本发明专利技术公开了血浆microRNAs用于制备筛查诊断女性群体中肺腺癌患者的诊断试剂的用途，由如下microRNAs组成：miR‑224‑3p、miR‑146a‑5p、miR‑648、miR‑523‑5p、miR‑758‑5p；miR‑224‑3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；miR‑146a‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；miR‑648的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；miR‑523‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；miR‑758‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。本发明专利技术提供的血浆microRNAs标记物可以准确用于筛查诊断女性群体中肺腺癌患者，灵敏度高，特异性强，实现女性群体中肺腺癌患者的无介入诊断。
【技术实现步骤摘要】
血浆microRNAs用于制备筛查诊断女性群体中肺腺癌患者的诊断试剂的用途
本专利技术属于临床诊断领域，涉及肺腺癌筛查诊断试剂，具体涉及血浆microRNAs用于制备筛查诊断肺腺癌患者的诊断试剂的用途。
技术介绍
肺癌是全球最常见的恶性肿瘤，死亡率居恶性肿瘤之首。我国肺癌发病率呈现逐年上升趋势，年平均增长近2％。肺癌根据病理学特点的不同分为多种组织类型，肺癌组织类型不同，其治疗措施也不同。根据2004版WHO分类，常见肺癌组织病理学分型分为非小细胞癌(NSCLC)和小细胞癌(SCLC)。非小细胞癌又分为鳞状细胞癌(SCC)、腺癌(AC)和大细胞癌(LCC)。不同肺癌临床治疗方案不同，预后效果也不同。因此，为了提高治疗效果，肺癌的治疗策略已经从传统的以分期为基础的治疗模式转变为以组织学类型和基因突变为指导的个体化、精准的多学科治疗模式。个体化治疗提高了肺癌的治疗和预后效果。腺癌作为最常见的肺癌组织学类型，在全球及我国发病率均呈上升趋势。流行病学研究结果显示，非小细胞肺癌的发病有明显的性别差异，尤其是腺癌。腺癌占原发肺癌的50％，是非吸烟患者的主要组织学类型。目前在肺癌研究最深入、临床应用最多的是针对表皮生长因子受体EGFR的小分子酪氨酸激酶抑制剂，而易瑞沙、吉非替尼和厄洛替尼是其主要的代表。随着对这类小分子靶向治疗药物研究的深入，逐渐发现其疗效与肺癌患者的临床特征相关，其中亚裔、女性、腺癌、不吸烟是其临床“优势人群”的主要特征(杨新杰等，盐酸埃克替尼一线治疗晚期肺腺癌的临床疗效观察，中国肺癌杂志2013年7月；马智勇等，易瑞沙治疗男性、不吸烟或轻度吸烟的晚期肺腺癌患者疗效研究，医药论坛杂志2010年11月)。这些结果让研究者得出一个推测：腺癌在男性和女性中的发病率、发病机制和临床治疗效果均存在差异。为了适应个性化治疗，腺癌的研究有必要分性别开展。复旦大学附属中山医院黄威博士在毕业论文“三种病理亚型肺癌组织中肿瘤标记物的发现、验证及其靶基因的初步筛选”中详细研究了用于肺癌诊断的microRNAs标记物。首先，作者应用激光捕获显微切割技术从44例正常肺组织、36例腺癌、30例鳞癌及16例小细胞癌中获取纯的上皮细胞和肿瘤细胞，进行全基因组microRNAs表达分析，经过方差分析和聚类分析发现16个差异表达的microRNAs可以区分三种肺癌病理亚型(肺腺癌、肺鳞癌和小细胞肺癌)，并最终确定其中的7个作为候选标记物进行进一步验证；然后，作者在三种病理亚型肺癌组织中验证7个候选microRNAs肿瘤标记物，建立诊断肺癌病理亚型的回归模型，并且分析7个候选microRNAs的预后价值，结果发现：单个候选microRNA鉴别正常肺组织与肺腺癌的AUC值不理想，经过Logistic回归分析建立模型发现hsa-miR-375和hsa-miR-34a两个相互配合可以得到最佳AUC0.910，敏感性80％，特异性97％，敏感度较低。也就是说，经过作者的研究，无论是单个microRNA还是多个microRNAs的联合均不能有效诊断区分正常肺组织与肺腺癌，准确度和敏感度不尽如人意。而且，该方法是一种基于组织中标志物的方法，需要取患者的肺组织用于检测，依然是一种介入诊断方法，不方便。申请人认为，上述博士论文未能筛选出有效诊断区分正常肺组织与肺腺癌的microRNAs的关键原因在于忽视了肺腺癌的性别差异，样本分类错误，自然无法得出理想结果。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供血浆microRNAs用于制备筛查诊断肺腺癌患者的诊断试剂的用途；具体地，为提高筛查的准确度、敏感度和特异性，根据性别差异，提供一组血浆microRNAs标记物用于制备筛查诊断男性群体中肺腺癌患者的诊断试剂，提供另外一组血浆microRNAs标记物用于制备筛查诊断女性群体中肺腺癌患者的诊断试剂。上述目的是通过如下技术方案实现的：筛查诊断男性群体中肺腺癌患者的技术方案如下：一组用于筛查诊断男性群体中肺腺癌患者的血浆microRNAs标记物，由如下microRNAs组成：miR-224-3p、miR-146a-5p、miR-564、miR-615-5p、miR-601；miR-224-3p的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；miR-146a-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；miR-564的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；miR-615-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；miR-601的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。一组筛查诊断男性群体中肺腺癌患者的microRNAs引物、探针的组合，microRNAs引物包括反转录引物、定量PCR前引物和定量PCR后引物：miR-224-3p的反转录引物序列如SEQIDNO.9所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.17所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.25所示；miR-146a-5p的反转录引物序列如SEQIDNO.10所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.18所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.25所示；miR-564的反转录引物序列如SEQIDNO.11所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.19所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.25所示；miR-615-5p的反转录引物序列如SEQIDNO.12所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.20所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.25所示；miR-601的反转录引物序列如SEQIDNO.13所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.21所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.25所示；各microRNAs探针的核苷酸序列如SEQIDNO.26所示。一种用于筛查诊断男性群体中肺腺癌患者的诊断试剂，含有上述microRNAs引物、探针的组合。一种用于筛查诊断男性群体中肺腺癌患者的诊断试剂盒，含有上述microRNAs引物、探针的组合。进一步地，所述的诊断试剂盒还含有PCR反应常用的酶和试剂，如逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl2、DEPC水和Taq酶等，以及标准品和/或对照品。筛查诊断女性群体中肺腺癌患者的技术方案如下：一组用于筛查诊断女性群体中肺腺癌患者的血浆microRNAs标记物，由如下microRNAs组成：miR-224-3p、miR-146a-5p、miR-648、miR-523-5p、miR-758-5p；miR-224-3p的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；miR-146a-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；miR-648的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；miR-523-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示；miR-758-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.8所示。一组筛查诊断女性群体中肺腺癌患者的microRNAs引物、探针的组合，microRNAs引物包括反转录引物、定量PCR前引物和定量PCR后引物：miR-224-3p的反转录引物序列如SEQIDNO.9所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.17所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.25所示；miR-146a-5p的反转录引物序列如SEQIDNO.10所示，定量PCR前引物序列如SE本文档来自技高网...
【技术保护点】
一组用于筛查诊断女性群体中肺腺癌患者的血浆microRNAs标记物，其特征在于，由如下microRNAs组成：miR‑224‑3p、miR‑146a‑5p、miR‑648、miR‑523‑5p、miR‑758‑5p；miR‑224‑3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；miR‑146a‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；miR‑648的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；miR‑523‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；miR‑758‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
【技术特征摘要】
1.一组用于筛查诊断女性群体中肺腺癌患者的血浆microRNAs标记物，其特征在于，由如下microRNAs组成：miR-224-3p、miR-146a-5p、miR-648、miR-523-5p、miR-758-5p；miR-224-3p的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；miR-146a-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；miR-648的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；miR-523-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示；miR-758-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.8所示。2.一组筛查诊断女性群体中肺腺癌患者的microRNAs引物、探针的组合，microRNAs引物包括反转录引物、定量PCR前引物和定量PCR后引物，其特征在于：miR-224-3p的反转录引物序列如SEQIDNO.9所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.17所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.25所示；miR-146a-5p的反转录引物序列如SEQIDNO.10所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.18所示，定量PCR后引物序列如SEQI...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭守河，
申请(专利权)人：南京九寿堂医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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