The invention provides a tonyred of immunoaffinity column, including carrier, protein G and tonyred I antibody, wherein the protein G chemically conjugated to the carrier, the tonyred I antibody and protein G combined with crosslinking agent. Among them, the protein G GenBank CAA27638.1 after recombinant gene expression of recombinant protein based on G. The invention does not affect the detection performance under the condition of the first required amount of protein G pretreatment of agarose gel carrier tonyred I antibody to antibody dosage is about preparation of direct coupling of the 3/4 purification column packing. The Sudan Sudan I obtained by the invention has high purity and can be directly used for high performance liquid chromatography detection without further purification treatment, thereby saving time and cost of the operator.
【技术实现步骤摘要】
一种包被蛋白G的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱及其制备方法
本专利技术属于食品检验领域,具体涉及一种包被蛋白G的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱及其制备方法。
技术介绍
苏丹红是一种人工合成的偶氮类、油溶性的化工染色剂,1896年科学家达迪将其命名为苏丹红并沿用至今。苏丹红被大量地用在生物、化学等领域,用于机油、汽车蜡和鞋油等工业产品。随着人们对苏丹红结构及致毒性的逐步了解,国际癌症研究机构(IARC)将苏丹红归为第3类可致癌物质,这类物质虽缺乏足够的直接使人类致癌的证据,但是具有潜在的致癌危险。苏丹红为亲脂性偶氮化合物,外观呈暗红色或深黄色片状晶体,难溶于水,主要包括Ⅰ、Ⅱ、III和Ⅳ4种类型。其中II、III和IV均为I的化学衍生物。SudanⅠ在体内的代谢产物为苯胺和1-氨基-2-萘酚。苯胺是制造染料、橡胶促进剂及抗氧剂等的原料,是一种重要的有机合成中间体。然而一旦苯胺接触人体皮肤或进入消化系统以后,一方面由于苯胺可直接作用于肝细胞,引起中毒性肝病,还有可能诱发肝脏细胞基因发生变异,增加了人体癌变的几率;另一方面,有可能因为苯胺将血红蛋白结合的Fe(Ⅱ)氧化为Fe(Ⅲ),导致血红蛋白无法结合氧而患上高铁血红蛋白症。另据报道,长期摄入苯胺还可造成人体的神经系统损害。在饲料中违规添加苏丹红也严重影响人们的身体健康,影响畜牧业的正常发展。目前苏丹红常用的检测方法有薄层层析法(TLC)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)及液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)等。酶联免疫吸附试验(ELISA)具有高效、灵敏、可采样后经简单处理直接进行检测等优点,但该方法也存 ...
【技术保护点】
一种苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,包括载体、蛋白G和苏丹红Ⅰ抗体,其特征在于,所述蛋白G通过化学键偶联在载体上,所述苏丹红Ⅰ抗体与蛋白G结合后用交联剂交联。
【技术特征摘要】
1.一种苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,包括载体、蛋白G和苏丹红Ⅰ抗体,其特征在于,所述蛋白G通过化学键偶联在载体上,所述苏丹红Ⅰ抗体与蛋白G结合后用交联剂交联。2.根据权利要求1所述的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,其特征在于,所述蛋白G包括按照GenBankCAA27638.1序列表达的蛋白G,以及经过基因重组表达的重组蛋白G。3.根据权利要求2所述的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,其特征在于,所述蛋白G为基于GenBankCAA27638.1经过基因重组表达的重组蛋白G。4.根据权利要求1~3中所述的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,其特征在于,所述蛋白G通过化学键偶联在载体上,苏丹红Ⅰ抗体与蛋白G结合后用交联剂交联。5.根据权利要求3中所述的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,其特征在于,所述的基因重组表达的重组蛋白G,包括降低了载体-重组蛋白G空间位阻作用,增加了重组蛋白G与苏丹红Ⅰ抗体IgG的结合能力的优化。6.根据权利要求3中所述的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,其特征在于,所述重组蛋白G优化位点为截除GenBankCAA27638.1序列N端53个氨基酸。7.根据权利要求1中所述的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,其特征在于,所述的载体是琼脂糖凝胶;所述的琼脂糖凝胶包括溴化氰活化的琼脂糖凝胶、交联的琼脂糖凝胶、聚丙烯酸琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶以及纤维素的一种或几种。8.根据权利要求1中所述的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,其特征在于所述的抗苏丹红Ⅰ抗体包括单克隆IgG抗体和多克隆抗体。9.一种苏丹红Ⅰ免疫亲和柱的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:1)载体活化...
【专利技术属性】
技术研发人员:董颖超,秦玉昌,李军国,刘士杰,谷旭,单耕,柳家鹏,
申请(专利权)人:中国农业科学院饲料研究所,
类型:发明
国别省市:北京,11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。