用于治疗肌纤蛋白(MYOC)青光眼的腺伴随病毒载体制造技术

本文提供使用腺伴随病毒(AAV)载体用于治疗肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法。一些方面，AAV载体编码R‑脊椎蛋白1(RSPO1)、R‑脊椎蛋白2(RSPO2)、R‑脊椎蛋白3(RSPO3)或R‑脊椎蛋白4(RSPO4)和/或靶向肌纤蛋白(MYOC)的RNAi。一方面，将病毒颗粒施用至人受试者的眼部。编码RSPO1、RSPO2、RSPO3和/或RSPO4和/或MYOC RNAi的病毒颗粒也考虑在内。一些方面，提供了转导小梁网的变体AAV2颗粒。

Adeno associated virus vector for the treatment of muscle fiber (MYOC) glaucoma

This article provides a method for the treatment of muscle fiber (MYOC) glaucoma using an adeno-associated virus (AAV) vector. Some aspects of AAV vector encoding R R-spondin 1 (RSPO1), R R-spondin 2 (RSPO2), R R-spondin 3 (RSPO3) or R R-spondin 4 (RSPO4) and / or targeted muscle fiber protein (MYOC) RNAi. On the one hand, the virus particles were applied to the eyes of the subjects. Virus particles encoding RSPO1, RSPO2, RSPO3 and / or RSPO4 and / or MYOC RNAi account. In some aspects, the variant AAV2 particles are provided for transduction of trabecular meshwork.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗肌纤蛋白(MYOC)青光眼的腺伴随病毒载体对相关申请的交叉引用本申请要求2014年9月16日提交的美国临时申请号62/051,299的优先权，其在此处通过提述以其整体并入。ASCII文本文件上的序列表的提交在ASCII文本文件上的下述提交内容通过提述以其整体并入：计算机可读形式(CRF)的序列表(文件名:159792012540SeqList.txt，记录日期:2015年9月15日，大小：31KB)。专利
本专利技术涉及AAV载体和使用AAV载体用于治疗肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法。专利技术概述肌纤蛋白(MYOC)突变导致约2％-4％的原发性开角型青光眼(POAG；～90,000美国患者)。具体而言，青光眼MYOC突变P370L或Y437H导致10％-30％的幼年型POAG(JOAG；～6,000美国患者)且与增加的眼内压(IOP)、视网膜神经节细胞死亡和视神经头(ONH)损伤相关(Shimizu等人(2000)Am.J.Ophthalmol.130:165-77；FanandWiggs(2010)J.Clin.Invest.120:3064-72)。尽管MYOC突变与青光眼相关，MYOC突变体对眼部功能的影响仍不清楚。因此，需要进一步理解MYOC和突变体MYOC的功能以揭示用于治疗肌纤蛋白(MYOC)青光眼的新型治疗性策略。本专利技术提供用于在哺乳动物中治疗肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物的眼部施用在所述哺乳动物的眼中增加Wnt信号传导的作用剂。在一些实施方案中，所述作用剂增加所述哺乳动物眼部的小梁网(TM)细胞中的Wnt信号传导。在一些实施方案中，所述作用剂增加所述哺乳动物眼中的R-脊椎蛋白1(RSPO1)、R-脊椎蛋白2(RSPO2)、R-脊椎蛋白3(RSPO3)和/或R-脊椎蛋白4(RSPO4)活性。在一些实施方案中，所述作用剂与在所述哺乳动物眼中增加一种或多种RSPO活性的一种或多种其他作用剂组合使用。在一些实施方案中，所述作用剂增加所述哺乳动物眼部TM中的RSPO1。在一些实施方案中，所述作用剂是RSPO1或其功能性变体。在一些实施方案中，所述作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，其含有编码RSPO1或其功能性变体的载体。在一些实施方案中，RSPO1是截短的RSPO1。在一些实施方案中，作用剂增加所述哺乳动物眼部TM中的RSPO2。在一些实施方案中，所述作用剂是RSPO2或其功能性变体。在一些实施方案中，所述作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，其包含编码RSPO2或其功能性变体的载体。在一些实施方案中，RSPO2是截短的RSPO2。在一些实施方案中，所述作用剂增加所述哺乳动物眼部TM中的RSPO3。在一些实施方案中，所述作用剂是RSPO3或其功能性变体。在一些实施方案中，所述作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，其包含编码RSPO3或其功能性变体的载体。在一些实施方案中，RSPO3是截短的RSPO3。在一些实施方案中，所述作用剂增加所述哺乳动物眼部TM中的RSPO4。在一些实施方案中，所述作用剂是RSPO4或其功能性变体。在一些实施方案中，所述作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，其包含编码RSPO4或其功能性变体的载体。在一些实施方案中，RSPO4是截短的RSPO4。一些方面，本专利技术提供在所述哺乳动物的眼中施用增加Wnt信号传导的第二作用剂。在一些实施方案中，所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼部TM中的Wnt信号传导。在一些实施方案中，所述第二作用剂减少或抑制所述哺乳动物眼中肌纤蛋白(MYOC)的表达。在一些实施方案中，所述第二作用剂减少或抑制所述哺乳动物眼部TM中MYOC的表达。在一些实施方案中，所述第二作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，其包含编码靶向MYOC的表达的抑制性核酸的载体。在一些实施方案中，抑制性核酸是靶向MYOC的表达的MYOCRNAi。在一些实施方案中，MYOCRNAi是靶向MYOC的表达的MYOCshRNA。一些方面，本专利技术的作用剂减少或抑制所述哺乳动物眼中肌纤蛋白(MYOC)的表达。在一些实施方案中，所述作用剂减少或抑制所述哺乳动物眼部TM中MYOC的表达。在一些实施方案中，所述作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，其包含编码靶向MYOC的表达的抑制性核酸的载体。在一些实施方案中，抑制性核酸是靶向MYOC的表达的MYOCRNAi。在其他实施方案中，MYOCRNAi是靶向MYOC的表达的MYOCshRNA。在本专利技术的一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述哺乳动物的眼中施用增加Wnt信号传导的第二作用剂。在一些实施方案中，所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼部TM中的Wnt信号传导。在一些实施方案中，所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼中R-脊椎蛋白1(RSPO1)、R-脊椎蛋白2(RSPO2)、R-脊椎蛋白3(RSPO3)或R-脊椎蛋白4(RSPO4)的活性。在一些实施方案中，所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼部TM中的RSPO1。在一些实施方案中，所述第二作用剂是RSPO1或其功能性变体。在一些实施方案中，所述第二作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，其包含编码RSPO1或其功能性变体的载体。在一些实施方案中，RSPO1是截短的RSPO1。在一些实施方案中，所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼部TM中的RSPO2。在一些实施方案中，所述第二作用剂是RSPO2或其功能性变体。在一些实施方案中，所述第二作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，其包含编码RSPO2或其功能性变体的载体。在一些实施方案中，RSPO2是截短的RSPO2。在一些实施方案中，所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼部TM中的RSPO3。在一些实施方案中，所述第二作用剂是RSPO3或其功能性变体。在一些实施方案中，所述第二作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，其包含编码RSPO3或其功能性变体的载体。在一些实施方案中，RSPO3是截短的RSPO3。在一些实施方案中，所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼部TM中的RSPO4。在一些实施方案中，所述第二作用剂是RSPO4或其功能性变体。在一些实施方案中，所述第二作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，其包含编码RSPO4或其功能性变体的载体。在一些实施方案中，RSPO4是截短的RSPO4。一些方面，本专利技术提供用于在哺乳动物中治疗肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物的眼部施用重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4或其功能性变体的载体。一些方面，本专利技术提供在哺乳动物中用于治疗肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物眼部施用重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码靶向所述哺乳动物中肌纤蛋白(MYOC)的表达的MYOCRNAi的载体。其他方面，本专利技术提供在哺乳动物中用于治疗肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物的眼部施用增加所述哺乳动物眼中Wnt信号传导的作用剂和减少或抑制所述哺乳动物中肌纤蛋白的表达的作用剂。其他方面，本专利技术提供在哺乳动物中用于治疗肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物的眼部施用包含编码RSP本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于治疗哺乳动物中肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物的眼施用在所述哺乳动物的眼中增加Wnt信号传导的作用剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.16 US 62/051,2991.用于治疗哺乳动物中肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物的眼施用在所述哺乳动物的眼中增加Wnt信号传导的作用剂。2.权利要求1的方法，其中所述作用剂在所述哺乳动物的眼的小梁网(TM)细胞中增加Wnt信号传导。3.权利要求1或2的方法，其中所述作用剂增加所述哺乳动物眼中R-脊椎蛋白1(RSPO1)、R-脊椎蛋白2(RSPO2)、R-脊椎蛋白3(RSPO3)或R-脊椎蛋白4(RSPO4)的活性。4.权利要求3的方法，其中所述作用剂增加所述哺乳动物眼的TM中的RSPO1。5.权利要求4的方法，其中所述作用剂是RSPO1或其功能性变体。6.权利要求4的方法，其中所述作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO1或其功能性变体的载体。7.权利要求6的方法，其中所述RSPO1是截短的RSPO1。8.权利要求3的方法，其中所述作用剂增加所述哺乳动物眼的TM中的RSPO2。9.权利要求8的方法，其中所述作用剂是RSPO2或其功能性变体。10.权利要求8的方法，其中所述作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO2或其功能性变体的载体。11.权利要求10的方法，其中所述RSPO2是截短的RSPO2。12.权利要求3的方法，其中所述作用剂增加所述哺乳动物眼的TM中的RSPO3。13.权利要求12的方法，其中所述作用剂是RSPO3或其功能性变体。14.权利要求12的方法，其中所述作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO3或其功能性变体的载体。15.权利要求14的方法，其中所述RSPO3是截短的RSPO3。16.权利要求3的方法，其中所述作用剂在所述哺乳动物眼的TM中增加RSPO4。17.权利要求16的方法，其中所述作用剂是RSPO4或其功能性变体。18.权利要求16的方法，其中所述作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO4或其功能性变体的载体。19.权利要求18的方法，其中所述RSPO4是截短的RSPO4。20.权利要求3-19任一项的方法，其中所述方法进一步包括在所述哺乳动物的眼中施用增加Wnt信号传导的第二作用剂。21.权利要求20的方法，其中所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼的TM中的Wnt信号传导。22.权利要求20或21的方法，其中所述第二作用剂减少或抑制所述哺乳动物眼中肌纤蛋白(MYOC)的表达。23.权利要求22的方法，其中所述第二作用剂减少或抑制所述哺乳动物眼的TM中MYOC的表达。24.权利要求22或23的方法，其中所述第二作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码靶向MYOC的表达的抑制性核酸的载体。25.权利要求24的方法，其中所述抑制性核酸是靶向MYOC的表达的MYOCRNAi。26.权利要求25的方法，其中所述MYOCRNAi是靶向MYOC的表达的MYOCshRNA。27.权利要求1或2的方法，其中所述作用剂减少或抑制所述哺乳动物眼中肌纤蛋白(MYOC)的表达。28.权利要求27的方法，其中所述作用剂减少或抑制所述哺乳动物眼的TM中MYOC的表达。29.权利要求28的方法，其中所述作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码靶向MYOC的表达的抑制性核酸的载体。30.权利要求29的方法，其中所述抑制性核酸是靶向MYOC的表达的MYOCRNAi。31.权利要求30的方法，其中所述MYOCRNAi是靶向MYOC的表达的MYOCshRNA。32.权利要求27-31任一项的方法，其中所述方法进一步包括在所述哺乳动物眼中施用增加Wnt信号传导的第二作用剂。33.权利要求32的方法，其中所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼的TM中的Wnt信号传导。34.权利要求32或33的方法，其中所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼中R-脊椎蛋白1(RSPO1)、R-脊椎蛋白2(RSPO2)、R-脊椎蛋白3(RSPO3)或R-脊椎蛋白4(RSPO4)的活性。35.权利要求34的方法，其中所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼的TM中的RSPO1。36.权利要求35的方法，其中所述第二作用剂是RSPO1或其功能性变体。37.权利要求35的方法，其中所述第二作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO1或其功能性变体的载体。38.权利要求37的方法，其中所述RSPO1是截短的RSPO1。39.权利要求34的方法，其中所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼的TM中的RSPO2。40.权利要求39的方法，其中所述第二作用剂是RSPO2或其功能性变体。41.权利要求39的方法，其中所述第二作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO2或其功能性变体的载体。42.权利要求41的方法，其中所述RSPO2是截短的RSPO2。43.权利要求34的方法，其中所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼的TM中的RSPO3。44.权利要求43的方法，其中所述第二作用剂是RSPO3或其功能性变体。45.权利要求43的方法，其中所述第二作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO3或其功能性变体的载体。46.权利要求45的方法，其中所述RSPO3是截短的RSPO3。47.权利要求34的方法，其中所述第二作用剂增加所述哺乳动物眼的TM中的RSPO4。48.权利要求47的方法，其中所述第二作用剂是RSPO4或其功能性变体。49.权利要求47的方法，其中所述第二作用剂是重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO4或其功能性变体的载体。50.权利要求49的方法，其中所述RSPO4是截短的RSPO4。51.用于治疗哺乳动物中肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物的眼施用重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4或其功能性变体的载体。52.用于治疗哺乳动物中的肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物的眼施用减少或抑制所述哺乳动物中肌纤蛋白(MYOC)的表达的作用剂。53.用于治疗哺乳动物中肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物的眼施用重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码靶向所述哺乳动物中肌纤蛋白(MYOC)的表达的MYOCRNAi的载体。54.用于治疗哺乳动物中肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物的眼施用在所述哺乳动物的眼中增加Wnt信号传导的作用剂和在所述哺乳动物中减少或抑制肌纤蛋白表达的作用剂。55.用于治疗哺乳动物中肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物的眼施用包含编码RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4或其功能性变体的载体的重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，和包含编码靶向所述哺乳动物中肌纤蛋白的表达的MYOCRNAi的载体的rAAV颗粒。56.用于治疗哺乳动物中肌纤蛋白(MYOC)青光眼的方法，包括对所述哺乳动物的眼施用重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4或其功能性变体，和编码靶向所述哺乳动物中肌纤蛋白的表达的MYOCshRNA(MYOCshRNA)的载体。57.用于在具有眼部病症的哺乳动物中的小梁网细胞中增强Wnt信号传导的方法，包括对所述哺乳动物的眼施用重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4或其功能性变体的载体。58.用于在具有眼部病症的哺乳动物中的小梁网细胞中增强Wnt信号传导的方法，包括对所述哺乳动物的眼施用重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码靶向所述哺乳动物中肌纤蛋白(MYOC)表达的MYOCRNAi的载体。59.用于在具有眼部病症的哺乳动物中的小梁网细胞中增强Wnt信号传导的方法，包括对所述哺乳动物的眼施用包含编码RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4或其功能性变体的载体的重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，和包含编码靶向所述哺乳动物中肌纤蛋白的表达的MYOCRNAi的载体的rAAV颗粒。60.用于在具有眼部病症的哺乳动物中的小梁网细胞中增强Wnt信号传导的方法，包括对所述哺乳动物的眼施用重组腺伴随病毒(rAAV)颗粒，所述颗粒包含编码RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4或其功能性变体和编码靶向所述哺乳动物中肌纤蛋白的表达的MYOCRNAi的载体。61.权利要求1-60任一项的方法，其中所述哺乳动物是人。62.权利要求1-56任一项的方法，其中所述哺乳动物是人且所述肌纤蛋白(MYOC)青光眼与人肌纤蛋白中的突变相关。63.权利要求57-60任一项的方法，其中所述哺乳动物是人且所述眼部病症是与人肌纤蛋白中的突变相关的MYOC青光眼。64.权利要求62或63的方法，其中所述肌纤蛋白突变包含选自下述的一个或多个氨基酸取代：E323K、K398R、Q368X、G364V、P370L、D380A、K423E、Y437H和I477S。65.权利要求62-64任一项的方法，其中所述肌纤蛋白突变包含P370L氨基酸取代。66.权利要求62或63的方法，其中所述肌纤蛋白突变包含Y437H氨基酸取代。67.权利要求1-66任一项的方法，其中所述肌纤蛋白(MYOC)青光眼是原发性开角型青光眼(POAC)。68.权利要求1-67任一项的方法，其中所述肌纤蛋白(MYOC)青光眼是幼年型原发性开角型青光眼(JOAC)。69.权利要求3-7、34-38、51、55-57或59-68任一项的方法，其中所述RSPO1是人RSPO1。70.权利要求69的方法，其中所述RSPO1与人RSPO1具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列同一性。71.权利要求3-7、34-38、51、55-57或59-70任一项的方法，其中所述RSPO1包含SEQIDNO:8的氨基酸序列。72.权利要求3-7、34-38、51、55-57或59-70任一项的方法，其中所述RSPO1包含与SEQIDNO:8的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。73.权利要求3-7、34-38、51、55-57或59-70任一项的方法，其中所述RSPO1包含SEQIDNO:11的氨基酸序列。74.权利要求3-7、34-38、51、55-57或59-70任一项的方法，其中所述RSPO1包含与SEQIDNO:11的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。75.权利要求3-7、34-38、51、55-57或59-70任一项的方法，其中所述RSPO1包含SEQIDNO:12的氨基酸序列。76.权利要求3-7、34-38、51、55-57或59-70任一项的方法，其中所述RSPO1包含与SEQIDNO:12的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。77.权利要求3、8-11、34、39-42、51、55-57或59-70任一项的方法，其中所述RSPO2是人RSPO2。78.权利要求77的方法，其中所述RSPO2与人RSPO2具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％氨基酸序列同一性。79.权利要求3、8-11、34、39-42、51、55-57、59-68或78任一项的方法，其中所述RSPO2包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。80.权利要求3、8-11、34、39-42、51、55-57、59-68或78任一项的方法，其中所述RSPO2包含与SEQIDNO:9的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。81.权利要求3、8-11、34、39-42、51、55-57、59-68或78任一项的方法，其中所述RSPO2包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。82.权利要求3、8-11、34、39-42、51、55-57、59-68或78任一项的方法，其中所述RSPO2包含与SEQIDNO:13的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。83.权利要求3、8-11、34、39-42、51、55-57、59-68或78任一项的方法，其中所述RSPO2包含SEQIDNO:14的氨基酸序列。84.权利要求3、8-11、34、39-42、51、55-57、59-68或78任一项的方法，其中所述RSPO2包含与SEQIDNO:14的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。85.权利要求3、12-15、34、43-46、51、55-57或59-68任一项的方法，其中所述RSPO3是人RSPO3。86.权利要求85的方法，其中所述RSPO3与人RSPO3具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列同一性。87.权利要求3、12-15、34、43-46、51、55-57、59-68或86任一项的方法，其中所述RSPO3包含SEQIDNO:1的氨基酸序列。88.权利要求3、12-15、34、43-46、51、55-57、59-68或86任一项的方法，其中所述RSPO3包含与SEQIDNO:1的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。89.权利要求3、12-15、34、43-46、51、55-57、59-68或86任一项的方法，其中所述RSPO3包含SEQIDNO:15的氨基酸序列。90.权利要求3、12-15、34、43-46、51、55-57、59-68或86任一项的方法，其中所述RSPO3包含与SEQIDNO:15的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。91.权利要求3、12-15、34、43-46、51、55-57、59-68或86任一项的方法，其中所述RSPO3包含SEQIDNO:16的氨基酸序列。92.权利要求3、12-15、34、43-46、51、55-57、59-68或86任一项的方法，其中所述RSPO3包含与SEQIDNO:16的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。93.权利要求3、12-15、34、43-46、51、55-57、59-68或86任一项的方法，其中所述RSPO3包含SEQIDNO:17的氨基酸序列。94.权利要求3、12-15、34、43-46、51、55-57、59-68或86任一项的方法，其中所述RSPO3包含与SEQIDNO:17的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。95.权利要求3、16-19、34、47-50、51、55-57或59-68任一项的方法，其中所述RSPO4是人RSPO4。96.权利要求95的方法，其中所述RSPO4与人RSPO4具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列同一性。97.权利要求3、16-19、34、47-50、51、55-57、59-68或96任一项的方法，其中所述RSPO4包含SEQIDNO:10的氨基酸序列。98.权利要求3、16-19、34、47-50、51、55-57、59-68或96任一项的方法，其中所述RSPO4包含与SEQIDNO:10的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。99.权利要求3、16-19、34、47-50、51、55-57、59-68或96任一项的方法，其中所述RSPO4包含SEQIDNO:18的氨基酸序列。100.权利要求3、16-19、34、47-50、51、55-57、59-68或96任一项的方法，其中所述RSPO4包含与SEQIDNO:18的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。101.权利要求3、16-19、34、47-50、51、55-57、59-68或96任一项的方法，其中所述RSPO4包含SEQIDNO:19的氨基酸序列。102.权利要求3、16-19、34、47-50、51、55-57、59-68或96任一项的方法，其中所述RSPO4包含与SEQIDNO:19的氨基酸序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。103.权利要求3-19、34-51、55-57或59-102任一项的方法，其中所述RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4或其功能性变体与启动子可操作连接。104.权利要求103的方法，其中所述启动子能够在所述哺乳动物的眼中表达RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4或其功能性变体。105.权利要求104的方法，其中所述启动子能够在小梁网的细胞中表达RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4或其功能性变体。106.权利要求103-105任一项的方法，其中所述启动子是杂交鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子。107.权利要求25、26、30、31、53、55、58或60-68任一项的方法，其中所述MYOCRNAi靶向人MYOC的表达。108.权利要求25、26、30、31、53、55、58、60-68或107任一项的方法，其中所述RNAi是小抑制性RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)或小发夹RNA(shRNA)。109.权利要求108的方法，其中所述RNAi是shRNA。110.权利要求109的方法，其中所述MYOCshRNA靶向SEQIDNO:6所示的MYOC的氨基酸序列。111.权利要求109或110的方法，其中所述MYOCshRNA包含SEQIDNO:7的环序列。112.权利要求25、26、30、31、53、55、58、60-68或107-111任一项的方法，其中所述MYOCRNAi与启动子可操作地连接。113.权利要求112的方法，其中所述启动子能够在所述哺乳动物的眼中表达MYOCRNAi。114.权利要求112或113任一项的方法，其中所述启动子能够在小梁网的细胞中表达MYOCRNAi。115.权利要求112-114任一项的方法，其中所述启动子是杂交鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子。116.权利要求112-115任一项的方法，其中所述启动子是RNA聚合酶III启动子。117.权利要求112-116任一项的方法，其中MYOCRNAi的表达减少或抑制所述哺乳动物眼中MYOC的表达。118.权利要求112-117任一项的方法，其中MYOCRNAi的表达减少或抑制所述哺乳动物的小梁网的细胞中MYOC的表达。119.权利要求1-118任一项的方法，其中所述治疗减少肌纤蛋白(MYOC)青光眼的症状。120.权利要求119的方法，其中所述肌纤蛋白(MYOC)青光眼症状的减少是眼内压的减少、小梁网中MYOC的减少积累、减少的眼高压或来自小梁网的增加的房水外流。121.权利要求6-51、53或55-120任一项的方法，其中所述AAV病毒颗粒包含AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6ShH10、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAVrh8R、AAV9、AAV10、AAVrh10、AAV11、AAV12、牛AAV、山羊AAV或小鼠AAV血清型衣壳或来自进化枝A-F的AAV血清型衣壳。122.权利要求6-51、53或55-120任一项的方法，其中所述AAV病毒颗粒包含酪氨酸衣壳突变体、肝素结合衣壳突变体、AAV2R471A衣壳、AAVAAV2/2-7m8衣壳、AAVDJ衣壳、AAV2N587A衣壳、AAV2E548A衣壳、AAV2N708A衣壳、AAVV708K衣壳、AAV1/AAV2嵌合衣壳或AAV2/HBoV1衣壳。123.权利要求6-51、53或55-120任一项的方法，其中所述AAV病毒颗粒包含AAV衣壳，所述AAV衣壳在位置R484、R487、K527、K532、R585或R588的一处或多处包含氨基酸取代，其编号基于AAV2的VP1。权利要求6-51、53或55-102任一项的方法，其中所述AAV病毒颗粒包含酪氨酸衣壳突变体。124.权利要求121的方法，其中所述rAAV病毒颗粒包含AAV血清型2衣壳。125.权利要求124的方法，其中AAV血清型2衣壳包含含有R471A氨基酸取代的AAV2衣壳蛋白，其相对AAV2VP1编号。126.权利要求6-51、53或55-125任一项的方法，其中所述载体包括AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAVrh8R、AAV9、AAV10、AAVrh10、AAV11、AAV12、山羊AAV、牛AAV或小鼠AAV血清型反向末端重复(ITR)。127.权利要求126的方法，其中所述载体包含AAV血清型2ITR。128.权利要求6-51、53或55-127任一项的方法，其中所述AAV病毒颗粒包含源自相同AAV血清型的一个或多个ITR和衣壳。129.权利要求6-51、53或55-128任一项的方法，其中所述AAV病毒颗粒包含源自与rAAV病毒颗粒的衣壳不同AAV血清型的一个或多个ITR。130.权利要求128的方法，其中所述rAAV病毒颗粒包含AAV2衣壳且其中所述载体包含AAV2ITR。131.权利要求124或130的方法，其中AAV2衣壳包含含有R471A氨基酸取代的AAV2衣壳蛋白，其相对AAV2VP1编号。132.权利要求6-51、53或55-131任一项的方法，其中将至少1×109基因组拷贝的rAAV颗粒施用至所述哺乳动物。133.权利要求6-51、53或55-132任一项的方法，其中所述AAV颗粒通过玻璃体内注射和/或房内注射施用。134.权利要求6-51、53或55-133任一项的方法，其中将所述rAAV施用至所述眼的多于一处的位置。135.权利要求6-51、53或55-134任一项的方法，其中所述rAAV病毒颗粒在药物组合物中。136.权利要求135的方法，其中所述药物组合物进一步包含药物上可接受的载剂。137.权利要求1-136任一项的方法，其中所述作用剂与增加RSPO1、RSPO2、RSPO3和/或RSPO4活性的第二作用剂组合使用。138.包含AAV载体的重组AAV颗粒，其中所述AAV载体包含编码RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4或其功能性变体的核酸。139.包含AAV载体的重组AAV颗粒，其中所述AAV载体包含编码靶向所述哺乳动物中肌纤蛋白(MYOC)的表达的抑制性核酸的核酸。140.权利要求139的重...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·佩汉，A·斯卡利亚，J·阿丁格，
申请(专利权)人：建新公司，
类型：发明
国别省市：美国,US