一种角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程制造技术

本发明专利技术公开了一种角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程，包括黄牛角、水牛角、山羊角和绵羊角共有的特征肽,所述特征肽的序列为SQQQEPLVCPNYQSYFR。角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程，包括如下步骤：步骤一：将角类样品采用胰蛋白酶酶解处理；步骤二：进行液质联用分析；步骤三：采用电喷雾正离子模式进行多反应监测，选择离子对715.33→572.28，910.52进行MRM扫描。本发明专利技术的有益效果是，通过一种山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角的角蛋白共有的特征肽用于羚羊角中掺伪的检测，能够快速的检出羚羊角药材中掺入的山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角成分。

Application process of keratin characteristic peptide in detection of antelope horn adulteration

The invention discloses an application process of keratin feature peptide in the detection of adulteration of antelope horn, including yellow horn, buffalo horn, horn and sheep horn features common peptide, the sequence characteristics of peptide was SQQQEPLVCPNYQSYFR. Application of flow characteristics of keratin peptides in detection of adulteration in antelope horn, which comprises the following steps: step one: the angle of sample with trypsin enzyme treatment; step two: LC-MS analysis; step three: using electrospray ionization in positive ion mode with multiple reaction monitoring, selected ion MRM scans were performed in 715.33, 572.28910.52. The beneficial effect of the invention is keratin by a goat, sheep horn angle, buffalo horn, yellow horns, the common characteristic of peptides for detection of adulteration of antelope horn, antelope horn can be detected fast medicine mixed into goat horn, sheep horn, buffalo horn, yellow horn component.

【技术实现步骤摘要】
一种角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程
本专利技术涉及生物材料应用，特别是一种角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程。
技术介绍
羚羊角是我国传统的名贵中药，具有平肝息风、清肝明目、散血解毒的功效，临床主要用于高热惊厥，在对小儿发热有很好的疗效。药典中规定羚羊角为牛科动物赛加玲羊SaigatataricaLinnaeus的角。赛加羚羊数量稀少，属于濒危动物，是国家一级保护动物，已经严禁捕杀，这导致羚羊角的短缺，价格昂贵，一些不法商家在利益的驱动下在羚羊角粉末中掺入价格便宜的山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角。目前羚羊角成分的检测方法主要是性状和显微鉴定法，性状、显微鉴别法虽然简单快捷，但对于比较相近的角类药材缺乏专属性。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决上述问题，设计了一种角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程。实现上述目的本专利技术的技术方案为，一种角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程，包括黄牛角、水牛角、山羊角和绵羊角共有的特征肽,所述特征肽的序列为SQQQEPLVCPNYQSYFR。蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程，包括如下步骤：步骤一：将角类样品采用胰蛋白酶酶解处理：取角样品粉末1mg，加1ml水超声10min，10000rpm离心10min收集沉淀；加1ml50％乙醇超声10min，10000rpm离心10min收集沉淀；加入0.5ml变性缓冲液；加入25μl1MDTT；90℃处理1h，加入60μl1MIAA，暗处反应1h，10000rpm离心10min，收集上清；取100μl上清加入10kd超滤管，10000rpm离心20min；加入0.4ml25mMNH4HCO3洗涤3次；加100μl25mMNH4HCO3溶液到超滤管中，加入2μg胰蛋白酶；37℃反应16h；10000rpm离心10min收集滤液。步骤二：进行液质联用分析：采用的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱：0→3min，流动相A为96％；3→8min，流动相A为96％→92％；8→10min，流动相A为92％→50％；10→12min，流动相A为50％；12→12.1min，流动相A为50％→95％；12.1→15min，流动相A为96％，流速为0.3ml/min。步骤三：采用电喷雾正离子模式进行多反应监测，选择离子对715.33→572.28，910.52进行MRM扫描。步骤一中，所述变性缓冲液为6M盐酸胍，1.2MTris-HCl，2.5mMEDTA，pH8.4步骤二中，所述色谱柱的内径为2.1mm。步骤三中，所述电喷雾正离子模式以三重四极杆质谱作为检测器。步骤三中，所述电喷雾离子源为ESI+。利用本专利技术的技术方案制作的一种角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程，液质联用技术测定物种特异性蛋白质的的特征肽，从而对食品药品进行物种溯源的方法已经比较成熟。角中含有大量的角蛋白，本专利技术提供一种山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角的角蛋白共有的特征肽用于羚羊角中掺伪的检测方法，能够快速的检出羚羊角药材中掺入的山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角成分。附图说明图1是本专利技术所述一种角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程的结构示意图；图2是本专利技术所述一种角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的不同角类样品中特征肽SQQQEPLVCPNYQSYFR的MRM色谱图；图3是本专利技术所述一种角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的掺入不同角类药材的羚羊角样品中特征肽SQQQEPLVCPNYQSYFR的MRM色谱图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术进行具体描述，如图1-3所示，一种角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程，包括黄牛角、水牛角、山羊角和绵羊角共有的特征肽,所述特征肽的序列为SQQQEPLVCPNYQSYFR；角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程，包括如下步骤：步骤一：将角类样品采用胰蛋白酶酶解处理：取角样品粉末1mg，加1ml水超声10min，10000rpm离心10min收集沉淀；加1ml50％乙醇超声10min，10000rpm离心10min收集沉淀；加入0.5ml变性缓冲液；加入25μl1MDTT；90℃处理1h，加入60μl1MIAA，暗处反应1h，10000rpm离心10min，收集上清；取100μl上清加入10kd超滤管，10000rpm离心20min；加入0.4ml25mMNH4HCO3洗涤3次；加100μl25mMNH4HCO3溶液到超滤管中，加入2μg胰蛋白酶；37℃反应16h；10000rpm离心10min收集滤液；步骤二：进行液质联用分析：采用的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱：0→3min，流动相A为96％；3→8min，流动相A为96％→92％；8→10min，流动相A为92％→50％；10→12min，流动相A为50％；12→12.1min，流动相A为50％→95％；12.1→15min，流动相A为96％，流速为0.3ml/min；步骤三：采用电喷雾正离子模式进行多反应监测，选择离子对715.33→572.28，910.52进行MRM扫描；步骤一中，所述变性缓冲液为6M盐酸胍，1.2MTris-HCl，2.5mMEDTA，pH8.4；步骤二中，所述色谱柱的内径为2.1mm；步骤三中，所述电喷雾正离子模式以三重四极杆质谱作为检测器；步骤三中，所述电喷雾离子源为ESI+。本实施方案的特点为，包括黄牛角、水牛角、山羊角和绵羊角共有的特征肽,所述特征肽的序列为SQQQEPLVCPNYQSYFR，角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程，包括如下步骤：步骤一：将角类样品采用胰蛋白酶酶解处理：取角样品粉末1mg，加1ml水超声10min，10000rpm离心10min收集沉淀；加1ml50％乙醇超声10min，10000rpm离心10min收集沉淀；加入0.5ml变性缓冲液；加入25μl1MDTT；90℃处理1h，加入60μl1MIAA，暗处反应1h，10000rpm离心10min，收集上清；取100μl上清加入10kd超滤管，10000rpm离心20min；加入0.4ml25mMNH4HCO3洗涤3次；加100μl25mMNH4HCO3溶液到超滤管中，加入2μg胰蛋白酶；37℃反应16h；10000rpm离心10min收集滤液；步骤二：进行液质联用分析：采用的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱：0→3min，流动相A为96％；3→8min，流动相A为96％→92％；8→10min，流动相A为92％→50％；10→12min，流动相A为50％；12→12.1min，流动相A为50％→95％；12.1→15min，流动相A为96％，流速为0.3ml/min；步骤三：采用电喷雾正离子模式进行多反应监测，选择离子对715.33→572.28，910.52进行MRM扫描，液质联用技术测定物种特异性蛋白质的的特征肽，从而对食品药品进行物种溯源的方法已经比较成熟。角中含有大量的角蛋白，本专利技术提供一种山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角的角蛋白共有的特征本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种角蛋白特征肽，其特征在于，包括黄牛角、水牛角、山羊角和绵羊角共有的特征肽,所述特征肽的序列为SQQQEPLVCPNYQSYFR。

【技术特征摘要】
1.一种角蛋白特征肽，其特征在于，包括黄牛角、水牛角、山羊角和绵羊角共有的特征肽,所述特征肽的序列为SQQQEPLVCPNYQSYFR。2.一种运用权利要求1的角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：将角类样品采用胰蛋白酶酶解处理：取角样品粉末1mg，加1ml水超声10min，10000rpm离心10min收集沉淀；加1ml50％乙醇超声10min，10000rpm离心10min收集沉淀；加入0.5ml变性缓冲液；加入25μl1MDTT；90℃处理1h，加入60μl1MIAA，暗处反应1h，10000rpm离心10min，收集上清；取100μl上清加入10kd超滤管，10000rpm离心20min；加入0.4ml25mMNH4HCO3洗涤3次；加100μl25mMNH4HCO3溶液到超滤管中，加入2μg胰蛋白酶；37℃反应16h；10000rpm离心10min收集滤液。步骤二：...

【专利技术属性】
技术研发人员：杭宝建，邢晟，由鹏飞，石峰，巩丽萍，咸瑞卿，郭常川，王骏，刘艳明，
申请(专利权)人：山东省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：山东,37