本发明专利技术公开了用于体外细胞培养的胎牛血清及其制备方法，制备时采集怀孕母牛的胎牛血液获得血浆，采用含有体积含量4‑6%葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2‑0.6%柠檬酸钠的水溶液、胎牛血液均匀混合、离心分离出血浆；将氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢钾、去离子水混合、调节pH，再加入血浆搅拌均匀、离心分离取上清液、半透膜析出收集半透膜上部残留物；将半透膜上部残留物加入辛酸液调节pH、加入硅藻土、过滤分离，过滤收集上清液即得胎牛血清。本发明专利技术制备胎牛血清的工艺简单、易操作，各参数易控制，且保证胎牛血清的性质稳定、生产成本低，胎牛血清纯度高，收率高，制得的胎牛血清极适于体外细胞的培养，适于大规模推广。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及血清制备
，具体是用于体外细胞培养的胎牛血清及其制备方法。
技术介绍
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。起酸碱度缓冲液作用。提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。其中胎牛血清应取自剖腹产的胎牛，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。现有的胎牛血清制备工艺复杂、成本高，且纯度低，不利于体外细胞培养。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供工艺简单、易操作、各参数易控制、生产成本低、纯度高、收率高的用于体外细胞培养的胎牛血清及其制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：用于体外细胞培养的胎牛血清的制备方法，包括以下步骤：1）采集怀孕母牛的胎牛血液获得血浆，具体步骤如下：11）采用含有体积含量4-6%葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2-0.6%柠檬酸钠的水溶液进行混合，将混合后混合液A置入取血容器内充分滋润容器内壁；12）将胎牛血液置入上述滋润过的取血容器内，摇动使其与胎牛血液均匀混合；13）将混合均匀的含有胎牛血液的混合液B置入采血试管，保持血液在40℃以下恒温状态，然后将采血试管在离心机中以3000-14000r/min转速旋转5-30分钟，分离出血浆、血小板、血球，将所得血浆、血小板、血球分别采用采血试管分离存放；14）将已存放血浆的采血试管置入-20~0℃环境下保存备用；2）将血浆分离提取胎牛血清，具体步骤如下：21）取6-12g氯化钠、0.1-0.5g磷酸二氢钾和1.4-2.4g磷酸二氢钾放入容器中，向其中加入300-700mL去离子水，搅拌均匀，使用质量分数为10-20%的盐酸溶液调节pH为7.0-7.3，将上述所收集的血浆倒入容器中，搅拌均匀，温度设定为25-38℃，静置8-20min，得混合液C；22）将上述的混合液C放入离心机中离心分离8-20min，转速设定为3000-10000r/min，取上清液，在容器中部安装一半透膜，将上清液倒在半透膜上方，密封，对容器顶部加压至0.8-2.4MPa，温度设定为38-47℃，待无液体从半透膜析出时，停止加压，收集半透膜上部残留物备用；23）将半透膜上部残留物按0.3-10.0%的体积比例加入辛酸液，调节pH至4.0-7.5，搅拌时间0.3-5小时；处理完毕，按100ml溶液加入0.3-1.0g硅藻土，搅拌均匀后，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液即得胎牛血清。作为本专利技术进一步的方案：步骤11）中，采用含有体积含量5%葡萄糖的注射液、含有质量含量0.4%柠檬酸钠的水溶液进行混合得混合液A。作为本专利技术进一步的方案：步骤11）中，含有体积含量4-6%葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2-0.6%柠檬酸钠的水溶液的体积比为1:0.3-4。作为本专利技术进一步的方案：步骤13）中，将采血试管在离心机中以5000-14000r/min转速旋转10-25分钟。作为本专利技术进一步的方案：步骤14）中，将已存放血浆的采血试管置入-15~0℃环境下保存备用。作为本专利技术进一步的方案：步骤21）中，取8-10g氯化钠、0.2-0.4g磷酸二氢钾和1.6-2.0g磷酸二氢钾放入容器中，向其中加入400-600mL去离子水，盐酸溶液的质量分数为15%。作为本专利技术进一步的方案：步骤22）中，将上述的混合液C放入离心机中离心分离10-15min，转速设定为4000-5000r/min。作为本专利技术进一步的方案：步骤23）中，将半透膜上部残留物按0.5-8.0%的体积比例加入辛酸液。作为本专利技术进一步的方案：步骤23）中，按100ml溶液加入0.5-0.8g硅藻土。本专利技术的另一目的是提供上述制备方法制得的胎牛血清。作为本专利技术进一步的方案：制得的胎牛血清于56°C温度下加热30分钟用于补充灭活。作为本专利技术进一步的方案：制得的胎牛血清其FBS和供体牛血清的内毒素水平≤ 10 EU/mL。作为本专利技术进一步的方案：制得的胎牛血清适用于专业的研究和试验，包括干细胞研究、免疫分析和抗体生产。作为本专利技术进一步的方案：制得的胎牛血清血红蛋白≤10 毫克/升。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术制备胎牛血清的工艺简单、易操作，各参数易控制，且保证胎牛血清的性质稳定、生产成本低，胎牛血清纯度高，收率高，制得的胎牛血清极适于体外细胞的培养，该血清经细胞培养认证专业检测合格率高，适用于专业的研究和试验，包括干细胞研究、免疫分析和抗体生产。同时具有最低的病毒风险，对牛病毒性腹泻病毒含量要求非常低的学校、工业与前临床研究来说是首选；而且FBS和供体牛血清的内毒素水平≤10 EU/mL。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本专利技术实施例中，用于体外细胞培养的胎牛血清，其制备过程，包括以下步骤：1）采集怀孕母牛的胎牛血液获得血浆，具体步骤如下：11）采用含有体积含量4%葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2%柠檬酸钠的水溶液进行混合，将混合后混合液A置入取血容器内充分滋润容器内壁。其中注射液、水溶液的体积比为1:0.3。12）将胎牛血液置入上述滋润过的取血容器内，摇动使其与胎牛血液均匀混合。13）将混合均匀的含有胎牛血液的混合液B置入采血试管，保持血液在40℃以下恒温状态，然后将采血试管在离心机中以3000r/min转速旋转5分钟，分离出血浆、血小板、血球，将所得血浆、血小板、血球分别采用采血试管分离存放。14）将已存放血浆的采血试管置入-20℃环境下保存备用。2）将血浆分离提取胎牛血清，具体步骤如下：21）取6g氯化钠、0.1g磷酸二氢钾和1.4g磷酸二氢钾放入容器中，向其中加入300mL去离子水，搅拌均匀，使用质量分数为10%的盐酸溶液调节pH为7.0，将上述所收集的血浆倒入容器中，搅拌均匀，温度设定为25℃，静置8min，得混合液C。22）将上述的混合液C放入离心机中离心分离8min，转速设定为3000r/min，取上清液，在容器中部安装一半透膜，将上清液倒在半透膜上方，密封，对容器顶部加压至0.8MPa，温度设定为38℃，待无液体从半透膜析出时，停止加压，本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于体外细胞培养的胎牛血清的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）采集怀孕母牛的胎牛血液获得血浆，具体步骤如下：11）采用含有体积含量4‑6%葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2‑0.6%柠檬酸钠的水溶液进行混合，将上述两者混合后的混合液A置入取血容器内充分滋润容器内壁；12）将胎牛血液置入上述滋润过的取血容器内，摇动使其与胎牛血液均匀混合；13）将混合均匀的含有胎牛血液的混合液B置入采血试管，保持血液在40℃以下恒温状态，然后将采血试管在离心机中以3000‑14000r/min转速旋转5‑30分钟，分离出血浆、血小板、血球，将所得血浆、血小板、血球分别采用采血试管分离存放；14）将已存放血浆的采血试管置入‑20~0℃环境下保存备用；2）将血浆分离提取胎牛血清，具体步骤如下：21）取6‑12g氯化钠、0.1‑0.5g磷酸二氢钾和1.4‑2.4g磷酸二氢钾放入容器中，向其中加入300‑700mL去离子水，搅拌均匀，使用质量分数为10‑20%的盐酸溶液调节pH为7.0‑7.3，将上述所收集的血浆倒入容器中，搅拌均匀，温度设定为25‑38℃，静置8‑20min，得混合液C；22）将上述的混合液C放入离心机中离心分离8‑20min，转速设定为3000‑10000r/min，取上清液，在容器中部安装一半透膜，将上清液倒在半透膜上方，密封，对容器顶部加压至0.8‑2.4MPa，温度设定为38‑47℃，待无液体从半透膜析出时，停止加压，收集半透膜上部残留物备用；23）将半透膜上部残留物按0.3‑10.0%的体积比例加入辛酸液，调节pH至4.0‑7.5，搅拌时间0.3‑5小时；处理完毕，按100ml溶液加入0.3‑1.0g硅藻土，搅拌均匀后，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液即得胎牛血清。...
【技术特征摘要】
1.用于体外细胞培养的胎牛血清的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）采集怀孕母牛的胎牛血液获得血浆，具体步骤如下：11）采用含有体积含量4-6%葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2-0.6%柠檬酸钠的水溶液进行混合，将上述两者混合后的混合液A置入取血容器内充分滋润容器内壁；12）将胎牛血液置入上述滋润过的取血容器内，摇动使其与胎牛血液均匀混合；13）将混合均匀的含有胎牛血液的混合液B置入采血试管，保持血液在40℃以下恒温状态，然后将采血试管在离心机中以3000-14000r/min转速旋转5-30分钟，分离出血浆、血小板、血球，将所得血浆、血小板、血球分别采用采血试管分离存放；14）将已存放血浆的采血试管置入-20~0℃环境下保存备用；2）将血浆分离提取胎牛血清，具体步骤如下：21）取6-12g氯化钠、0.1-0.5g磷酸二氢钾和1.4-2.4g磷酸二氢钾放入容器中，向其中加入300-700mL去离子水，搅拌均匀，使用质量分数为10-20%的盐酸溶液调节pH为7.0-7.3，将上述所收集的血浆倒入容器中，搅拌均匀，温度设定为25-38℃，静置8-20min，得混合液C；22）将上述的混合液C放入离心机中离心分离8-20min，转速设定为3000-10000r/min，取上清液，在容器中部安装一半透膜，将上清液倒在半透膜上方，密封，对容器顶部加压至0.8-2.4MPa，温度设定为38-47℃，待无液体从半透膜析出时，停止加压，收集半透膜上部残留物备用；23）将半透膜上部残留物按0.3-...
【专利技术属性】
技术研发人员：马永江，
申请(专利权)人：广州杰特伟生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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