一种核酸蛋白提取试剂及其应用以及核酸蛋白提取方法技术

本发明专利技术涉及核酸蛋白提取试剂，其包含0.1‑0.8M的氯化钠，0.3‑1.0M的硫酸铵，0.7‑1.5M的盐酸胍以及体积分数10％‑50％的苯酚；还涉及上述核酸蛋白提取试剂在核酸和/或蛋白质提取中的应用；还涉及一种从组织细胞样品中提取核酸和/或蛋白质的方法。本发明专利技术的核酸蛋白提取试剂和方法提取效率高，得到核酸和蛋白质的完整性好，并且提取方法简单方便，不易污染样品，也不会对人体发生危害。

Nucleic acid protein extraction reagent and its application and nucleic acid protein extraction method

The invention relates to a reagent for extracting nucleic acid protein, which contains 0.1 0.8M sodium chloride, ammonium sulfate 0.3 1.0M, 0.7 1.5M guanidine hydrochloride and 10% volume fraction of 50% phenol; also relates to the use of reagents for nucleic acid and / or protein extraction in the extraction of nucleic acid protein; also relates to a nucleic acid extraction and / or protein from tissue cells in the sample method. The nucleic acid protein extraction reagent and method of the invention has high extraction efficiency, good integrity of nucleic acid and protein, simple and convenient extraction method, not easy to pollute sample, and can not harm human body.

【技术实现步骤摘要】
一种核酸蛋白提取试剂及其应用以及核酸蛋白提取方法
本专利技术涉及分子生物学试剂领域，更特别的，涉及一种核酸蛋白提取试剂以及提取核酸和/或蛋白的方法。
技术介绍
从生物样品中提取核酸是基因工程学或临床检验领域中的重要过程。例如，从人体等中采集血液或组织并对其进行检验时，需要从血液等生物试样中只对核酸进行提取、纯化。为了从其它成分中分离蛋白质或核酸，对生物试样进行物理和化学的溶解处理后，通过提取操作来降解蛋白质或脂质并使核酸产生游离。此时，在分离纯化蛋白质或核酸的过程中，容易造成试样的污染。作为提取的标准方法普遍使用有机溶剂，但其毒性、废弃物处理要费工夫，并且离心分离操作也要费工夫以及对试样的污染或来自试样的感染成为问题。
技术实现思路
为解决以上问题，本专利技术提供了一种核酸蛋白提取试剂，其包含0.1-0.8M的氯化钠，0.3-1.0M的硫酸铵，0.7-1.5M的盐酸胍以及体积分数为10-50％的苯酚。本专利技术还提供了上述核酸蛋白提取试剂在核酸和/或蛋白质提取中的应用。本专利技术还提供了一种从组织细胞样品中提取核酸和/或蛋白质的方法，其包括以下步骤：S1：将所述组织细胞样品破碎成匀浆；S2：向所述匀浆中加入权利要求1所述的核酸蛋白提取试剂的有机溶剂稀释液，混匀，得到提取混合液；S3：离心所述提取混合液，分层得到水相、中层和有机相；S4：从相应的层中提取所述组织细胞样品的核酸和/或蛋白质。优选地，所述组织细胞样品与所述核酸蛋白提取试剂的量的比为每50-100mg组织细胞样品添加1ml所述核酸蛋白提取试剂。优选地，所述有机溶剂是氯仿，并且所述核酸蛋白试剂与氯仿的体积比为1：0.1-0.5。进一步地，所要提取的为RNA，从所述水相中提取，并且S4具体包括：S411：取S3中的水相，加入异丙醇使RNA析出；S412：离心后得到沉淀，用体积分数75％乙醇洗涤离心，得到的沉淀即所述组织细胞样品的总RNA。优选地，当所述组织细胞样品的量比较少时，加入糖原促进RNA析出。进一步地，所要提取的为DNA，从所述中层和有机相中提取，并且S4具体包括：S421：取所述中层和有机相，去除其中的水分，并向其中添加纯乙醇，使DNA析出；S422：离心后得到沉淀，依次用0.1M柠檬酸钠溶液和纯乙醇洗涤离心,得到的沉淀即为所述组织细胞样品中的DNA，所述柠檬酸钠溶液中含有体积分数为10％的乙醇，并且pH为8.5。进一步地，所要提取的是蛋白质，并且S4具体包括：S431：取所述中层和有机相，去除其中的水分，并向其中添加纯乙醇，使DNA析出；S432：离心后，取上清液，向其中加入异丙醇，使蛋白质析出；S433：离心得到沉淀，依次用0.3M的盐酸胍溶液和纯乙醇洗涤离心，得到的沉淀即为所述组织细胞样品中的蛋白质，所述盐酸胍溶液的溶剂为体积分数为95％的乙醇溶液。本专利技术的核酸蛋白提取试剂和方法提取效率高，得到核酸和蛋白质的完整性好，并且提取方法简单方便，不易污染样品，也不会对人体发生危害。附图说明图1为本专利技术的核酸蛋白提取试剂和TRIzol提取的小鼠肺的总RNA的琼脂糖凝胶电泳图，其中泳道1为TRIzol提取的RNA，泳道2为核酸蛋白提取试剂提取的RNA；图2为本专利技术的核酸蛋白提取试剂和TRIzol提取的小鼠肾的总RNA的琼脂糖凝胶电泳图，其中泳道1为TRIzol提取的RNA，泳道2为核酸蛋白提取试剂提取的RNA；图3为本专利技术的核酸蛋白提取试剂和TRIzol提取的小鼠肌肉的总RNA的琼脂糖凝胶电泳图，其中泳道1为TRIzol提取的RNA，泳道2为核酸蛋白提取试剂提取的RNA。具体实施方式以下结合实例对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。使用本专利技术的核酸蛋白提取试剂提取核酸蛋白的方法：1.核酸蛋白提取试剂处理样品1)每50～100mg的样品组织加入1ml的核酸蛋白提取试剂，用组织细胞破碎仪破碎后，室温静置5～6分钟；2)按每毫升核酸蛋白提取试剂加入200ul氯仿的比例加入氯仿至上述已匀浆样品中；3)上下剧烈颠倒样品管，混匀样品，持续15秒；4)室温静置混匀的样品2-3分钟；5)样品4℃以12000g离心15分钟；6)将上层水相(含RNA)取至新的离心管，进行RNA的进一步分离；注意不要触动中间层和下层有机相。7)中间层和有机相进行DNA和蛋白质的进一步分离。2.RNA的提取1)当处理的样品量比较小(少于1×106细胞或少于10mg组织)时，将上清中将入5-10μg的无RNase糖原帮助RNA沉淀；2)按照每毫升核酸蛋白提取试剂加入500ul的比例加入100％的异丙醇在上述的水相中；3)室温作用10分钟；4)样品4℃以12000g离心10分钟；5)去除上清；6)按照每毫升核酸蛋白提取试剂加入1ml的比例加入75％的乙醇；7)将离心管颠倒两次，4℃以7,500g离心5分钟；8)将沉淀适当吹干；9)用20-50μl的无RNase水或0.5％SDS溶液重悬沉淀；10)水浴或加热块于55-60℃作用10-15分钟；11)样品可进行后续应用或保存于-70℃.3.DNA的提取：1)充分去掉中间层和有机相上的水分；2)按照每毫升核酸蛋白提取试剂加入300ul的比例加入100％乙醇在上述样品管中；3)上下颠倒混匀样品；4)混匀后的样品室温放置2-3分钟；5)4℃以2000g离心5分钟沉淀DNA；6)将酚-乙醇上清取出到新的离心管中，进行蛋白质的分离；7)沉淀按照每毫升核酸蛋白提取试剂加入1ml的比例加入0.1M柠檬酸钠(10％乙醇配制，pH8.5)；8)室温作用30分钟，期间适当温和颠倒离心管以混合样品；9)4℃以2000g离心5分钟，去除上清；10)重复步骤7-9过程1次，当DNA样品量大于200μg时重复2次；11)按照每毫升核酸蛋白提取试剂加入1.5-2ml的比例加入75％乙醇；12)室温作用10-20分钟，期间适当温和颠倒离心管以混合样品；13)4℃以2000g离心5分钟，去除上清；14)适当吹干DNA样品；15)按照每50-70mg组织样品或1×107细胞量加入300-600μl的比例加入8mM的NaOH，重悬DNA；16)4℃以12000g离心10分钟，上清移至新的离心管，去除不溶物；17)上清根据后续应用进行处理或保存。3.蛋白质的提取：上述DNA分离过程中取出的酚-乙醇上清进行蛋白质分离。1)按照每毫升核酸蛋白提取试剂加入1.5毫升异丙醇的比例在酚-乙醇上清中加入异丙醇；2)混匀后室温静置10分钟；3)样品4℃以12000g离心10分钟沉淀蛋白质，去除上清；4)沉淀的蛋白质进行洗涤步骤；5)按照每毫升核酸蛋白提取试剂加入2毫升的比例，加入0.3M盐酸胍(95％乙醇配制)；6)室温作用20分钟；7)样品4℃以7500g离心5分钟，去除洗涤上清；8)重复5-7步骤，2次或更多；9)加入2ml的100％乙醇在最后一次洗涤的蛋白沉淀中并振荡；10)室温作用20分钟；11)样品4℃以7500g离心5分钟，去除乙醇上清；12)将沉淀样品风干，但不用完全干；13)加入1％的SDS溶液200ul将蛋白质重悬，完全溶解蛋白质需将样品进行50℃水浴；14)样品4℃以10000g离心10分钟，去除不溶物质；15)将上清移至新的管子进本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核酸蛋白提取试剂，其特征在于，包含0.1‑0.8M的氯化钠，0.3‑1.0M的硫酸铵，0.7‑1.5M的盐酸胍以及体积分数10‑50％的苯酚。

【技术特征摘要】
1.一种核酸蛋白提取试剂，其特征在于，包含0.1-0.8M的氯化钠，0.3-1.0M的硫酸铵，0.7-1.5M的盐酸胍以及体积分数10-50％的苯酚。2.权利要求1所述的核酸蛋白提取试剂在核酸和/或蛋白质提取中的应用。3.一种从组织细胞样品中提取核酸和/或蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将所述组织细胞样品破碎成匀浆；S2：向所述匀浆中加入权利要求1所述的核酸蛋白提取试剂的有机溶剂稀释液，混匀，得到提取混合液；S3：离心所述提取混合液，分层得到水相、中层和有机相；S4：从相应的层中提取所述组织细胞样品的核酸和/或蛋白质。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述组织细胞样品与所述核酸蛋白提取试剂的量的比为每50-100mg组织细胞样品添加1ml所述核酸蛋白提取试剂。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂是氯仿，并且所述核酸蛋白提取试剂与氯仿的体积比为1：0.1-0.5。6.根据权利要求3-5中任一项所述的方法，其特征在于，所要提取的为RNA，从所述水相中提取，并且S4具体包括：S411：取S3中的水相，加入异丙醇使R...

【专利技术属性】
技术研发人员：王华林，张涛，
申请(专利权)人：湖北新纵科病毒疾病工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42