一种用于增强记忆力的血浆提取物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于分子生物学领域，提供一种用于增强记忆力的血浆提取物及其制备方法和应用。所述血浆提取物包括多种蛋白质和多种小分子；所述血浆分离物的SDS‑PAGE变性胶电泳至少包括5条肉眼清晰可见的条带，所述条带的分子量分别为：25kD、35kD、50kD、69kD、105kD。其制备方法包括以下步骤：血浆收集、分子量截留、SD灭活、离心分离、阴离子交换、透析、浓缩。本发明专利技术制备的血浆提取物可以用于预防、改善和治疗老年痴呆症，此外其还可以起到增强记忆力的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，涉及一种血浆提取物，具体地，涉及一种从血浆中分离的、用于增强记忆力的混合物及其制备方法，该混合物可用于预防、改善和治疗老年痴呆症，并具有增强记忆力的作用。
技术介绍
阿尔兹海默综合症(Alzheimer′sdisease，AD)又叫老年痴呆症，是老年期常见的一类慢性、进行性神经细胞退型性病变，其特点是病人的记忆和认知能力逐渐丧失。病人在确诊后3到9年内死亡，占临床死亡病例的50％到56％。该病病因目前的认识是大脑内积累的异常折叠的beta-淀粉样蛋白和Tau蛋白导致了老年痴呆症。老年痴呆症目前市场上的药物主要是西药，其特征是必须长期坚持服用，然而却疗效微小，只能缓解部分症状，不能控制病情的发展。长期服用的另外一个缺陷是药物副作用大，同时病人产生药物依赖性。例如，中国专利技术专利申请“一类具有改善阿尔兹海默病作用的β1-肾上腺素受体激动剂”(申请号：201210543597.5)，公开了一类具有β1-肾上腺素受体激动活性的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗阿尔茨海默病。但该化合物对于阿尔茨海默病的疗效尚不明确。为此，市场上急需疗效更好，副作用性更低的药物用于该病。目前的最新研究表明：给年老老鼠持续注射年轻老鼠的血浆能提升年老老鼠的认知水平(VilledaS.A.Youngbloodreversesage-relatedimpairmentsincognitivefunctionandsynapticplasticityinmice.NatureMedicine2014；20:659-663)。为此，血浆中可能含有某些物质能有效的提升老年痴呆症患者的认知水平。但是，这些物质的具体组分、以及分离获取方法还未见报道。
技术实现思路
针对现有技术的缺陷，本专利技术的目的之一在于提供一种用于增强记忆力的血浆提取物。本专利技术的目的之二在于提供上述血浆提取物的制备方法。本专利技术的目的之三在于提供上述血浆提取物的应用。为了实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：一种用于增强记忆力的血浆提取物，包括多种蛋白质和多种小分子；所述血浆分离物的SDS-PAGE变性胶电泳至少包括5条肉眼清晰可见的条带，所述条带的分子量为：25kD、35kD、50kD、69kD、105kD。在血浆提取物的优选实施方式中，通过蛋白质谱分析，所述血浆提取物中至少含有57种蛋白，具体如下方表1所示。优选地，所述多种小分子至少包括与所述57种蛋白中任何一种蛋白结合的小分子。在血浆提取物的优选实施方式中，所述血浆来源于哺乳动物；优选地，所述血浆来源于人类。为了实现上述目的，本专利技术采用了以下另一技术方案：上述用于增强记忆力的血浆提取物的制备方法包括以下步骤：血浆收集、分子量截留、SD灭活、离心分离、阴离子交换、透析、浓缩；优选地，该制备方法在血浆收集步骤和分子量截留步骤之间还包括：低温过滤步骤和低温超滤步骤。在制备方法的优选实施方式中，在所述血浆收集步骤中，利用抗凝管收集血液，再通过离心收集上清液，得到血浆；优选地，所述离心中，离心力为500-1000g，时间为10-20分钟，离心温度为0-15℃。在制备方法的优选实施方式中，在所述低温过滤步骤中，在压力条件下将所述血浆进行过滤，得到滤液；优选地，滤膜的孔径为不小于0.22微米，更优选所述滤膜的孔径为0.22微米和0.45微米；优选地，所述过滤的温度为0-5℃，压力为1-20MPa。在制备方法的优选实施方式中，在所述低温超滤步骤中，将所述滤液通过施加压力进行膜包超滤，得到低温超滤产物；优选地，所述膜包截留分子量为3kD-10kD；优选地，所述超滤的温度为0-8℃，压力为1-20MPa；优选地，所述超滤使用的缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、HBS缓冲液中的一种；更优选地，所述Tris-盐酸缓冲液的浓度为0.2-200mM、pH值为7.0-8.8，所述磷酸缓冲液的浓度为1.0-500mM、pH值为6.0-9.2，所述HBS缓冲液的浓度为0.5-350mM、pH值为6.4-8.4；更优选地，所述缓冲液为100mM、pH值为8.0的Tris-盐酸缓冲液。在制备方法的优选实施方式中，在所述分子量截留步骤中，将所述血浆或所述低温超滤产物通过施加压力进行分子量截留，得到分子量截留产物；优选地，所述分子量截留产物的分子量为大于10kD，更优选为大于10kD至小于等于50kD；优选地，所述施加压力的方式为：将所述低温超滤产物置于浓缩管中进行离心；更优选地，所述浓缩管允许10-50kD的物质通过；所述离心的离心力为500-3000g，时间为10-120分钟，温度为0-15℃；优选地，所述施加压力的方式为：将所述低温超滤产物置于浓缩杯中通过液氮进行加压；更优选地，所述浓缩杯允许10-50kD的物质通过；所述加压的压力为1-20MPa，加压时间为4-8小时。在制备方法的优选实施方式中，在所述SD灭活步骤中，将所述分子量截留产物用SD灭活剂重新悬浮后静置，得到灭活产物；优选地，所述静置温度为4～28℃，时间为6～24小时；更优选为所述静置温度为20℃，时间为8小时；优选地，所述SD灭活剂含有0.3～2％的N-丁基三磷酸盐、0.5～2％的吐温。在制备方法的优选实施方式中，在所述离心分离步骤中，将所述灭活产物离心后保留上清液，得到离心分离产物；优选地，所述离心中，离心力为2000-5000g，时间为10-20分钟，温度为0-6℃。在制备方法的优选实施方式中，在所述阴离子交换步骤中，将所述离心分离产物加入阴离子交换柱中进行步级洗脱，收集洗脱液，混合后得到阴离子交换产物；优选地，所述步级洗脱中，先用第一次洗脱缓冲液洗脱，得到第一次洗脱液；再用第二次洗脱液洗脱，得到废液；再用第三次洗脱液洗脱，得到第三次洗脱液；合并所述第一次洗脱液和第三次洗脱液，得到阴离子交换产物；更优选地，所述第一次洗脱液缓冲液中含有100-150mM的氯化钠，所述第二次洗脱液缓冲液含有250-300mM的氯化钠，所述第三次洗脱液缓冲液含有450-500mM的氯化钠；进一步优选地，所述第一次洗脱缓冲液、第二次洗脱缓冲液、第三次洗脱缓冲液，均为浓度为0.2-200mM、pH值为7.0-9.2的Tris-盐酸缓冲液。在制备方法的优选实施方式中，在所述透析步骤中，将所述阴离子交换产物进行透析，收集透析容器中的产物得到透析产物；优选地，所述透析使用的透析缓冲液为Tris-盐酸缓冲液、磷酸缓冲液、HBS缓冲液中的一种；更优选地，所述Tris-盐酸缓冲液的浓度为0.2-200mM、pH值为7.0-8.8，所述磷酸缓冲液的浓度为1.0-500mM、pH值为6.0-9.2，所述HBS缓冲液的浓度为0.5-350mM、pH值为6.4-8.4；进一步优选地，所述透析缓冲液为1mM、pH值为8的Tris盐酸缓冲液；优选地，所述透析的时间为20-72h；优选地，所述透析的体积比是1:(100-10000)。在制备方法的优选实施方式中，在所述浓缩步骤中，将所述透析产物进行浓缩，得到浓缩产物，即为所述血浆提取物；优选地，所述透析产物的体积是所述浓缩产物的不小于5倍，更优选为5-100倍；优选地，所述浓缩是采用浓缩管离心，所述浓缩管允许1.5-3.5KD的物质通过，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于增强记忆力的血浆提取物，其特征在于：所述血浆提取物包括多种蛋白质和多种小分子；所述血浆分离物的SDS‑PAGE变性胶电泳至少包括5条肉眼清晰可见的条带，所述条带的分子量为：25kD、35kD、50kD、69kD、105kD。

【技术特征摘要】
1.一种用于增强记忆力的血浆提取物，其特征在于：所述血浆提取物包括多种蛋白质和多种小分子；所述血浆分离物的SDS-PAGE变性胶电泳至少包括5条肉眼清晰可见的条带，所述条带的分子量为：25kD、35kD、50kD、69kD、105kD。2.根据权利要求1所述的用于增强记忆力的血浆提取物，其特征在于：通过蛋白质谱分析，所述血浆提取物中至少含有如下57种蛋白：优选地，所述多种小分子至少包括与所述57种蛋白中任何一种蛋白结合的小分子。3.根据权利要求1所述的用于增强记忆力的血浆提取物，其特征在于：所述血浆来源于哺乳动物；优选地，所述血浆来源于人类。4.一种权利要求1-3任一所述的用于增强记忆力的血浆提取物的制备方法，其特征在于：该制备方法依次包括以下步骤：血浆收集、分子量截留、SD灭活、离心分离、阴离子交换、透析、浓缩；优选地，该制备方法在血浆收集步骤和分子量截留步骤之间还包括：低温过滤步骤和低温超滤步骤。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：在所述血浆收集步骤中，利用抗凝管收集血液，再通过离心收集上清液，得到血浆；优选地，所述离心中，离心力为500-1000g，时间为10-20分钟，离心温度为0-15℃。6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于：在所述低温过滤步骤中，在压力条件下将所述血浆进行过滤，得到滤液；优选地，滤膜的孔径为不小于0.22微米，更优选所述滤膜的孔径为0.22微米和0.45微米；优选地，所述过滤的温度为0-5℃，压力为1-20MPa。7.根据权利要求4-6任一所述的制备方法，其特征在于：在所述低温超滤步骤中，将所述滤液通过施加压力进行膜包超滤，得到低温超滤产物；优选地，所述膜包截留分子量为3kD-10kD；优选地，所述超滤的温度为0-8℃，压力为1-20MPa；优选地，所述超滤使用的缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、HBS缓冲液中的一种；更优选地，所述Tris-盐酸缓冲液的浓度为0.2-200mM、pH值为7.0-8.8，所述磷酸缓冲液的浓度为1.0-500mM、pH值为6.0-9.2，所述HBS缓冲液的浓度为0.5-350mM、pH值为6.4-8.4；更优选地，所述缓冲液为100mM、pH值为8.0的Tris-盐酸缓冲液。8.根据权利要求4-7任一所述的制备方法，其特征在于：在所述分子量截留步骤中，将所述血浆或所述低温超滤产物通过施加压力进行分子量截留，得到分子量截留产物；优选地，所述分子量截留产物的分子量为大于等于10kD，更优选为大于10kD至小于等于50kD；优选地，所述施加压力的方式为：将所述低温超滤产物置于浓缩管中进行离心；更优选地，所述浓缩管允许10-50kD的物质通过；所述离心的离心力为500-3000g，时间为10-120分钟，温度为0-15℃；优选地，所述施加压力的方式为：将所述低温超滤产物置于浓缩杯中通过液氮进行加压；更优选地，所述浓缩杯允许10-50kD的物质通过；所述加压的压力为1-20MPa，加压时间为4-8小时。9.根据权利要求4-8任一所述的制备方法，其特征在于：在所述SD灭活步骤中，将所述分子量截留产物用SD灭活剂重新悬浮后静置，得到灭活产物；优选地，所述静置温度为4～28℃，时间为6～24小时；更优选为所述静置温度为20℃，时间为8小时；优选地，所述SD灭活剂含有0.3～2％的N-丁基三磷酸盐、0.5～2％的吐温。10.根据权利要求4-9任一所述的制备方法，其特征在于：在所述离心分离步骤中，将所述灭活产物离心后保留上清液，得到离心分离产物；优选地，所述离心中，离心力为2000-500...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔文宏，张丽丽，孔毅荣，郝敬雨，石浩威，任园园，
申请(专利权)人：田野，
类型：发明
国别省市：北京;11