The invention provides a method for efficiently extracting fungal genome DNA, which belongs to the field of biological engineering. The method uses a simple physical grinding method and uses a solution A to wash repeatedly, which can remove most of the hydrophobic proteins in the cell powder and the metal ions in the culture liquid. The beneficial effects are as follows: 1. By analyzing the pure quartz sand and grinding with liquid nitrogen, not only can the damage to the cell wall of the fungus be increased, but also the bacteria block can be easily dispersed into powder. 2, using the solution A to repeatedly wash the powder after grinding, as much as possible to dissolve the amount of DNA in the washing liquid to the minimum, so that the residual bacteria debris in the DNA content reached 90% of the total output. 3, the use of common reagents to facilitate the extraction of large amounts of fungal DNA, easy to achieve and enlarge production. The invention can be applied to all molds, and the genomic DNA obtained has high purity and meets the subsequent construction libraries and DNA sequencing, etc..
【技术实现步骤摘要】
一种高效率提取霉菌基因组DNA的方法
本专利技术属于生物工程领域,具体涉及一种高效率的提取高质量和高浓度的霉菌基因组提取方法。
技术介绍
自从人类基因组测序计划完成之后,通过DNA序列研究生物的遗传性状,已经成为现代生物学研究中不可分割的部分,其中全基因组测序已经是一种常用的研究方法,但现代分子生物学研究技术对DNA样品的要求较高,以往的SDS法、CTAB法作用效果无法满足霉菌全基因组测序的高质量文库的要求。霉菌与酵母等真菌不同,霉菌菌丝细胞的构造虽然与酵母菌类似,但是其生长都是由菌丝顶端细胞的不断延伸而实现的并且菌体之间连接紧密,在液体培养基中可看到霉菌以聚集的球体呈现,培养基清澈。随着霉菌菌丝顶端不断向前伸展,细胞壁和细胞质的形态、成分都逐渐变化、加厚并趋于成熟,而成熟区,由内至外相应地为几丁质层、蛋白质层、葡聚糖蛋白网层和葡聚糖层组成,一般的SDS法和CTAB法无法将其大量破坏。由于霉菌在液体培养基中生长时有聚集的特性,这大大降低了裂解试剂与菌体的有效接触面积。在使用传统的SDS、CTAB法时,主要从上清液中获取基因组DNA,无法将霉菌的基因组DNA大量提取,样品中有较多的多糖、糖蛋白的残留,这对打断DNA样品带来非常大的困难,且很难去除,因此在构建文库时样品一定要将多糖或糖蛋白去除干净。在样品处理方面,常规的液氮研磨对研磨者的身体素质要求过高,并且耗时耗力,不利于实验的重复。以上两个问题都直接影响了霉菌基因组DNA提取的效率和质量,最终导致传统的提取方法无法满足构建文库等样品要求过高的实验。
技术实现思路
为了解决现有技术中的问题,本专利技术提供一种高 ...
【技术保护点】
一种简单高效提取霉菌基因组DNA的方法,其特征在于,包括以下步骤:1)预处理:将霉菌接种在液体培养基(察氏培养基)中,28℃下培养5‑7天,然后将菌体收集,抽滤尽最大可能的去除水分,称重后,取100mg菌体放入研磨器中,按重量比计算石英砂:菌体为0.25‑2:1的比例加入石英砂,随后加入研磨器容量约1/2V的液氮,在液氮挥发时,用研磨棒按压菌体,待液氮挥发干净后,利用其中石英砂将冻实的菌体研磨成粉末,该操作重复3‑6次,总用时大约2min;2)细胞洗涤:将已经研磨成粉末的菌体用勺子盛入2mL EP管中,加入1mL溶液A,颠倒4‑6次后,12000转离心10min,留下沉淀,丢弃上清液;3)细胞裂解:将上一步的沉淀与1mL 溶液B混匀,置于65℃水浴锅中,温育30min后,取出,12000转离心10min,收集上清液于2mL EP管中,标记为S;留下沉淀,与1mL 溶液C混匀,置于65℃水浴锅,温育60min后,取出,12000转离心10min,收集上清液于2mL EP管中,标记为C;4)去除蛋白质:将步骤3)中的标记为S和C的上清液与酚氯仿溶液等体积混匀,12000转离心5min,收集 ...
【技术特征摘要】
1.一种简单高效提取霉菌基因组DNA的方法,其特征在于,包括以下步骤:1)预处理:将霉菌接种在液体培养基(察氏培养基)中,28℃下培养5-7天,然后将菌体收集,抽滤尽最大可能的去除水分,称重后,取100mg菌体放入研磨器中,按重量比计算石英砂:菌体为0.25-2:1的比例加入石英砂,随后加入研磨器容量约1/2V的液氮,在液氮挥发时,用研磨棒按压菌体,待液氮挥发干净后,利用其中石英砂将冻实的菌体研磨成粉末,该操作重复3-6次,总用时大约2min;2)细胞洗涤:将已经研磨成粉末的菌体用勺子盛入2mLEP管中,加入1mL溶液A,颠倒4-6次后,12000转离心10min,留下沉淀,丢弃上清液;3)细胞裂解:将上一步的沉淀与1mL溶液B混匀,置于65℃水浴锅中,温育30min后,取出,12000转离心10min,收集上清液于2mLEP管中,标记为S;留下沉淀,与1mL溶液C混匀,置于65℃水浴锅,温育60min后,取出,12000转离心10min,收集上清液于2mLEP管中,标记为C;4)去除蛋白质:将步骤3)中的标记为...
【专利技术属性】
技术研发人员:张军林,赵志扬,岳硕豪,赖晓晶,田弛,刘帅,李毅,
申请(专利权)人:武汉生物工程学院,
类型:发明
国别省市:湖北,42
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。