【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物诊断试剂领域，具体涉及一种丙肝抗原交联磁微粒及其制备方法和用途。
技术介绍
1、丙型肝炎病毒(hepatitis c，hcv)是一种有包膜、黄病毒科，肝炎病毒属、基因组长度约9.6kb的正链rna病毒。hcv呈全球性流行，主要通过血液传播、母婴传播、性传播等方式传播。丙肝病毒可引起急性或慢性肝脏炎症。急性感染通常没有症状，且大都不会导致危及生命的疾病，hcv的潜伏期为2-26周，平均6-7周。约有30％(15-45％)的感染者不经任何治疗即可在感染6个月之内自行清除病毒。70％(55％-85％)的患者可发展成慢性丙型肝炎，慢性肝炎的表现轻重不等。约20％的慢性丙型肝炎患者可在20年内发展为肝硬化，到肝硬化阶段，每年约有1％-7％可发展为原发性肝细胞癌。
2、hcv基因组全场约9.6kb，编码7种非结构蛋白和结构蛋白c区(编码核心蛋白)和e区(编码包膜蛋白)，7种非结构蛋白分别为ns1、ns2、ns3、ns4a、ns4b、ns5a和ns5b蛋白，3种结构蛋白c区(编码核心蛋白)和e区(编码包膜蛋白)。几乎所有结构和非结构蛋白都能够诱发机体的免疫应答，并产生相应的抗体。hcv抗体是其感染的重要临床标志，人血清中hcv抗体检测到的时间约在40-70天。核心蛋白抗体在hcv感染后出现较早，且具有较高的阳性率。ns2、ns3、ns4、ns5所编码的四种蛋白，除ns2外其余均可以有效诱导hcv抗体应答。现阶段，hcv抗体检测主要是酶联免疫吸附测定(elisa)、化学发光技术、重组免疫印迹分析(riba)，其抗体
技术实现思路
1、为克服现有技术缺陷，本专利技术采用了以下技术方案：
2、本专利技术的第一方面提供了一种丙肝抗原交联磁微粒检测试剂盒，包括：试剂1丙肝抗原交联磁微粒，试剂2生物素化hcv抗原，试剂3碱性磷酸酶，定标品a阴性以及定标品b阳性；
3、进一步的，所述试剂1丙肝抗原交联磁微粒的制备方法包括以下步骤：
4、s11洗涤：取氨基磁珠原液和活化缓冲液1混合后，磁分离，洗涤获得磁珠混悬液，其中，所述氨基磁珠原液：活化缓冲液1体积比为1:8～10，所述氨基磁珠原液浓度为80～120mg/ml，所述活化缓冲液1含10～20wt‰三乙醇胺盐酸盐、3～8wt‰氯化钠以及0.2～1wt‰乙二胺四乙酸二钠，ph为8～9；进一步的，所述氨基磁珠原液：活化缓冲液1体积比为1:9；进一步的，所述氨基磁珠原液浓度为100mg/ml；进一步的，所述活化缓冲液1含15wt‰三乙醇胺盐酸盐、6wt‰氯化钠以及0.5wt‰乙二胺四乙酸二钠；进一步的，所述洗涤次数为3次；
5、s12磁珠活化及终止：将含2-亚氨基硫烷的活化缓冲液1以及活化缓冲液1按一定比例混合形成混合液，再加入s11获得的磁珠混悬液，室温旋转20～40min，活化磁珠，活化后再加入5～10wt％的甘氨酸溶液室温反应3～10min终止活化，其中，所述磁珠：混合液质量比为1：90～110；所述含2-亚氨基硫烷的活化缓冲液1：活化缓冲液1体积比为1:8～10；所述含2-亚氨基硫烷的活化缓冲液1中2-亚氨基硫烷的浓度为10～15mg/ml；进一步的，所述磁珠：混合液质量比为1：100；进一步的，所述含2-亚氨基硫烷的活化缓冲液1：活化缓冲液1体积比为1:9；进一步的，所述含2-亚氨基硫烷的活化缓冲液1中2-亚氨基硫烷的浓度为14mg/ml；进一步的，所述旋转时间为30min；进一步的，所述甘氨酸溶液浓度为7.5wt％；进一步的，所述反应时间为5min；
6、s13丙肝抗原活化及终止：按体积比1:90～110将浓度为10～20mg/ml的琥珀酰亚胺-dpeg-马来酰亚胺(sm(peg)12)的n,n-二甲基甲酰胺(dmf)溶液和活化缓冲液2混合，再加入丙肝抗原，室温旋转10～20min，活化丙肝抗原，活化后再加入5～10wt％的甘氨酸溶液室温反应3～10min终止活化，其中，所述丙肝抗原与混合溶液的质量比1：20～30，所述活化缓冲液2ph为7.3，含10～20wt‰三乙醇胺盐酸盐、5～10wt‰氯化钠、0.2～1wt‰乙二胺四乙酸二钠；进一步的，所述丙肝抗原与混合溶液的质量比1：25，所述所述活化缓冲液2ph为7～8，含15wt‰三乙醇胺盐酸盐、6wt‰氯化钠、0.5wt‰乙二胺四乙酸二钠；
7、s14丙肝抗原脱盐：用ph7～8、浓度为10mm磷酸盐缓冲液(pb缓冲液)平衡脱盐柱，对活化后的丙肝抗原进行脱盐处理；
8、s15交联：将活化终止后的磁珠用ph 7～8、浓度为10mm pb缓冲液洗涤，与脱盐丙肝抗原混合，置室温旋转0.8～2h进行包被，包被至磁珠终浓度为8～12mg/ml，其中，所述脱盐丙肝抗原：磁珠质量比为3～6μg/mg；优选的，将活化终止后的磁珠用ph7、浓度为8～12mmpb缓冲液洗涤；优选的，所述磁珠终浓度为10mg/ml；优选的，所述旋转时间为1h；优选的，所述脱盐丙肝抗原：磁珠质量比为5μg/mg；
9、s16终止1：包被完成后，用ph 7～8、浓度为8～12mm pb缓冲液洗涤，磁分离后，再加入含2wt‰2-巯基乙醇的ph 7～8、浓度为8～12mm pb缓冲液洗涤液，室温旋转20～40min进行终止；
10、s17终止2：向s16终止1的混合液中再加入含3～5wt‰n-乙基马来酰亚胺(nem)的保存液，其中，所述保存液包括：3～6wt‰3-吗啉-2-羟基丙磺酸(mopso)、1～3wt‰氯化钠、20～30wt‰蔗糖、0.05～0.2‰吐温20，室温旋转20～40min终止反应，然后继续加入适量保存液保存，洗涤，用保存液稀释至0.3～1mg/ml，即得试剂1丙肝抗原交联磁微粒；优选的，所述保存液包括：5wt‰3-吗啉-2-羟基丙磺酸(mopso)、2wt‰氯化钠、25wt‰蔗糖、0.1‰吐温20；
11、进一步的，所述试剂2生物素化hcv抗原为含0.1～0.2wt‰生物素化hcv抗原的缓冲液3，其中所述缓冲液3包括1～2wt％4-羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)、0.6～1wt％氯化钠、0.2～0.8wt％酪蛋白酸钠以及3～8mg/ml美司钠；优选的，所述试剂2生物素化hcv抗原为含0.125wt‰生物素化hcv抗原的缓冲液3，其中所述本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种丙肝抗原交联磁微粒检测试剂盒，其特征在于，包括：试剂1丙肝抗原交联磁微粒，试剂2生物素化HCV抗原，试剂3碱性磷酸酶，定标品A阴性以及定标品B阳性。
2.根据权利要求1所述丙肝抗原交联磁微粒检测试剂盒，其特征在于，所述试剂1丙肝抗原交联磁微粒的制备方法包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述丙肝抗原交联磁微粒检测试剂盒，其特征在于，所述试剂2生物素化HCV抗原为含0.1～0.2wt‰生物素化HCV抗原的缓冲液3，其中所述缓冲液3包括1～2wt％4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、0.6～1wt％氯化钠、0.2～0.8wt％酪蛋白酸钠以及3～8mg/ml美司钠；优选的，所述试剂2生物素化HCV抗原为含0.125wt‰生物素化HCV抗原的缓冲液3，其中所述缓冲液3包括1.12wt％4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、0.9wt％氯化钠、0.5wt％酪蛋白酸钠以及6mg/ml美司钠。
4.根据权利要求1所述丙肝抗原交联磁微粒检测试剂盒，其特征在于，所述试剂3碱性磷酸酶为含0.2～0.3wt％碱性磷酸酶的缓冲液4，其中所述缓冲液4包括0.3～0.
5.根据权利要求1所述丙肝抗原交联磁微粒检测试剂盒，其特征在于，所述定标品A阴性包括8～12mM PB溶液、9wt‰氯化钠、15wt％丙三醇、2wt％BSA。
6.根据权利要求1所述丙肝抗原交联磁微粒检测试剂盒，其特征在于，所述定标品B丙肝阳性包括含1/7000HCV阳性物质的缓冲液5，更进一步的，所述缓冲液5定标品A阴性溶液。
...【技术特征摘要】
1.一种丙肝抗原交联磁微粒检测试剂盒，其特征在于，包括：试剂1丙肝抗原交联磁微粒，试剂2生物素化hcv抗原，试剂3碱性磷酸酶，定标品a阴性以及定标品b阳性。
2.根据权利要求1所述丙肝抗原交联磁微粒检测试剂盒，其特征在于，所述试剂1丙肝抗原交联磁微粒的制备方法包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述丙肝抗原交联磁微粒检测试剂盒，其特征在于，所述试剂2生物素化hcv抗原为含0.1～0.2wt‰生物素化hcv抗原的缓冲液3，其中所述缓冲液3包括1～2wt％4-羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)、0.6～1wt％氯化钠、0.2～0.8wt％酪蛋白酸钠以及3～8mg/ml美司钠；优选的，所述试剂2生物素化hcv抗原为含0.125wt‰生物素化hcv抗原的缓冲液3，其中所述缓冲液3包括1.12wt％4-羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)、0.9wt％氯化钠、0.5wt％酪蛋白酸钠以及6mg/ml美司钠。
4.根据权利要求1所述丙肝抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：张春莉，林杰，胡忠双，施维，
申请(专利权)人：上海科华生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。