小鼠脑组织蛋白质组分析的样品制备方法技术

本发明专利技术涉及一种小鼠脑组织蛋白质组分析的样品制备方法，该方法包括以下步骤：⑴心尖灌流替换血液：取小鼠一只麻醉后进行缓慢心尖灌流，待肝脏呈灰白色时停止并取出脑组织；⑵蛋白提取：将脑组织研磨成粉末状后加入预冷的Tris缓冲液，经超声处理、摇床孵育、离心得蛋白提取液Ⅰ；⑶热处理增加蛋白溶解性：将蛋白提取液Ⅰ与热处理液混合后处理5min，经离心得蛋白提取液Ⅱ；⑷沉淀去脂：将蛋白提取液Ⅱ加入到预冷的去脂沉淀液CUS中，经沉淀、离心、洗涤、吹干，即得纯化蛋白粉末；⑸蛋白重溶：将纯化蛋白粉末加入到尿素蛋白裂解液中，经离心得蛋白质组样品。本发明专利技术可经济、高效去除小鼠脑组织血液、脂类影响，并增加蛋白样品溶解性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛋白组学研宄领域，尤其涉及。
技术介绍
生命科学研宄已经进入生命整体水平研宄的组学时代，随着基因组学研宄的展开，研宄者发现，基因作为遗传信息的载体只能决定生命体的基本形式，现在获得的基因组知识还不能告诉我们基因在生命体中的作用和如何发挥作用，而基因表达的产物蛋白质是生命功能的真正执行体，因此要想深入了解基因及功能还需要从蛋白质水平进行诠释和解读。但基因和蛋白质表达量并不存在严格的线性关系，蛋白质的表达具有时间和空间的特殊性，其复杂程度和数量远高于基因。生物体内的蛋白质的复杂性大大增加了蛋白质样品制备的难度，因此，蛋白组学研宄中以蛋白样品制备最为关键，决定着蛋白质组学研宄的成败和结果的好坏。小鼠是使用量最大、研宄最详尽的哺乳类实验动物，广泛用于药物毒性、药物筛选和放射生物学实验，因此，发现小鼠脑组织蛋白质组表达的差异变化是研宄药物和放射生物学效应的分子机制的重要途径，可为人类脑组织病变的药物筛选、药物靶标发现、治疗和辐射防护提供研宄基础。目前，小鼠采用劲椎脱臼的方法处死并分离脑组织，然后用生理盐水清洗脑组织以去除血液对脑组织的污染。之后将脑组织与含有高浓度尿素的本文档来自技高网...

【技术保护点】
小鼠脑组织蛋白质组分析的样品制备方法，包括以下步骤：⑴心尖灌流替换血液：取小鼠一只，固定四肢，并按照0.03ml/10g~0.05ml/10g腹腔注射质量浓度为10%的水合氯醛；麻醉后剖开胸腔，迅速切开肋骨，剪去隔膜使心脏暴露；然后左心室进针入心室，剪破右心耳，开启蠕动泵，用生理盐水进行缓慢心尖灌流，待肝脏呈灰白色时停止并取出脑组织；⑵蛋白提取：将所述步骤⑴所得的脑组织放入盛有液氮的研钵中进行研磨，直至脑组织被研磨成粉末状；然后称取0.2~0.5g脑组织粉末转至1.5mlEP离心管中，按照300µl：0.1g的比例向所述EP离心管中加入4℃预冷的pH=8.1、50mM的Tris缓冲液；其次将所...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴庆丰，李强，叶飞，金晓东，
申请(专利权)人：中国科学院近代物理研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62