一种具有抗氧化活性的蛋白肽及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种具有抗氧化活性的蛋白肽及其制备方法，属于水产品食品加工技术领域。本发明专利技术蛋白肽的制备方法包括：(1)超声处理去脂的鱼肉浆液；(2)加入复合蛋白酶进行酶解，酶解过程无需添加酸或碱调节pH值；(3)对酶解液离心并取上清液超滤；(4)滤液过柱分离，收集洗脱峰；洗脱液通过反向高效液相色谱进行分离，即得。本发明专利技术方法操作简单，适于产业化生产，制备过程无需添加酸或碱调节pH值，且不添加任何添加剂，较好地保持产品的功能特性，产品得率高，风味好，所制得的蛋白肽具有优异的抗氧化功能，可广泛应用于特需食品和营养食品的制造。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及水产食品加工
，具体地涉及一种具有抗氧化活性的蛋白肽及其制备方法。
技术介绍
蛋白质经过酶解得到多肽，使其蛋白质的结构发生改变，疏水区的活性官能基团暴露，随着肽键的裂解，小分子蛋白肽和氨基酸增加，从而可以提供质子或电子源，保持较高的氧化还原电位，使其具有清除活性自由基的能力。氧化对需氧生物特别是脊椎动物和人类是一个重要的代谢过程，但是它却导致了自由基的形成。活性氧自由基(ROS)被认为能引起氧化应激。在食品体系中，脂类或蛋白质可能会受到ROS的攻击经历氧化过程，从而导致食品产生不愉快味道，颜色发暗，同时也可能产生潜在的毒性终产物。抗氧化多肽的应用能防止食品成分由于捐献电子给活性氧自由基以及中和活性氧自由基的负面作用而变质。抗氧化肽在医学、化妆品、生物、食品领域有广泛的应用价值。化学合成抗氧化肽不同程度上损伤人体的肝脏、肾脏等器官，部分国家和地区已经明确限量或禁止使用。因此，研发高效、安全的天然抗氧化剂成为热点。食用级抗氧化肽的安全性要求更高，抗氧化性较其他体内抗氧化生物分子更为显著，可以稳定脂质或含脂质产品。天然的抗氧化多肽因分子量小、易吸收、活性强等特点。目前天然抗氧化肽主要是通过酶解大豆蛋白、奶酪、乳清蛋白、动物胶、面筋等各种食物蛋白获得。最近几年发展到海洋产品如海藻、虾皮、两栖动物裸露皮肤分泌物、真菌等。有关天然抗氧化活性肽的制备方法，现有技术的不足在于大多数蛋白肽酶解过程中通过添加酸或碱调节pH，明显地影响产品的风味，同时产品的灰分较高。目前还没有以鱼肉为原料制备抗氧化肽的报道。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的是在于提供一种具有抗氧化活性的蛋白肽。本专利技术的另一目的在于提供上述蛋白肽的制备方法。本专利技术的再一个目的在于提供上述蛋白肽的应用。为了实现上述技术目的，本专利技术提供了一种具有抗氧化活性的蛋白肽及其制备方法，包括以下步骤:(1)超声处理去脂的鱼肉浆液；(2)加入复合蛋白酶进行酶解，酶解过程无需添加酸或碱调节pH值；(3)对酶解液离心并取上清液进行超滤；(4)滤液过柱层析分离，收集洗脱峰，洗脱液通过反向高效液相色谱进行分离即得。可选的，所述鱼肉为淡水鱼肉或海水鱼肉。在本专利技术的实施例中选用鳙鱼和鳕鱼。在本专利技术的一个实施例中，步骤(1)所述去脂的鱼肉浆液通过以下方法制备得到：洗净鱼肉，用打浆机将鱼肉打成浆，得鱼肉浆；然后向鱼肉浆中加入0.8-2.0倍鱼肉重量的水，在85-95℃下水浴10-15min，再用分散均质机在8000-10000rpm下匀浆1-3min，得鱼肉浆液；通过6000-8000g离心10-15min，去上层脂肪，得到去脂的鱼肉浆液。本领域技术人员应当理解，去脂的鱼肉浆液的制备方法包括但不限于上述方法。步骤(1)超声处理方法为将去脂的鱼肉浆液温度调至50-65℃，30-45kH的超声频率处理15-25min。本专利技术通过大量实验发现，鱼肉浆液温度调至50-65℃进行超声处理，效果最好，能够较好地改变鱼肉蛋白的组织结构，使下面酶解步骤在较短酶解时间和较小的用酶量就能够获得优质的蛋白肽。步骤(2)酶解加入的复合蛋白酶为碱性蛋白酶、风味蛋白酶和菠萝蛋白酶，三者质量比为(2-3):(1-2):(1-2)，且加入的复合蛋白酶总质量与鱼肉质量比为1：300-500。优选地，所述碱性蛋白酶为Alcalase2.4L碱性蛋白酶。步骤(2)中酶解条件为55-65℃酶解2-5h。步骤(2)酶解后将酶解液在95-100℃下保温3-5min，冷却至室温。步骤(3)离心条件为5000-7000g10-15min；采用2000D的超滤膜进行超滤。在本专利技术的一个实施例中，是利用孔径为2000道尔顿的陶瓷膜对步骤(2)所得的上清液进行超滤，收集滤液，再经过SephadexG-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，流速为0.8mL/min，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第1个洗脱峰；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行1次分离，反相HPLC的分离条件是以5-90％乙腈溶液(0-5min乙腈溶液为5％，5-40min乙腈溶液从5％到40％，40-50min乙腈溶液从40％到90％)作为洗脱液，流速为5-8mL/min，得到含抗氧化活性肽的溶液。制备方法制备得到的蛋白肽属于本专利技术的保护范围。在制得的蛋白肽中，氨基酸序列为Lys-Ala-Gln–Arg-Leu-Lys-Glu(SEQIDNO.1)和Lys-Gln-Ser-Asp-Val(SEQIDNO.2)的肽的含量大于40％。通过进一步功能验证，发现上述肽具有优异的抗氧化活性。进而本专利技术提供一种具有抗氧化活性的蛋白肽，其氨基酸序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示。本专利技术上述方法制得的蛋白肽或氨基酸序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示肽的抗氧化用途属于本专利技术的保护范围。含有本专利技术上述方法制得的蛋白肽或氨基酸序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示肽的食品、保健品、化妆品或药物属于本专利技术的保护范围。本专利技术的优点在于：(1)本专利技术开发的生产工艺中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性，较易实现产业化生产。(2)本专利技术鱼肉抗氧化活性肽中Lys-Ala-Gln–Arg-Leu-Lys-Glu和Lys-Gln-Ser-Asp-Val的肽的含量40％以上。具有很好的抗氧化功能，其清除DPPH自由基能力可达92％以上。(3)本专利技术鱼肉抗氧化活性肽是以天然产物为原料、经过食品级复合蛋白酶酶解获得的产物，将其作为食品、化妆品的配料，安全，无毒。(4)本专利技术鱼肉抗氧化活性肽制备方法简单，易实现产业化生产，有效地解决了目前抗氧化多肽难以实现产业化生产的问题。(5)本专利技术开发的抗氧化肽具有较好的风味和热稳定性，能广泛应用于功能食品。具体实施方式除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本专利技术的保护范围。除有特别说明，本专利技术中用到的各种试剂、原料均为可以从市场上购买的商品或者可以通过公知的方法制得的产品。实施例1鳙鱼鱼肉抗氧化活性肽的制备(1)将鳙鱼鱼肉100克洗净，用打浆机将鱼肉打成浆,得鱼肉浆；然后向鱼肉浆中加入1.5倍鱼肉重量的水150克，在95℃中水浴20min，再用分散均质机在10000rpm下匀浆2min，得到鱼肉浆液250克。通过6000g离心10～min，去上层脂肪，得到去脂的鱼肉浆液230克。将去脂鱼肉浆液的温度调整到55℃，于超声波发生器中经超声波(频率为35kH)处理15分钟。(2)调节步骤(1)鱼肉浆液的温度为55℃，然后按照复合蛋白酶与鱼肉质量比为1：300的比例加入复合蛋白酶(碱性蛋白酶：风味蛋白酶:菠萝蛋白酶＝2:1：1)0.33克，在55℃下酶解2小时，然后在95℃下保温3min，冷却至室温，再在5000g条件下离心15min，收集上清液；(3)利用孔径为2000道尔顿的陶瓷膜对步骤(2)所得的上清液进行超滤，收集滤液，再经过SephadexG-25(长60cm，直径4.6cm)凝胶色谱分离，洗脱液为去离子水，流速为0.8mL/min，洗脱峰在280nm下进行测量，收集第1个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有抗氧化活性的蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)超声处理去脂的鱼肉浆液；(2)加入复合蛋白酶进行酶解，酶解过程无需添加酸或碱调节pH值；(3)对酶解液离心并取上清液进行超滤；(4)滤液过柱层析分离，收集洗脱峰，洗脱液通过反向高效液相色谱进行分离即得。

【技术特征摘要】
1.一种具有抗氧化活性的蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)超声处理去脂的鱼肉浆液；(2)加入复合蛋白酶进行酶解，酶解过程无需添加酸或碱调节pH值；(3)对酶解液离心并取上清液进行超滤；(4)滤液过柱层析分离，收集洗脱峰，洗脱液通过反向高效液相色谱进行分离即得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)超声处理方法为将去脂的鱼肉浆液温度调至50-65℃，30-45kH的超声频率处理15-25min。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)酶解加入的复合蛋白酶为碱性蛋白酶、风味蛋白酶和菠萝蛋白酶，三者质量比为(2-3):(1-2):(1-2)，且加入的复合蛋白酶总质量与鱼肉质量比为1：3...

【专利技术属性】
技术研发人员：张恒，罗永康，
申请(专利权)人：国肽生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11