转运RNA片段及其应用制造技术

本发明专利技术公开了多种转运RNA片段，它是来源于以下全长序列的包含20-55核苷酸的片段：tRNA-val、tRNA-gly、tRNA-glu或tRNA-his；其中，tRNA-val的全长序列如SEQ ID NO1所示；tRNA-gly的全长序列如SEQ ID NO2所示；tRNA-glu的全长序列如SEQ ID NO3所示；tRNA-his的全长序列如SEQ ID NO4所示。本发明专利技术的转运RNA片段可用于治疗肿瘤，调控血管新生。

Transport of RNA fragments and their use

The invention discloses a variety of transport RNA segments, which is derived from the following sequence contains 20-55 nucleotide fragments: tRNA-val, tRNA-gly, tRNA-glu or tRNA-his; the tRNA-val sequence is shown as SEQ ID NO1; tRNA-gly sequence is shown as SEQ ID NO2; full-length tRNA-glu sequence of the as SEQ ID NO3; tRNA-his sequence is shown as SEQ ID NO4. The transport RNA fragments of the present invention can be used to treat tumors and regulate angiogenesis.

【技术实现步骤摘要】
转运RNA片段及其应用
本专利技术涉及生物工程技术，特别涉及转运RNA片段及其应用。
技术介绍
血管新生(angiogenesis)是指在原有血管的基础上内皮细胞增殖、迁移和重塑形成新血管的生物学过程，其在生物体发育、生长过程中十分普遍，并广泛参与创伤修复、各种缺血性疾病和肿瘤生长侵袭等病理生理过程。深入研究血管新生的调控机制对促进组织修复、抑制肿瘤生长和迁移都具有重要的指导意义。已有研究表明多种非编码RNA，包括miRNA、piRNA、lncRNA等都参与血管新生的调控。转运RNA(tRNA)是一类长73-94核苷酸的小分子RNA，是细胞活动不可或缺的组成部分，他们主要负责将信使RNA(mRNA)序列翻译成氨基酸序列合成蛋白。除此之外，tRNA还参与细胞交流、反转录和蛋白降解等过程。随着测序技术的进步，在最近几年中，研究人员在多种细胞系及组织中发现了一批来源于tRNA序列的更短的片段，主要包括以下几类：剪切于成熟tRNA反义密码子前，产生5′tRNAhalves和3′tRNAhalves，每段有30-35个核苷酸的长度；剪切于D环或T环分别产生5’-tRFs和3’-tRFs，长约20个核苷酸。此外，tRNA前体剪切也可产生多种小片段RNA。研究表明，多种生理病理刺激包括缺氧、高渗、射线照射、病毒感染等均可导致tRNA剪切片段的产生，并且这些片段参与如翻译起始调控、细胞增殖、凋亡、迁移等多种生物学过程，说明tRNA片段并非随机剪切产生的垃圾RNA，而是经过精密调控剪切产生的具有特定生物活性的非编码小RNA。这类小RNA是否参与血管新生尚未见报道。我们的研究发现在缺氧条件下多种组织都会发生tRNA的剪切，产生tRNA片段(参见图1，图2)，在内皮细胞中过表达这些片段可通过抑制内皮细胞的增殖、迁移、成管等功能，从而抑制血管新生(参见图3)。在种植肿瘤细胞的老鼠中注射本专利技术的转运RNA片段，可抑制肿瘤的生长(参见图4)。
技术实现思路
本专利技术的目的，就是为了提供一种转运RNA片段及其应用。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：转运RNA片段，是来源于以下全长序列的包含20-55核苷酸的片段：tRNA-val、tRNA-gly、tRNA-glu或tRNA-his；其中，tRNA-val的全长序列如SEQIDNO1所示；tRNA-gly的全长序列如SEQIDNO2所示；tRNA-glu的全长序列如SEQIDNO3所示；tRNA-his的全长序列如SEQIDNO4所示。来源于tRNA-val的转运RNA片段包括SEQIDNO5-SEQIDNO7所示的tRNA-val片段序列，以及SEQIDNO8-SEQIDNO10所示的tRNA-val片段反义序列。来源于tRNA-gly的转运RNA片段包括SEQIDNO11-SEQIDNO13所示的tRNA-gly片段序列，以及SEQIDNO14-SEQIDNO16所示的tRNA-gly片段反义序列。来源于tRNA-glu的转运RNA片段包括SEQIDNO17-SEQIDNO19所示的tRNA-glu片段序列，以及SEQIDNO20-SEQIDNO22所示的tRNA-glu片段反义序列。来源于tRNA-His的转运RNA片段包括SEQIDNO23-SEQIDNO25所示的tRNA-His片段序列，以及SEQIDNO26-SEQIDNO28所示的tRNA-His片段反义序列。上述转运RNA片段在治疗肿瘤中的应用；所述肿瘤包括肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、脑瘤、黑色素瘤或骨肉瘤。上述转运RNA片段反义序列或其组合在治疗缺血性疾病中的应用；所述缺血性疾病包括脑缺血、心肌缺血、下肢缺血或肾缺血。包含上述转运RNA片段的药物组合物，包括由所述转运RNA片段合成的核酸片段及碱基修饰，激活或抑制转运RNA片段表达的试剂，以及药学试剂能接受的载体。可用于局部注射或静脉注射的权利要求1所述转运RNA片段的悬液。包含上述转运RNA片段的复合物，通过将所述转运RNA片段锚定、注入载体表面或内部，形成形状固定、可供植入的复合物，该复合物植入后，所述转运RNA片段缓释或可控释放。在内皮细胞中过表达本专利技术的转运RNA片段，可通过抑制内皮细胞的增殖、迁移、成管等功能，从而抑制血管新生。在肿瘤细胞中过表达本专利技术的转运RNA片段，可抑制肿瘤细胞的增殖迁移。附图说明：图1显示Northernblot(A)和定量PCR(B)分析验证tRNAVal-和tRNAGly来源的小RNA在缺血脑组织中水平升高；图2显示tRNA来源小片段在下肢缺血组织及缺氧内皮细胞中水平升高。其中：(A)定量PCR检测tRNAVal和tRNAGly来源的小RNA在下肢缺血组织中的水平。(B)Northernblot验证tRNAVal和tRNAGly来源的小RNA在下肢缺血3天后的组织中水平升高。(C)定量PCR检测tRNAVal和tRNAGly来源的小RNA在缺氧内皮细胞中的水平。(D)Northernblot验证内皮细胞缺氧48小时后小RNA水平升高。图3显示tRNA来源的小RNA抑制血管新生。合成tRNAVal和tRNAGly来源的小RNA模拟序列，转染血管内皮细胞24小时后检测下列指标：(A)转染Oligo-Val和Oligo-Gly后抑制内皮细胞增殖；(B-C)tRNAVal和tRNAGly来源的小RNA抑制内皮细胞迁移；(D-H)tRNAVal和tRNAGly来源的小RNA抑制内皮细胞成管。图4显示tRNA-Gly片段模拟物抑制胰腺癌生长。图5、图6显示tRNA-Gly片段反义序列促进缺血下肢血管新生。具体实施方式实施例1tRNA-Gly片段模拟物抑制胰腺癌生长将胰腺癌细胞悬液经皮下注射入裸鼠腹股沟，随机分为2组，每组5只老鼠，同时经尾静脉注射tRNA-Gly片段模拟物序列，隔天注射至第30天，处死所有裸鼠，取出瘤体，检查并测量。结果显示注射tRNA-Gly片段类似物明显抑制胰腺癌瘤体大小，参见图4，图4中上部三个瘤体是对照注射组的情况，下部三个瘤体是tRNA-Gly片段模拟物注射组的情况。tRNA-Gly片段模拟物序列为GCATTGGTGGTTCAGTGGTAGAATTCTCGCCT(SEQIDNO12)。实施例2定点注射tRNA-Gly片段反义序列促进缺血下肢血管新生构建10只小鼠下肢缺血模型，并随机分为A、B两组，A组注射对照无义序列RNA，B组注射tRNA-Gly片段反义序列，分别于第7天和第14天通过多普勒观察血流恢复情况。结果显示与对照组相比，注射tRNA-Gly片段反义序列组血供明显恢复，参见图5、图6，图5是对照注射组的情况，图6是tRNA-Gly片段反义序列注射组的情况。说明注射tRNA-Gly片段反义序列可促进缺血下肢血管新生。tRNA-Gly片段反义序列为AGGCGAGAATTCTACCACTGAACCACCAATGC(SEQIDNO15)。本文档来自技高网...

【技术保护点】
转运RNA片段，是来源于以下全长序列的包含20‑55核苷酸的片段：tRNA‑val、tRNA‑gly、tRNA‑glu或tRNA‑his；其中，tRNA‑val的全长序列如SEQ ID NO1所示；tRNA‑gly的全长序列如SEQ ID NO2所示；tRNA‑glu的全长序列如SEQ ID NO3所示；tRNA‑his的全长序列如SEQ ID NO4所示。

【技术特征摘要】
1.转运RNA片段，是来源于以下全长序列的包含20-55核苷酸的片段：tRNA-val、tRNA-gly、tRNA-glu或tRNA-his；其中，tRNA-val的全长序列如SEQIDNO1所示；tRNA-gly的全长序列如SEQIDNO2所示；tRNA-glu的全长序列如SEQIDNO3所示；tRNA-his的全长序列如SEQIDNO4所示。2.根据权利要求1所述转运RNA片段，其特征在于：来源于tRNA-val的转运RNA片段包括SEQIDNO5-SEQIDNO7所示的tRNA-val片段序列，以及SEQIDNO8-SEQIDNO10所示的tRNA-val片段反义序列。3.根据权利要求1所述转运RNA片段，其特征在于：来源于tRNA-gly的转运RNA片段包括SEQIDNO11-SEQIDNO13所示的tRNA-gly片段序列，以及SEQIDNO14-SEQIDNO16所示的tRNA-gly片段反义序列。4.根据权利要求1所述转运RNA片段，其特征在于：来源于tRNA-glu的转运RNA片段包括SEQIDNO17-SEQIDNO19所示的tRNA-glu片段序列，以及SEQIDNO20-SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓志锋，李青，汪泱，胡斌，牛鑫，
申请(专利权)人：上海市第六人民医院东院，邓志锋，
类型：发明
国别省市：上海,31