具有与所述3'-末端的连续碱基序列互补的碱基序列的核甘酸的5'-低Tm特异性部位,所述B代表包含具有普适碱基的核甘酸的切割部位,所述C代表包含具有与模板核酸的特定连续碱基序列互补的碱基序列的核甘酸的3'-高Tm特异性部位,所述p、q及r代表核甘酸数目。13.根据权利要求12所述的核酸扩增用引物,其特征在于,所述p包含3~5个核甘酸。14.根据权利要求12所述的核酸扩增用引物,其特征在于,所述q包含3~5个核甘酸。15.根据权利要求12所述的核酸扩增用引物,其特征在于,所述r包含18~30个核甘酸。16.根据权利要求12所述的核酸扩增用引物,其特征在于,所述5'-低Tm特异性部位的Tm低于所述3'-高Tm特异性部位的Tm。17.根据权利要求12所述的核酸扩增用引物,其特征在于,所述切割部位的Tm低于所述5'-低Tm特异性...

【专利技术属性】
技术研发人员:林成植金渊洙
申请(专利权)人:精确诊断有限公司
类型:发明
国别省市:韩国,KR

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