基于液相芯片检测呼吸道传染病病毒的方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种基于液相芯片系统检测呼吸道传染病病毒的方法及试剂盒。本发明专利技术设计出用于检测检测八种人源呼吸道传染病病毒的Tag探针和双结合探针，这些探针分别与不同颜色的荧光编码微球交联、混合后得到检测这些病毒的液相芯片，在通过双结合探针与目的片段结合，实现荧光检测，可以极大地缩短临床病毒的检测和诊断时间，提高诊断效率和诊断准确性，且通量高，市场潜力大。市场潜力大。

【技术实现步骤摘要】
基于液相芯片检测呼吸道传染病病毒的方法及试剂盒


[0001]本专利技术涉及检测呼吸道传染病病毒
，尤其涉及基于液相芯片检测呼吸道传染病病毒的方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]目前临床用于病毒检测的常规方法主要有：病原体的培养和分离，免疫学检测和核酸PCR检测。病原体培养和分离检测方法是一种传统的检测技术，检测结果准确可靠，但是敏感性较低，检测周期较长，不利于病毒感染早期的诊断；免疫学检测敏感性和特异性较强，但是检测需要材料较多且测定的结果与抗体来源及亲和力有关；核酸PCR检测方法是目前灵敏度较高的一种检测方法，较病原体分离方法的检出率高，但是当PCR的靶序列发生突变则容易造成假阴性结果。
[0003]MASA液相芯片(Multi
‑
Analyte Suspension Array，多功能悬浮点阵仪)技术是20世纪90年代后期发展起来的一种新型芯片技术。该技术将流式检测技术与芯片技术有机的结合在一起，具有高灵敏性，高异性，高通量，操作简单的特点。液相芯片体系由许多大小均一的圆形微球构成，每种微球上固定有不同的探针分子，不同种类的微球带用不同的荧光染料编码，分子杂交在悬浮溶液中进行。检测过程中目的分子能够与偶联在微球上的探针特异性结合，使交联探针的微球携带上报告分子藻红蛋白，当微球通过流式点阵仪(NovaHT)检测时，该仪器上的红色和绿色激光分别对单个微球上的编码荧光和报告分子藻红蛋白进行检测，检测结果通过荧光值直接判读。由于液相芯片具有准确性高，灵活性好，操作简单，通量大等特点，目前已被广泛用在细胞因子的检测，激酶的检测，抗原决定簇的筛选，疾病病原体的检测，以及与各种抗原抗体反应相关的检测当中。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，有必要提供一种新的多通道同时检测八种呼吸道传染病病毒的试剂盒和检测方法，检测通量更高，检测准确，灵敏度高。
[0005]本专利技术提供一种基于液相芯片检测呼吸道传染病病毒的方法，包括以下步骤：
[0006](1)设计PCR引物、Tag探针序列和双结合探针序列，所述PCR引物用于扩增八种目的基因片段，所述Tag探针为5
’
末端进行了Aminolinker C12修饰的针对八种目的基因设计的用于标识荧光微球的探针，所述双结合探针序列用于与采用所述PCR引物扩增目的基因片段的扩增产物及Tag荧光微球进行特异性杂交；
[0007]在与所述探针互补的链的PCR引物的5
’
端进行生物素修饰，所述PCR引物包括8对引物，所述8对引物如下：
[0008]PIV1上游引物：5
’‑
GGAGATGTCCCGTAGGAGAAC
‑3’
，如SEQ ID NO.1所示，
[0009]PIV1下游引物：5
’‑
Biotin
‑
ACAGAACATGATTTCCTGTTGTC
‑3’
，如SEQ ID NO.2所示；
[0010]PIV2上游引物：5
’‑
CATTGGTGTTACACTCACAATGT
‑3’
，如SEQ ID NO.3所示，
[0011]PIV2下游引物：5
’‑
Biotin
‑
AGCAAGTCTCARTTCAGCTAG
‑3’
，如SEQ ID NO.4所示；
[0012]PIV3上游引物：5
’‑
GTAAACTCAGAYTTGGTACCTGA
‑3’
，如SEQ ID NO.5所示，
[0013]PIV3下游引物：5
’‑
Biotin
‑
ATCATATTGACAATATCAAGTACAA
‑3’
，如SEQ ID NO.6所示；
[0014]2019
‑
nCoV
‑
N上游引物：5
’‑
CCACTAAAGCATACAATGTAACACA
‑3’
，如SEQ ID NO.7所示，
[0015]2019
‑
nCoV
‑
N下游引物：5
’‑
Biotin
‑
TCTTCTTTTTGTCCTTTTTAGGCTC
‑3’
，如SEQ ID NO.8所示；
[0016]2019
‑
nCoV
‑
Rd上游引物：5
’‑
GAATTTTGCTCTCAACATACAATGC
‑3’
，如SEQ ID NO.9所示，
[0017]2019
‑
nCoV
‑
Rd下游引物：5
’‑
Biotin
‑
AGTGGGTAAGCATCTATAGCTAAAG
‑3’
，如SEQ ID NO.10所示；
[0018]INFA上游引物：5
’‑
CTTCTAACCGAGGTCGAAACG
‑3’
，如SEQ ID NO.11所示，
[0019]INFA下游引物：5
’‑
Biotin
‑
AGGGCATTTTGGACAAAGCGTCTA
‑3’
，如SEQ ID NO.12所示；
[0020]INFB上游引物：5
’‑
AAAGAATTTGACCTAGACTCTGC
‑3’
，如SEQ ID NO.13所示，
[0021]INFB下游引物：5
’‑
Biotin
‑
TTCCTAGTTTTACTTGCATTGAATA
‑3’
，如SEQ ID NO.14所示；
[0022]GAPDH上游引物：5
’‑
CAAGGGCATCCTGGGCTACACT
‑3’
，如SEQ ID NO.15所示，
[0023]GAPDH下游引物：5
’‑
Biotin
‑
CCCAGCGTCAAAGGTGGAGGA
‑3’
，如SEQ ID NO.16所示；
[0024]所述Tag探针序列如下：
[0025]PIV1
‑
T：5
’‑
NH2C12
‑
GATTTGTATTGATTGAGATTAAAG
‑3’
，如SEQ ID NO.17所示；
[0026]PIV2
‑
T：5
’‑
NH2C12
‑
TGATTGTAGTATGTATTGATAAAG
‑3’
，如SEQ ID NO.18所示；
[0027]PIV3
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于液相芯片检测呼吸道传染病病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)设计PCR引物、Tag探针序列和双结合探针序列，所述PCR引物用于扩增八种目的基因片段，所述Tag探针为5
’
末端进行了Aminolinker C12修饰的针对八种目的基因设计的用于标识荧光微球的探针，所述双结合探针序列用于与采用所述PCR引物扩增目的基因片段的扩增产物及Tag荧光微球进行特异性杂交；在与所述探针互补的链的PCR引物的5
’
端进行生物素修饰，所述PCR引物包括8对引物，所述8对引物如下：PIV1上游引物：5
’‑
GGAGATGTCCCGTAGGAGAAC
‑3’
，PIV1下游引物：5
’‑
Biotin
‑
ACAGAACATGATTTCCTGTTGTC
‑3’
；PIV2上游引物：5
’‑
CATTGGTGTTACACTCACAATGT
‑3’
，PIV2下游引物：5
’‑
Biotin
‑
AGCAAGTCTCARTTCAGCTAG
‑3’
；PIV3上游引物：5
’‑
GTAAACTCAGAYTTGGTACCTGA
‑3’
，PIV3下游引物：5
’‑
Biotin
‑
ATCATATTGACAATATCAAGTACAA
‑3’
；2019
‑
nCoV
‑
N上游引物：5
’‑
CCACTAAAGCATACAATGTAACACA
‑3’
，2019
‑
nCoV
‑
N下游引物：5
’‑
Biotin
‑
TCTTCTTTTTGTCCTTTTTAGGCTC
‑3’
；2019
‑
nCoV
‑
Rd上游引物：5
’‑
GAATTTTGCTCTCAACATACAATGC
‑3’
，2019
‑
nCoV
‑
Rd下游引物：5
’‑
Biotin
‑
AGTGGGTAAGCATCTATAGCTAAAG
‑3’
；INFA上游引物：5
’‑
CTTCTAACCGAGGTCGAAACG
‑3’
，INFA下游引物：5
’‑
Biotin
‑
AGGGCATTTTGGACAAAGCGTCTA
‑3’
；INFB上游引物：5
’‑
AAAGAATTTGACCTAGACTCTGC
‑3’
，INFB下游引物：5
’‑
Biotin
‑
TTCCTAGTTTTACTTGCATTGAATA
‑3’
；GAPDH上游引物：5
’‑
CAAGGGCATCCTGGGCTACACT
‑3’
，GAPDH下游引物：5
’‑
Biotin
‑
CCCAGCGTCAAAGGTGGAGGA
‑3’
；所述Tag探针序列如下：PIV1
‑
T：5
’‑
NH2C12
‑
GATTTGTATTGATTGAGATTAAAG
‑3’
；PIV2
‑
T：5
’‑
NH2C12
‑
TGATTGTAGTATGTATTGATAAAG
‑3’
；PIV3
‑
T：5
’‑
NH2C12
‑
GATTGTAAGATTTGATAAAGTGTA
‑3’
；2019
‑
nCoV
‑
N
‑
T：5
’‑
NH2C12
‑
GATTTGAAGATTATTGGTAATGTA
‑3’
；2019
‑
nCoV
‑
Rd
‑
T：5
’‑
NH2C12
‑
GATTGATTATTGTGATTTGAATTG
‑3’
；INFA
‑
T：5
’‑
NH2C12
‑
GATTTGATTGTAAAAGATTGTTGA
‑3’
；INFB
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：王华林，
申请(专利权)人：湖北新纵科病毒疾病工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：