利用引物对AHF-AHR鉴定北京泛菌的方法技术

本发明专利技术公开了鉴定北京泛菌的引物对AHF-AHR。本发明专利技术提供的北京泛菌特异引物对AHF-AHR，由引物AHF和引物AHR组成；所述引物AHF为SEQ ID No.1所示的单链DNA分子；所述引物AHR为SEQ ID No.2所示的单链DNA分子。北京泛菌特异引物对AHF-AHR只在北京泛菌的基因组DNA中扩增出了特异条带，在其它菌株中均没有得到扩增产物，北京泛菌特异引物对AHF-AHR可用于快速鉴定北京泛菌。本发明专利技术为及早地预防和及时地切断北京泛菌引起的杏鲍菇软腐病和白灵菇软腐病的传染源及传播途径提供了技术支持，可实现对北京泛菌引起的杏鲍菇软腐病和白灵菇软腐病进行早期预防和控制。

Method for identification of Beijing pan bacteria by using primer AHF-AHR

The invention discloses a primer for identification of Beijing pan bacteria AHF-AHR. The present invention provides Beijing pantoeu specific primers of AHF-AHR, composed of primer AHF and primer AHR; the primers for AHF single stranded DNA SEQ ID No.1 shown; the primers for AHR SEQ ID single stranded DNA molecules is shown in No.2. Beijing pantoeu specific primers of AHF-AHR in genomic DNA Beijing pan bacteria amplified specific bands in other strains were not amplified, Beijing pan bacteria specific primers of AHF-AHR can be used for the rapid identification of Beijing pantoeu. The invention relates to early prevention and timely cut off by Beijing pantoeu Xingbaogu mushroom Ling Bai soft rot and soft rot disease transmission source and provides the technical support, can realize the mushroom soft rot and soft rot disease caused by Ling Bai mushroom in Beijing pantoeu for early prevention and control.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
中利用引物对AHF-AHR鉴定北京泛菌的方法。
技术介绍
我国从上世纪九十年代开始杏鲍菇规模化栽培。泛菌属包括作为植物促生菌、生防菌或植物病原菌的几个种(Pantoea:insightsintoahighlyversatileanddiversegenuswithintheEnterobacteriaceae,FEMSMicrobiologyReviews(2015)39:968-984)。由泛菌引起的杏鲍菇细菌性软腐病是近几年在国内外杏鲍菇工厂化生产中发生的严重病害，报道于北京地区的杏鲍菇软腐病的病原菌被鉴定及定名为北京泛菌(Pantoeabeijingensissp.nov.,isolatedfromthefruitingbodyofPleurotuseryngii.Liuetal.AntonievanLeeuwenhoek(2013)104:1039–1047)。杏鲍菇细菌性软腐病在生产车间一旦发生，就很难控制，给杏鲍菇工厂化生产造成严重的损失。北京泛菌也是北京地区发生的白灵菇软腐病的致病细菌(FirstreportofPantoeabeijingensisinducedsoftrotdiseaseofPleurotusnebrodensisinChina.Xuetal.PlantDisease(2014)98(7):1000)。北京泛菌快速诊断技术的开发，对杏鲍菇软腐病和白灵菇软腐病的有效防控具有重要意义。r>
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何鉴定或辅助鉴定北京泛菌(Pantoeabeijingensis)。为解决上述技术问题，本专利技术提供了北京泛菌特异PCR引物对。本专利技术所提供的北京泛菌特异PCR引物对名称为AHF-AHR，由引物AHF和引物AHR组成；所述引物AHF为SEQIDNo.1所示的单链DNA分子；所述引物AHR为SEQIDNo.2所示的单链DNA分子。本专利技术还提供了包括北京泛菌特异引物对AHF-AHR的鉴定或辅助鉴定北京泛菌的试剂或试剂盒。上述鉴定或辅助鉴定北京泛菌的试剂或试剂盒还包括进行PCR反应所需的除引物外的其它试剂。本专利技术还提供了北京泛菌特异引物对AHF-AHR的制备方法，鉴定或辅助鉴定北京泛菌的试剂或试剂盒的制备方法。本专利技术所提供的北京泛菌特异引物对AHF-AHR的制备方法包括将北京泛菌特异引物对AHF-AHR的所述两条单链DNA分子分别单独包装的步骤。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定北京泛菌的试剂或试剂盒的制备方法，包括将北京泛菌特异引物对AHF-AHR的所述两条单链DNA分子分别单独包装的步骤。本专利技术还提供了SEQIDNo.3所示的DNA分子。SEQIDNo.3所示的DNA分子为北京泛菌的特异DNA片段。北京泛菌特异引物对AHF-AHR在鉴定或辅助鉴定北京泛菌中的应用、鉴定或辅助鉴定北京泛菌的试剂或试剂盒在鉴定或辅助鉴定北京泛菌中的应用和SEQIDNo.3所示的DNA分子在鉴定或辅助鉴定北京泛菌中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述应用均不包括疾病的诊断方法和/或治疗方法。本专利技术还提供了鉴定或辅助鉴定北京泛菌的方法。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定北京泛菌的方法，包括以待测生物样品的基因组DNA为模板，用北京泛菌特异引物对AHF-AHR进行PCR扩增得到PCR产物，检测所述PCR产物的大小，如果所述PCR产物含有500-700bp的DNA片段(或所述PCR产物为500-700bp的DNA片段)，所述待测生物样品为北京泛菌或含有北京泛菌，或者所述待测生物样品候选为北京泛菌或候选含有北京泛菌；如果所述PCR产物不含有500-700bp的DNA片段(或所述PCR产物不为500-700bp的DNA片段)，所述待测生物样品不为北京泛菌或不含有北京泛菌，或者所述待测生物样品候选不为北京泛菌或候选不含有北京泛菌。上述鉴定或辅助鉴定北京泛菌的方法中，所述500-700bp的DNA片段具体可为673bp的DNA片段。实验证明，北京泛菌特异引物对AHF-AHR只在北京泛菌的基因组DNA中扩增出了特异条带，在其它菌株中均没有得到扩增产物，北京泛菌特异引物对AHF-AHR可用于快速鉴定北京泛菌。本专利技术为及早地预防和及时地切断北京泛菌引起的杏鲍菇软腐病和白灵菇软腐病的传染源及传播途径提供了技术支持，可实现对北京泛菌引起的杏鲍菇软腐病和白灵菇软腐病进行早期预防和控制。附图说明图1为引物对16sp1-16sp2对泛菌的PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图。其中，M：1kbplusDNAladder；1.北京泛菌(Pantoeabeijingensissp.nov.)JZB2120001T；2.PantoeagaviniaeDSM22758；3.PantoeaeucalyptiDSM23077；4.PantoeaanthophilaDSM23080；5.PantoeaagglomeransDSM30072；6PantoeadispersaDSM30073；7.PantoeaagglomeransJCM1236；8.PantoeaagglomeransJCM20143；9.Pantoeapleurotisp.nov.JZB2120015T。图2为北京泛菌特异引物对AHF-AHR特异性检测泛菌的PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图。其中，M：1kbplusDNAladder；1.北京泛菌(Pantoeabeijingensissp.nov.)JZB2120001T；2.PantoeagaviniaeDSM22758；3.PantoeaeucalyptiDSM23077；4.PantoeaanthophilaDSM23080；5.PantoeaagglomeransDSM30072；6PantoeadispersaDSM30073；7.PantoeaagglomeransJCM1236；8.PantoeaagglomeransJCM20143；9.Pantoeapleurotisp.nov.JZB2120015T。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的北京泛菌(Pantoeabeijingensissp.nov.)JZB2120001T(即LMG27579T或KCTC32406T)本文档来自技高网...

【技术保护点】
北京泛菌特异引物对，由引物AHF和引物AHR组成；所述引物AHF为SEQ ID No.1所示的单链DNA分子；所述引物AHR为SEQ ID No.2所示的单链DNA分子。

【技术特征摘要】
1.北京泛菌特异引物对，由引物AHF和引物AHR组成；所述引物AHF为SEQIDNo.1
所示的单链DNA分子；所述引物AHR为SEQIDNo.2所示的单链DNA分子。
2.鉴定或辅助鉴定北京泛菌的试剂或试剂盒，包括权利要求1所述的北京泛菌特
异引物对。
3.权利要求1所述的北京泛菌特异引物对的制备方法，包括将所述北京泛菌特异
引物对的所述两条单链DNA分子分别单独包装的步骤。
4.权利要求2所述的试剂或试剂盒的制备方法，包括将所述北京泛菌特异引物对
的所述两条单链DNA分子分别单独包装的步骤。
5.权利要求1所述的北京泛菌特异引物对在鉴定或辅助鉴定北京泛菌中的应用。
6.权利要求2所述的试剂或试剂盒在鉴定或辅助鉴定北京泛菌中的应用。
7.鉴定或辅助鉴定北京泛菌的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：荣成博，刘宇，王守现，马元伟，许峰，赵爽，宋婧祎，李瑞杰，黄斌，王晶，王兰青，宋爽，牛玉蓉，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：北京;11