一种检测金黄色葡萄球菌的引物组合物、试剂盒及其双信号通道检测方法技术

本发明专利技术涉及一种检测金黄色葡萄球菌的引物组合物、试剂盒及其双信号通道检测方法，其包括待检样品核酸提取；恒温扩增反应：在含有颜色指示剂、DNA嵌入式染料、待检样品DNA及其扩增引物的反应体系中进行恒温扩增反应；结果判读：根据扩增结束后指示剂的颜色变化进行直接肉眼判读和/或结合特定仪器检测核酸扩增曲线进行判读。本发明专利技术在反应体系中加入肉眼可见指示剂避免操作人员不易辨认是否加样成功的问题，其利用DNA嵌入式染料结合配套仪器进行扩增曲线的检测及指示剂可视化肉眼观测结果的双信号通道检测方法，可根据应用场景需要，选定其中一种信号通道进行结果的判定，这使得本发明专利技术在实际应用中更加简便、快捷、并且容易操作、适用于现场操作。

【技术实现步骤摘要】
一种检测金黄色葡萄球菌的引物组合物、试剂盒及其双信号通道检测方法
本专利技术涉及基因检测
，具体涉及一种检测金黄色葡萄球菌的引物组合物、试剂盒及其双信号通道检测方法。
技术介绍
根据实际情况，在反应容器中可以实现任何以BstDNA聚合酶为介导的等温扩增技术(包括交叉引物等温扩增CPA；环介导等温核酸扩增LAMP；智能等温核酸扩增SMAP；多自配引发扩增IMSA等技术)。环介导恒温扩增利用链置换DNA聚合酶以及特异性引物，保证引物在等温条件下顺利与模板结合并进行链置换扩增反应，有别于聚合酶链式反应需要变温才能进行扩增，可实现在恒温条件下的连续快速扩增，具有较高的灵敏度、特异性和扩增效率。核酸恒温扩增反应液通常为无色透明，在实际操作过程中，经常出现漏加、遗漏、移液混匀的不方面。需要一种能够方便的确定反应液充满的颜色指示剂以便于实际的操作过程。专利文献(CN104312913A)公开了在反应液中加入荧光染料钙黄绿素作为颜色指示剂，不需要仪器在1小时内即可实现对结果的可视化检测。但是该方法中每个反应室体系为25μL，钙黄绿素阴性结果为黄色，阳性结果为绿色，在微小体积比如小于10μL反应本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测金黄色葡萄球菌的引物组合物，其特征在于，包括SEQ ID No：1所示序列的外引物1，SEQ ID No：2所示序列的外引物2，SEQ ID No：3所示序列的内引物1以及SEQ ID No：4所示序列的内引物2。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测金黄色葡萄球菌的引物组合物，其特征在于，包括SEQIDNo：1所示序列的外引物1，SEQIDNo：2所示序列的外引物2，SEQIDNo：3所示序列的内引物1以及SEQIDNo：4所示序列的内引物2。2.一种含有权利要求1所述的引物组合物的的试剂盒。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括反应体系，该反应体系包括SEQIDNo：1-SEQIDNo：4所示序列的引物、模板DNA、指示剂、DNA嵌入式染料、BstDNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、缓冲液和水。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，每100μL反应体系中，含有2μL外引物1、2μL外引物2、16μL内引物1、16μL内引物2、0.5～1.5μL颜色指示剂、2.5～5μLDNA嵌入式染料。5.一种利用权利要求2～4中任一项所述的试剂盒检测金黄色葡萄球菌的用于非诊断和治疗目的的双信号通道检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1)待检样品核酸提取；步骤2)恒温扩增反应：在预定体积的含有颜色指示剂、DNA嵌入式染料、待检样品DNA及其扩增引物的反应体系中进行恒温扩增反应；步骤3)结果判...

【专利技术属性】
技术研发人员：方雪恩，王欣珍，王雄，孔继烈，
申请(专利权)人：上海速创诊断产品有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31