一种血清的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种血清的制备方法，包括在血浆中添加经氯化钙激活的凝血酶溶液，从而制得血清。本发明专利技术方法制备的血清的得率高，制备工艺简单，易于重复，且对于待测物无影响，测值回收率好。因此，本发明专利技术方法以及制备的血清具有较大的工艺放大及推广前景，能广泛应用于体外诊断领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及体外诊断医学检验领域。具体地说，本专利技术涉及一种血清的制备方法。
技术介绍
血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆最大的区别。而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。血浆的各种化学成分常在一定范围内不断地变动，其中以葡萄糖、蛋白质、脂肪和激素等的浓度最易受营养状况和机体活动情况的影响，而无机盐浓度的变动范围较小。血清与血浆的区别，主要在于血清不含纤维蛋白原，纤维蛋白原能转换成纤维蛋白，具有凝血作用。在体外诊断试剂行业，血清和血浆是体外诊断试剂生产的初级及重要的原料之一，常用于校准品、稀释液的配制以及内部参考品的建立。其中血清由于其清澈杂质较少，干扰较小等因素，是两者中的首选。但血清的获取量较少，无法满足大体积的需求。而血浆的供应量虽大，但是干扰性较强，且大量的纤维蛋白容易有絮状沉淀，会影响产品质量。此外，本领域制备血清的方法往往存在得率低、操作繁琐、仍存在纤维蛋白絮状沉淀等缺点。因此，本领域急需操作简便，得率高，将血浆转化为血清的制备方法，所得到的血清中纤维蛋白充分去除，并且对待测物影响较小。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种血清制备方法，该方法制备的血清的得率高，制备工艺简单，易于重复，且对于待测物无影响，测值回收率好。本专利技术的另一目的在于提供本专利技术方法所制得血清以及包含这种血清的检测试剂盒。在第一方面，本专利技术提供一种血清的制备方法，所述方法包括在血浆中添加经氯化钙激活的凝血酶溶液，从而制得血清。在具体的实施方式中，所述方法包括以下步骤：(1)将冻存血浆平衡至室温，过滤；(2)孵育后，在血浆中添加经氯化钙激活的凝血酶溶液，混匀；(3)将处理后的血浆平衡至室温，然后冻存；(4)取出再次平衡至室温，离心，过滤后，制得血清。在优选的实施方式中，步骤(3)中将处理后的血浆平衡至室温，然后在-15℃以下保存。在优选的实施方式中，步骤(1)中的过滤是将平衡至室温的血浆经医用纱布过滤，收集滤液。在具体的实施方式中，步骤(2)所述的孵育是在37℃孵育15～60分钟；优选地，孵育为30分钟。在具体的实施方式中，所述凝血酶溶液的浓度为50～200U/mL；优选地，浓度为75-125U/mL；最优选地，浓度为100U/mL。在具体的实施方式中，所述经氯化钙激活的凝血酶溶液是将1000U/mL凝血酶溶液和1MCaCl2溶液按照1:4～1:19的比例混合，反应30分钟后制得；优选地，将1000U/mL凝血酶溶液和1MCaCl2溶液按照1:9的比例混合。在具体的实施方式中，步骤(3)所述的处理后的血浆平衡至室温的时间为60～180分钟；优选地，平衡时间为120分钟。在具体的实施方式中，步骤(4)中离心转速为4000rpm，过滤孔径为0.8μm。在优选的实施方式中，步骤(4)还包括在制得的血清中添加质量分数为0.1％的Proclin300。在优选的实施方式中，所述制备方法制得的血清的得率达到80％以上，优选85％以上，更优选90％以上；总蛋白回收率达到93％以上，优选95％以上，更优选97％以上。在第二方面，本专利技术提供一种血清，所述血清通过本专利技术第一方面所述的制备方法制备得到。在优选的实施方式中，所制备的血清的得率达到87％以上，优选90％以上，更优选93％以上；总蛋白回收率达到93％以上，优选95％以上，更优选97％以上。在第三方面，本专利技术提供一种试剂盒，所述试剂盒装有本专利技术第二方面所述的血清或本专利技术第一方面所述的制备方法制备的血清。在优选的实施方式中，所述血清用作检测试剂盒中的校准品、稀释液、质控品或内部参考品。在第四方面，本专利技术提供本专利技术第一方面所述的制备方法制备的血清或本专利技术第二方面所述的血清在制备检测试剂盒中的用途。在优选的实施方式中，所述血清用作检测试剂盒中的校准品、稀释液、质控品或内部参考品。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1显示了通过本专利技术方法从不同血浆制备血清后，待测物的回收率、总蛋白浓度的比较。具体实施方式在研发实践中，本专利技术人发现直接采用血浆作为体外诊断试剂的校准品、稀释液及参考品时，其稳定性不佳，且由于血浆中纤维蛋白的影响，往往形成絮状沉淀，造成质量问题；此外，直接采用血浆，其抗凝剂对待测物的测定形成干扰。而现有的制备血清的方法存在得率低、操作繁琐、需要反复冻融等缺点，并且制得的血清中仍有纤维蛋白絮状沉淀存在。专利技术人经过广泛而深入的研究，出乎意料地发现，在血浆中添加经氯化钙激活的凝血酶溶液并且控制凝血酶的用量，所制备的血清的得率较高，作为体外诊断试剂校准品、稀释液及参考品对后续检测的干扰小，测值回收率好，并且该制备工艺简单，易于重复，具有较大的工艺放大及推广前景，能广泛应用于体外诊断领域。在此基础上完成了本专利技术。本专利技术的血清的制备方法以及制备得到的血清基于以上发现，本专利技术首先提供一种血清的制备方法，所述方法通过在血浆中添加经氯化钙激活的凝血酶溶液而制得血清。基于本专利技术的教导以及本领域的常规技术手段，本领域技术人员可以想到本专利技术的血清制备方法的各种具体实现方式。例如，可以将冻存血浆平衡至室温，过滤，孵育后，在血浆中添加经氯化钙激活的凝血酶溶液，混匀；将处理后的血浆平衡至室温，冻存；取出再次平衡至室温，离心，过滤后，即制得所述血清。在具体的实施方式中，本专利技术的血清制备方法包括以下步骤：(1)将冻存血浆平衡至室温，过滤；(2)孵育后，在血浆中添加经氯化钙激活的凝血酶溶液，混匀；(3)将处理后的血浆平衡至室温，然后冻存，例如在；(4)取出再次平衡至室温，离心，过滤后，制得血清。本领域技术人员可以基于本专利技术的教导以及本领域的常规要求确定本专利技术方法的一些细节。例如，步骤(1)的过滤是将平衡至室温的血浆经医用纱布过滤，收集滤液；步骤(2)所述的孵育是在37℃孵育15～60分钟；优选地，孵育为30分钟；步骤(3)中，可以将处理后的血浆平衡至室温，然后在-15℃以下保存；本专利技术人发现，凝血酶溶液的用量对于通过本专利技术方法获得高质量的血清也有影响。在具体的实施方式中，所述凝血酶溶液的浓度为50～200U/mL；优选地，浓度为75-125U/mL；最优选地，浓度为100U/mL。在优选的实施方式中，所述经氯化钙激活的凝血酶溶液是将1000U/mL凝血酶溶液和1MCaCl2溶液按照1:4～1:19的比例混合，反应30分钟后制得；优选地，将1000U/mL凝血酶溶液和1MCaCl2溶液按照1:9的比例混合。在优选的实施方式中，所述处理后的血浆平衡至室温的时间为60～本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血清的制备方法，所述方法包括在血浆中添加经氯化钙激活的凝血酶溶液，从而制得血清。

【技术特征摘要】
1.一种血清的制备方法，所述方法包括在血浆中添加经氯化钙激活的凝血酶溶液，从而制得血清。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将冻存血浆平衡至室温，过滤；(2)孵育后，在血浆中添加经氯化钙激活的凝血酶溶液，混匀；(3)将处理后的血浆平衡至室温，然后冻存；(4)取出再次平衡至室温，离心，过滤后，制得血清。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的孵育是在37℃孵育15～60分钟；优选地，孵育为30分钟。4.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述凝血酶溶液的浓度为50～200U/mL；优选地，浓度为75-125U/mL；最优选地，浓度为100U/mL。5.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述经氯化钙激活的凝血酶溶液是...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈超，任程程，刘峰，彭珊，李基，赵亚茹，
申请(专利权)人：上海科华生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31