番茄果实硬度性状的连锁标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种番茄果实硬度性状的连锁标记及其应用。本发明专利技术提供了一种引物组合，由引物对I和引物对II组成；所述引物对I由引物L‑1和引物R‑1组成；所述引物L‑1如序列表的序列1所示；所述引物R‑1如序列表的序列2所示；所述引物对II由引物L‑2和引物R‑2组成；所述引物L‑2如序列表的序列3所示；所述引物R‑2如序列表的序列4所示。本研究首次利用分子标记辅助育种的方法，开发了番茄果实硬度的连锁标记。利用果实硬度相关连锁标记来选育高硬度番茄果实品种可以在番茄的幼苗期就进行鉴定，不需要等到番茄结果后再进行表型测定，大大提早了鉴定时间，缩短了不必要的种植面积，减少了人力和物力的消耗。

Linkage markers of firmness characters of tomato fruit and application thereof

The invention discloses a linkage mark of firmness character of tomato fruit and application thereof. The present invention provides a primer combination by primer I and primer II; the primers of I by primer L and primer R 1 1; the primer L 1 as shown in sequence 1 of the sequence list; the primers R 1 sequence 2 in a sequence table the primers of II; by primer L and primer R 2 2; the primer L 2 as shown in sequence 3 of the sequence list; the primer R 2 as shown in sequence 4 of the sequence list. In this study, a linkage marker for the firmness of tomato fruit was developed for the first time by molecular marker assisted breeding. The fruit hardness related markers to breeding high hardness of tomato fruit can be identified in tomato seedling stage, does not need to wait until after the determination results of tomato phenotype, early identification of time greatly shortened, unnecessary planting area, reduce the consumption of manpower and materials.

【技术实现步骤摘要】
番茄果实硬度性状的连锁标记及其应用
本专利技术涉及一种番茄果实硬度性状的连锁标记及其应用。
技术介绍
番茄是世界上广泛生产和消费的一种重要的蔬菜作物，番茄果实硬度是评价一个番茄品种优劣的重要因素。果实硬度与果实耐压力和果皮耐穿刺力直接相关，影响番茄果实耐储运性、货架期及口感等多个重要的品质指标。尤其对于加工番茄而言，原料采收后，需要经过长时间的运输和排队交售才能进入加工厂，在此过程中硬度较差的品种极易出现果实破裂，果汁外渗，严重时还会引起大量果实的霉变腐烂，影响了番茄的品质，也使农户们承受了巨大的经济损失。因此，利用分子标记辅助育种方法选择高硬度的番茄品种具有重要意义。利用传统方法选育果实硬度大的品种，主要依赖于对果实硬度的评价和测定。待番茄果实成熟后，测定待鉴定品种的果实硬度，从中挑选出硬度较高的候选品种并观察下一代表型。这种方法耗时长，鉴定不准确且消耗过多的人力和物力。基于分子标记辅助选择(marker-assistedselectionMAS)技术的分子标记辅助育种(molecularmarker-assistedbreeding)，是蔬菜分子育种的重要方面，由于其能快速高效获得含有目标基因的个体，现已在育种中得到广泛应用并在某些性状上取得成功。目前，关于番茄果实硬度性状，还没有可应用于生产中的分子标记，因此，开发能够被广泛利用于育种中的标记，变得尤为重要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种番茄果实硬度性状的连锁标记及其应用。本专利技术提供了一种引物组合，由引物对I和引物对II组成；所述引物对I由引物L-1和引物R-1组成；所述引物L-1为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物R-1为如下(a3)或(a4)：(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物对II由引物L-2和引物R-2组成；所述引物L-2为如下(a5)或(a6)：(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物R-2为如下(a7)或(a8)：(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代且与序列4具有相同功能的DNA分子。所述引物组合的用途为如下(b1)-(b6)中的至少一种：(b1)鉴定或辅助鉴定番茄果实硬度性状；(b2)筛选或辅助筛选果实硬度高的番茄；(b3)筛选或辅助筛选果实硬度低的番茄；(b4)制备用于鉴定或辅助鉴定番茄果实硬度性状的试剂盒；(b5)制备用于筛选或辅助筛选果实硬度高的番茄的试剂盒；(b6)制备用于筛选或辅助筛选果实硬度低的番茄的试剂盒。本专利技术还保护所述引物组合的应用，为如下(b1)-(b6)中的至少一种：(b1)鉴定或辅助鉴定番茄果实硬度性状；(b2)筛选或辅助筛选果实硬度高的番茄；(b3)筛选或辅助筛选果实硬度低的番茄；(b4)制备用于鉴定或辅助鉴定番茄果实硬度性状的试剂盒；(b5)制备用于筛选或辅助筛选果实硬度高的番茄的试剂盒；(b6)制备用于筛选或辅助筛选果实硬度低的番茄的试剂盒。本专利技术还保护含有所述引物组合的试剂盒；所述试剂盒的应用为如下(c1)-(c3)中的至少一种：(c1)鉴定或辅助鉴定番茄果实硬度性状；(c2)筛选或辅助筛选果实硬度高的番茄；(c3)筛选或辅助筛选果实硬度低的番茄。本专利技术还保护所述试剂盒的制备方法，包括将所述引物组合中的各条引物进行独立包装的步骤。本专利技术还保护鉴定或辅助鉴定番茄果实硬度性状的方法(方法甲)，包括如下步骤：(d1)以待测番茄的基因组DNA为模板，采用所述引物对I进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；(d2)以待测番茄的基因组DNA为模板，采用所述引物对II进行PCR扩增，将扩增产物采用speI酶切，得到酶切产物；如果步骤(d1)得到的PCR扩增产物中具有126bp的DNA片段且不含有165bp的DNA片段，同时步骤(d2)得到的酶切产物中具有116bp的DNA片段且不具有146bp的DNA片段、待测番茄为或候选为果实硬度高的番茄，如果步骤(d1)得到的PCR扩增产物中具有165bp的DNA片段且不具有126bp的DNA片段，同时步骤(d2)得到的酶切产物中具有146bp的DNA片段且不具有116bp的DNA片段、待测番茄为或候选为果实硬度低的番茄。本专利技术还保护鉴定或辅助鉴定番茄果实硬度性状的方法(方法乙)，包括如下步骤：检测待测番茄基因组DNA中是否含有特异DNA片段甲、特异DNA片段乙、特异DNA片段丙和特异DNA片段丁；如果所述基因组DNA中同时含有特异DNA片段甲和特异DNA片段丙且不含有特异DNA片段乙或特异DNA片段丁、待测番茄为或候选为果实硬度高的番茄，如果所述基因组DNA中同时含有特异DNA片段乙和特异DNA片段丁且不含有特异DNA片段甲或特异DNA片段丙、待测番茄为或候选为果实硬度低的番茄。所述特异DNA片段甲为序列表的序列5所示的DNA分子。所述特异DNA片段乙为序列表的序列6所示的DNA分子。所述特异DNA片段丙为序列表的序列7所示的DNA分子。所述特异DNA片段丁为序列表的序列8所示的DNA分子。所述特异DNA片段甲、特异DNA片段乙、特异DNA片段丙或特异DNA片段丁均位于番茄10号染色体0.2M的区间内。本专利技术还保护一种筛选或辅助筛选果实硬度高的番茄的方法(方法丙)，包括如下步骤：(e1)按照所述方法甲或所述方法乙鉴定待测番茄果实硬度性状；(e2)基于步骤(e1)的结果筛选或辅助筛选果实硬度高的番茄。本专利技术还保护一种筛选或辅助筛选果实硬度低的番茄的方法(方法丁)，包括如下步骤：(f1)按照所述方法甲或所述方法乙鉴定待测番茄果实硬度性状；(f2)基于步骤(f1)的结果筛选或辅助筛选果实硬度低的番茄。本专利技术还保护所述引物组合或以上任一所述方法在番茄育种中的应用。本专利技术还保护番茄育种方法，为方法A或方法B。所述方法A包括如下步骤：将所述方法丙筛选得到的果实硬度高的番茄作为育种材料；所述方法B包括如下步骤：将所述方法丁筛选得到的果实硬度低的番茄作为育种材料。以上任一所述待测番茄具体可为番茄‘Moneymaker’(Solanumlycopersicum‘Moneymaker’)及其自交后代。所述番茄‘Moneymaker’(Solanumlycopersicum‘Moneymaker’)在TomatoGeneticsResourceCenter的代码为LA2706。以上任一所述待测番茄具体可为番茄LA1310及其自交后代。所述番茄LA1310在TomatoGeneticsResourceCenter的代码为LA1310。以上任一所述待测番茄具体可为番茄‘Moneymaker’(Solanumlycopersicum‘Moneymaker’)和番茄LA1310的杂交后代。以上任一所述果实硬度高的番茄为果实耐穿刺力大于等于2.55N和/或果实耐压力大于等于15N的番茄；所述果实硬度低的番茄为果实耐穿刺力小于2.55N和/或果实耐压本文档来自技高网...

【技术保护点】
引物组合，由引物对I和引物对II组成；所述引物对I由引物L‑1和引物R‑1组成；所述引物L‑1为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物R‑1为如下(a3)或(a4)：(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物对II由引物L‑2和引物R‑2组成；所述引物L‑2为如下(a5)或(a6)：(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物R‑2为如下(a7)或(a8)：(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代且与序列4具有相同功能的DNA分子。

【技术特征摘要】
1.引物组合，由引物对I和引物对II组成；所述引物对I由引物L-1和引物R-1组成；所述引物L-1为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物R-1为如下(a3)或(a4)：(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物对II由引物L-2和引物R-2组成；所述引物L-2为如下(a5)或(a6)：(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物R-2为如下(a7)或(a8)：(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代且与序列4具有相同功能的DNA分子。2.权利要求1所述引物组合的应用，为如下(b1)-(b6)中的至少一种：(b1)鉴定或辅助鉴定番茄果实硬度性状；(b2)筛选或辅助筛选果实硬度高的番茄；(b3)筛选或辅助筛选果实硬度低的番茄；(b4)制备用于鉴定或辅助鉴定番茄果实硬度性状的试剂盒；(b5)制备用于筛选或辅助筛选果实硬度高的番茄的试剂盒；(b6)制备用于筛选或辅助筛选果实硬度低的番茄的试剂盒；所述果实硬度高的番茄为果实耐穿刺力大于等于2.55N和/或果实耐压力大于等于15N的番茄；所述果实硬度低的番茄为果实耐穿刺力小于2.55N和/或果实耐压力小于15N的番茄。3.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒；所述试剂盒的应用为如下(c1)-(c3)中的至少一种：(c1)鉴定或辅助鉴定番茄果实硬度性状：(c2)筛选或辅助筛选果实硬度高的番茄；(c3)筛选或辅助筛选果实硬度低的番茄；所述果实硬度高的番茄为果实耐穿刺力大于等于2.55N和/或果实耐压力大于等于15N的番茄；所述果实硬度低的番茄为果实耐穿刺力小于2.55N和/或果实耐压力小于15N的番茄。4.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将权利要求1所述引物组合中的各条引物进行独立包装的步骤。5.鉴定或辅助鉴定番茄果实硬度性状的方法，包括如下步骤：(d1)以待测番茄的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述的引物对I进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；(d2)以待测番茄的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述的引物对II进行PCR扩增，将扩增产物采用speI酶切，得到酶切产物；如果步骤(d1)得到的PCR扩增产物中具有126bp的DNA片段且不含有165bp的DNA片段，同时步骤(d2)得到的酶切产物中具有116bp的DNA片段且不具有146bp的D...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔霞，李仁，孙帅，张率斌，
申请(专利权)人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11