使用重组活细胞来检测外源性物质的检测方法及其装置以及用于实施该检测方法的试剂盒制造方法及图纸

用于外源性物质的已知的检测方法是标记活细胞的基因序列，并以空间分辨的方式检测在外源性物质的影响下重组细胞内稳定表达的标记融合构建体的易位。根据本发明专利技术的检测方法利用重组活细胞的动态表达行为并以整体方式检测。优选使用细胞固有防御系统，其中重组细胞(19)中的基因序列ai‑mi作为优选的方法在试剂盒中来实施检测方法编码转运蛋白Ai包括荧光标记蛋白Mi作为融合构建体Ai‑Mi。细胞固有防御系统在外源性物质的影响下被激活。将外源性物质运输出活细胞(19)的转运蛋白Ai以增长的方式来表达。与转运蛋白Ai一起，标记蛋白Mi也以增长的方式来表达，其被光学检测并且能够得到关于外源性物质(03)的相应结论。检测方法优选地通过遗传修饰的水生生物(06)或其活细胞(19)的装置(04)来实施，其永久暴露在水生系统(01)中水可渗透的栖息箱(05)中技术设备(02)附近。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用重组活细胞来检测外源性物质的检测方法及其装置以及用于实施该检测方法的试剂盒
本专利技术涉及使用重组活细胞来检测外源性物质的检测方法。在该方法中，使用具有至少一个基因序列区段ai的重组细胞，所述基因序列区段ai通过与至少一种标记蛋白基因mi融合来重组修饰。外源性物质对表达的基因融合产物ai-mi的影响通过存在的标记蛋白基因mi来检测。本专利技术还涉及一种装置和一种试剂盒，所述试剂盒包括基于重组活细胞来实施检测方法的方法。外源性物质(外源性物质)是指对于生物体的生物代谢循环是外来的化学化合物。它们包含在天然物质中不以该形式存在或仅极少以该形式存在的部分结构元素中。在自然界中，外源性物质经常是人为来源的，例如合成的植物保护剂，卤代烃或塑料材料。许多这些材料的是难以生物降解的或完全不可生物降解的。外源性物质可以具有积极影响，根本没有影响或有害影响于环境和生物体。有害的毒性影响取决于摄取，也取决于生物可降解性和在特定生物体或部分生物体中的累积。外源性物质可以以固体、液体或气体形式存在于系统中，和在所有三种聚集状态中。特别是在水生系统中，例如河流、湖泊或海洋，经常存在人为的和生物的外源性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种使用重组活细胞(19)来检测外源性物质(03)的检测方法，当它们与活细胞(19)接触时，其通过至少一种在活细胞(19)中有活性的启动子P1，影响激活或上调至少一个基因序列区段ai的表达，所述基因序列区段ai用于编码至少一种已知功能的功能性蛋白Ai，其中，所述基因序列区段ai通过与至少一种标记蛋白基因mi融合而重组修饰，所述标记蛋白基因mi用于编码具有不影响功能蛋白Ai的编码的已知标记特征的至少一种标记蛋白Mi，并且基因融合构建体ai‑mi用于编码包括至少一种功能性蛋白质Ai和至少一种标记蛋白质Mi的融合蛋白Ai‑Mi，并且其中至少一种作为细胞反应的标记蛋白Mi增长的发生率通过检测其标记特征...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.13 DE 102014012130.51.一种使用重组活细胞(19)来检测外源性物质(03)的检测方法，当它们与活细胞(19)接触时，其通过至少一种在活细胞(19)中有活性的启动子P1，影响激活或上调至少一个基因序列区段ai的表达，所述基因序列区段ai用于编码至少一种已知功能的功能性蛋白Ai，其中，所述基因序列区段ai通过与至少一种标记蛋白基因mi融合而重组修饰，所述标记蛋白基因mi用于编码具有不影响功能蛋白Ai的编码的已知标记特征的至少一种标记蛋白Mi，并且基因融合构建体ai-mi用于编码包括至少一种功能性蛋白质Ai和至少一种标记蛋白质Mi的融合蛋白Ai-Mi，并且其中至少一种作为细胞反应的标记蛋白Mi增长的发生率通过检测其标记特征来以面积积分的方式来确定。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，具有毒性和/或未知性质和/或以不具有毒理学相关性浓度存在的外源性物质(03)是可检测的。3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，在技术装置(02)和/或水生系统(01)附近的外源性物质(03)是可检测的。4.根据上述权利要求中任意一项所述的检测方法，其特征在于，用于编码不同的功能性蛋白Ai不同的基因序列区段ai用标记蛋白基因mi重组修饰，所述标记蛋白基因mi用于编码具有不同标记物特征的标记蛋白Mi，并且基因融合构建体ai-mi用于编码不同的融合蛋白Ai-Mi，通过检测不同标记物特征得出了关于编码的相应功能蛋白Ai的增长的结论。5.根据上述权利要求中任意一项所述的检测方法，其特征在于，至少一个由外源性物质(03)因其表达而被激活或上调的基因序列区段ai是用于编码活细胞(19)的防御和解毒机制的基因序列区段，融合蛋白Ai-Mi中编码的功能蛋白Ai作为ABC转运蛋白家族的成员，其功能是外源性物质的膜转运。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，基因序列区段ai用于编码来自ABC转运蛋白家族的以多药耐药性蛋白(MDR转运蛋白)和/或多药耐药性相关蛋白(MRP转运蛋白)形式存在于融合蛋白Ai-Mi中的功能性蛋白Ai。7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，在作为细胞反应的MDR转运蛋白的存在增加的情况下，得出的结论是存在具有相同数量级的链长的不带电分子的外源性物质(03)，而在作为细胞反应的MRP转运蛋白的出现增加的情况下，得出的结论是存在具有100Da(单位道尔顿)至8kDa，优选1至3kDa，特别优选1.5至2.5kDa，例如至多2kDa链长的带电分子的外源性物质。8.根据上述权利要求中任意一项所述的检测方法，其特征在于，具有荧光性的标记蛋白Mi作为标记属性被使用，至少荧光波长和/或荧光强度能够被检测。9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，使用来自绿色荧光蛋白(GFP)家族或其荧光同源物或那些GFP的衍生物或突变体的标记蛋白Mi。1...

【专利技术属性】
技术研发人员：乌尔夫·格奥尔格·比克迈尔，
申请(专利权)人：艾尔弗雷德韦格纳研究所赫尔姆霍茨极地与海洋研究中心，
类型：发明
国别省市：德国,DE