一种杀虫蛋白及其核苷酸序列和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种杀虫蛋白，特别涉及一种对蚊类有杀虫活性的杀虫蛋白。其氨基酸序列为如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明专利技术还提供了能够翻译为如本发明专利技术的杀虫蛋白的核苷酸序列，以及包括该核苷酸序列的转基因微生物和/或转基因植物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种杀虫蛋白，特别涉及一种对蚊类有杀虫活性的杀虫蛋白。
技术介绍
蚊类属于昆虫纲、双翅目，蚊总科。其主要分为卫生害虫和农业害虫，例如，重要的卫生害虫蚊类有按蚊(Anopheles)、库蚊(Culex)、伊蚊(Aedes)；重要的农业害虫蚊类有眼蕈蚊(Sciaridae)，其在全国各地均有分布。卫生害虫可传播疾病的病原体以及传播鼠疫、伤寒、疟疾等流行病，严重威胁人们的生命安全，因此其对人类危害毋庸置疑。而农业害虫也深刻影响着人类的生活，以韭菜迟眼蕈蚊(Bradysiaodoriphaga)为例，其又名韭蛆、黄脚蕈蚊，属双翅目，眼蕈蚊科，主要危害韭菜、大葱、洋葱、小葱、大蒜等百合科蔬菜，偶尔也危害莴苣、青菜、芹菜等，是葱蒜类蔬菜的主要害虫之一，在全国各地均有分布。韭菜迟眼蕈蚊的幼虫生活在土壤表层，群集在韭菜地下部的鳞茎和柔嫩的茎部蛀食为害。初孵幼虫先为害韭菜叶鞘基部和鳞茎的上端；春、秋季主要为害嫩茎，导致根茎腐烂。受害韭菜地上部分生长细弱，叶片发黄萎蔫下垂，最后韭叶枯黄死亡。夏季气温高时，幼虫向下移动，为害韭菜鳞茎，致使整个鳞茎腐烂，严重时整墩韭菜枯死。对于韭菜迟眼蕈蚊的防治方法主要有物理防治(糖醋液、臭氧等)和化学防治。由于物理防治存在操作繁琐、防治效果受环境影响大等缺点，生产上主要采用农药灌根等化学手段进行防治，但是由于韭蛆繁殖快、隐蔽性强、防治难度大，导致菜农不规范或过量、甚至违规使用禁用的高毒农药进行防治，导致农药残留超标、污染环境、危害人类健康以及杀害有益鸟类等问题。另一方面，长期大量使用化学农药增强害虫抗药性、污染环境、杀伤鸟类、造成害虫再度猖獗的恶性循环，不能达到对害虫种群的有效控制，同时造成韭菜农残超标，使消费者健康受到威胁。近年来毒韭菜事件频发，如：2004年“香河毒韭菜进京事件”、2010年“青岛毒韭菜”和2011年河南南阳“毒韭菜事件”，连续的毒韭菜曝光事件，使得消费者“谈韭色变”，严重影响了菜农的经济利益和消费者的食品安全。为了减少化学农药对环境的污染及对人民健康的威胁，筛选对双翅目害虫，特别是蚊类有高致病性的生防微生物是防治该类害虫的有效方法和重要措施。
技术实现思路
本专利技术之一提供了一种杀虫蛋白，其氨基酸序列为如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。本专利技术之二提供了一种杀虫蛋白，其氨基酸序列为与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的一致性在78％以上，且与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的一致性在95％以上，且与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；特别优选其氨基酸序列为与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的一致性在99％以上，且与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列。本专利技术之三提供了一种核苷酸序列，所述核苷酸序列为能够翻译为如本专利技术之一和/或本专利技术之二所述的杀虫蛋白的核苷酸序列。在一个具体实施例中，所述核苷酸序列为如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列。本专利技术之四提供了一种组合物，其包括本专利技术之一和/或本专利技术之二所述的杀虫蛋白。在本专利技术中，所述组合物可以不包括保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.9763的野生菌株。在一个具体实施例中，能够翻译为如所述组合物中的本专利技术之一的杀虫蛋白的核苷酸序列为如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列。本专利技术之五提供了一种含有本专利技术之三的核苷酸序列，且能产生本专利技术之一和/或本专利技术之二的杀虫蛋白的转基因微生物。例如所述杀虫蛋白的氨基酸序列为如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。或所述杀虫蛋白氨基酸序列为与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的一致性在78％以上，且与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的一致性在95％以上，且与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；特别优选其氨基酸序列为与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的一致性在99％以上，且与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列。在一个具体实施例中，所述转基因微生物包括芽孢杆菌(Bacillus)、假单胞菌(Pseudomonas)、肠杆菌(Escherichia)和酵母(Saccharomyces)中的至少一种。在一个优选的具体实施例中，所述芽孢杆菌包括苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)和蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)中的至少一种；所述假单胞菌包括荧光假单胞杆菌(Pseudomonasfluorescens)；所述肠杆菌包括大肠杆菌(Escherichiacoli)。本专利技术之六提供了根据本专利技术之三的核苷酸序列在制备转基因植物中的应用，其中，所述转基因植物能够产生根据本专利技术如上的杀虫蛋白。例如其氨基酸序列为如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。或其氨基酸序列为与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的一致性在78％以上，且与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的一致性在95％以上，且与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；特别优选其氨基酸序列为与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的一致性在99％以上，且与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列。在一个优选的具体实施例中，所述转基因植物包括百合科(Liliaceae)、姜科(Zingiberaceae)、菊科(Compositae)、葫芦科(Cucurbitaceae)和伞形科(Umbelliferae)中的至少一种。在一个优选的具体实施例中，所述百合科植物包括葱属(Allium)；更优选包括韭菜(Alliumtuberosum)、大葱(Alliumfistulosum)、小香葱(Alliumascalonicum)、洋葱(Alliumcepa)和大蒜(Alliumsativum)中的至少一种。在一个优选的具体实施例中，所述菊科包括莴苣属(Lactuca)；优选包括结球生菜(LactucasativaL.var.capitataL)、直立生菜(Lactucasativavar.cromanaHort)和莴苣(Lactucasativa)中的至少一种。在一个优选的具体实施例中，所述葫芦科包括葫芦属(Lagenaria)、黄瓜属(Cucumis)、冬瓜属(Benincasa)、南瓜属(Cucurbita)、丝瓜属(Luffa)、西瓜属(Citrullus)和甜瓜属(Cucumis)中的至少一种；优选包括葫芦(Lagenariasiceraria)、黄瓜(CucumissativusL.var.sativus)、冬瓜(Benincasahispida)、南瓜(Cucurbitamoschata)、丝瓜(Luffacylindrica)、西瓜(Cit本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杀虫蛋白，其氨基酸序列为如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种杀虫蛋白，其氨基酸序列为如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。2.一种杀虫蛋白，其氨基酸序列为与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的一致性在78％以上，且与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的一致性在95％以上，且与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；特别优选其氨基酸序列为与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的一致性在99％以上，且与如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列。3.一种核苷酸序列，所述核苷酸序列为能够翻译为如权利要求1或2所述的杀虫蛋白的核苷酸序列。4.根据权利要求3所述的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列为如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列。5.一种组合物，其包括如权利要求1或2所述的杀虫蛋白；优选能够翻译为所述杀虫蛋白的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。6.一种含有根据权利要求3或4所述的核苷酸序列，且能产生如权利要求1或2所述的杀虫蛋白的转基因微生物。7.根据权利要求6所述的转基因微生物，其特征在于，所述转基因微生物包括芽孢杆菌(Bacillus)、假单胞菌(Pseudomonas)、肠杆菌(Escherichia)和酵母(Saccharomyces)中的至少一种；优选所述芽孢杆菌包括苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)和蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)中的至少一种；所述假单胞菌包括荧光假单胞杆菌(Pseudomonasfluorescens)；所述肠杆菌包括大肠杆菌(Escherichiacoli)。8.根据权利要求3或4所述的核苷酸序列在制备转基因植物中的应用，其中，所述转基因植物能够产生根据权利要求1或2所述的杀虫蛋白；所述转基因植物包括百合科(Liliaceae)、姜科(Zingiberaceae)、菊科(Compositae)、葫芦科(Cucurbitaceae)和伞形科(Umbelliferae)中的至少一种；优选所述百合科包括葱属(Allium)；更优选包括韭菜(Alliumtuberosum)、大葱(Alliumfistulosum)、小香葱(Alliumascalonicum)...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋健，杜立新，曹伟平，王金耀，冯书亮，
申请(专利权)人：河北省农林科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：河北;13