从花生粕中提取强抗氧化蛋白多肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种从花生粕中提取强抗氧化蛋白多肽的方法，该方法包括以下步骤：花生粕加水灭菌后接种曲精和葡糖糖，发酵后得到花生粕发酵曲料；发酵曲料加入水和蛋白酶酶解，离心分离后得到酶解液；酶解液浓缩后经两次醇提得到强抗氧化蛋白多肽。本发明专利技术以花生粕为发酵底物进行发酵诱导产酶，并联合商业酶水解花生粕，既可以利用生物发酵法获得与原料特性吻合、专一性较高的酶，又结合了商业酶高酶活特性，实现控制酶解，提高原料利用率，降低生产成本，最大程度释放抗氧化特性的多肽组分。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于花生柏深加工领域，具体涉及一种从花生柏中提取具有强抗氧化特性 的蛋白多肽的方法。
技术介绍
自由基又称游离基，是指外层轨道上含有一个以上未配对电子的分子、原子、离子 或基团。自由基极其活泼，可攻击所有的细胞成分，从而导致核酸、蛋白质、脂肪、糖类和生 物膜发生改变，引起细胞的损坏和老化，加速人体的衰老。 在机体内，生物合成的抗氧化酶和其他内源性抗氧化剂可清除活性氧，减缓自由 基的作用，但当自由基产生过多（剧烈运动）或机体消除能力降低时（机体免疫力低下）， 未能被及时清除的自由基仍会损伤机体重要生物大分子，造成机体伤害。因此，可通过补充 外源性抗氧化剂及适当的运动来提高机体抗氧化水平，抵御自由基的损害。 在我们日常生活中，机体主要通过膳食来获得各种营养补充体内的代谢所需，而 当我们在考虑膳食营养合理时，也应注重对自由基具有一定清除作用的食物。除了医药类 特殊抗氧化剂，食物中抗氧化物质大致分为：维生素类、植物来源提取物类、微量元素类和 蛋白质多肽氨基酸类。其中多肽是一种分子结构介于氨基酸与蛋白质之间的化合物，其拥 有与蛋白质和氨基酸相迥异的功能特性，不仅具有更佳的吸收机制，同时也具有蛋白质或 其组成氨基酸所没有的生理功能，如抗氧化和降高血压等特性，而且随着科技的发展，越来 越多的新功能蛋白多肽被发现。 花生是全球最重要的四大油料作物之一，我国50-60%的花生用于榨油，榨油后所 得花生柏为富含蛋白质的营养基料，其蛋白含量高达40-50%，氨基酸组成比较合理，接近 联合国粮农组织（FA0)和世界卫生组织（WHO)的推荐值。但我国花生榨油多采用机械压榨 和有机溶剂浸提相结合，导致提油后残余花生柏的蛋白质高度变性，营养和风味也均发生 劣变，因此目前大多用作饲料或燃料，产品附加值低，资源浪费严重。 采用生物酶解和生物发酵技术可以对大宗低值蛋白资源进行深度开发和利用，该 法具有安全性较高、条件温和，且水解过程容易控制的优点。发酵和酶解均可将大分子的蛋 白质水解为小分子的多肽或氨基酸，进而改善原始蛋白的吸收特性、营养特性和功能特性 等；目前活性多肽的应用早已深入市场，如日本公司制造的抗氧化肽和降血脂肽应用于健 康食品，畅销欧美市场。因此，以低值大宗的花生柏为原料，结合生物发酵和酶解技术提取 花生蛋白中的强抗氧化肽，具有较大的经济和社会意义。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于提供一种从花生柏中提取强抗氧化蛋白多肽的方法，该方 法结合生物发酵-酶解技术最大程度释放花生柏蛋白质中的抗氧化肽，然后通过醇沉分级 作用，调控花生蛋白酶解产物中的抗氧化多肽的分布情况，富集具有抗氧化特性的蛋白多 肽，此方法回收率高、安全，适宜大规模生产。 本专利技术的另一目的在于提供由上述方法制得的强抗氧化蛋白多肽。 本专利技术的再一目的在于提供上述的强抗氧化蛋白多肽的用途。 本专利技术的目的通过下述技术方案实现： -种从花生柏中提取强抗氧化蛋白多肽的方法，包括以下步骤： (1)花生柏曲料的制备：按花生柏重量加入0. 5-1. 0倍去离子水并混合均匀，将混 匀的湿润花生柏灭菌后冷却至常温，然后将曲精与葡萄糖混合均匀，并接种至冷却好的灭 菌花生柏上，搅拌均匀；在湿度为90-95%、温度为28-32 °C条件下发酵36-40h，得花生柏发 酵曲料；以灭菌后的花生柏质量为计算基准，曲精的加入量占0. 05-0. 1 %，葡萄糖加入量 占 0? 2-0. 5% ; (2)花生柏发酵曲料的控制酶解：按重量取花生柏发酵曲料1份和去离子水5-8 份混合均匀，加入蛋白酶，在50-60°C的条件下酶解，当水解度达到15-20 %时，灭酶，离心 分离，得到的上清液为富含抗氧化肽的花生柏酶解液；以花生柏发酵曲料的质量为计算基 准，蛋白酶的加入量占0.3-0. 6% ; (3)两步醇沉分离富集抗氧化肽：真空浓缩花生柏酶解液至固形物含量30-45%， 加入无水乙醇，使得溶液体系乙醇含量达到10-20% (按质量计），恒温匀速搅拌lh后，离 心，取上清液，得到第一次醇沉上清液；往第一次醇沉上清液中继续加无水乙醇使得乙醇含 量为40-50%，恒温匀速搅拌lh后，离心取沉淀部分，去除沉淀部分残余乙醇，冻干，得到强 抗氧化蛋白多肽； 步骤（1)所选用的花生柏为油脂含量不超过10%的高温压榨和/或溶剂提油后的 花生饼/柏； 步骤（1)所述的灭菌是在121°C下灭菌10分钟； 步骤⑴所述的曲精为酱油发酵专用曲精，优选沪酿3.042米曲霉菌种发酵所得 的曲精； 步骤⑵所述的蛋白酶为商业用的胰酶和碱性蛋白酶，胰酶的加入量占总酶量的 20-40%，碱性蛋白酶占总酶量的60-80%; 步骤（3)所述的恒温匀速搅拌是加入无水乙醇后在常温下200-400r/min转速下 勾速搅拌lh ; 步骤（3)所述去除沉淀部分残余乙醇是用去离子水复溶后真空条件下浓缩，温度 为 50-60 °C。 步骤⑵和（3)所述的离心采用常温离心，一般为5000-8000r/min保持 15-30min〇 由上述方法制得的强抗氧化蛋白多肽可用于药品、保健品或食品中。 本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果： (1)本专利技术以花生柏为发酵底物进行发酵诱导产酶，并联合商业酶水解花生柏，既 可以利用生物发酵法获得与原料特性吻合、专一性较高的酶，又结合了商业酶高酶活特性， 实现控制酶解，提高原料利用率，降低生产成本，最大程度释放抗氧化特性的多肽组分。 (2)本专利技术采用两次醇沉法，通过不同浓度的乙醇处理去除弱抗氧化特性组分、富 集强抗氧化特性组分，一方面可以高效分离目标肽，富集分子量在1000_5000Da之间的肽， 同时达到高效浓缩目标肽的目的，简化了工艺流程。 (3)本专利技术所用乙醇可以通过回收循环利用，经济安全无污染。 (4)本专利技术工艺操作简单、生产成本低、没有任何污染、蛋白回收率高，所得抗氧化 肽的抗氧化活性强，可广泛应用于食品领域中。【附图说明】 图1是实施例和对比例所得多肽的分子量分布图；【具体实施方式】 下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限 于此。 以下实施例中，各试验指标的测定方法如下： 还原力的测定： 采用铁氰化钾还原体系，700nm处测定样品的还原力。将制备的样品以蛋白浓度进 行梯度稀释，取样品液2mL于试管中，加2mL浓度为0. 2mol/L磷酸盐缓冲液（PBS，pH 6. 6) 和2mL浓度为1% (m/V)的六合铁氰化钾溶液，混合均匀于50°C恒温水浴锅中保温20min， 加2mL浓度10 %的TCA，充分混匀。取上清液2mL于试管中，加2mL蒸馏水及0. 4mL浓度 0. 1 %的FeCl3，充分混匀后静置lOmin，在波长为700nm处测定其吸光度。每个样品按上述 步骤操作，平行测定三次（还原力IC50值指当A 7(Wnm= 0. 5时，样品的蛋白浓度，单位为mg/ mL) 〇 DDPH自由基抑制率的测定：当前第1页1 2 3 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从花生粕中提取强抗氧化蛋白多肽的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)花生粕曲料的制备：按花生粕重量加入0.5‑1.0倍去离子水并混合均匀，将混匀的湿润花生粕灭菌后冷却至常温，然后将曲精与葡萄糖混合均匀，并接种至冷却好的灭菌花生粕上，搅拌均匀；在湿度为90‑95％、温度为28‑32℃的条件下发酵36‑40h，得花生粕发酵曲料；以灭菌后的花生粕质量为计算基准，曲精的加入量占0.05‑0.1％，葡糖糖加入量占0.2‑0.5％；(2)花生粕发酵曲料的控制酶解：按重量取花生粕发酵曲料1份和去离子水5‑8份混合均匀，加入蛋白酶，在50‑60℃的条件下酶解，当水解度达到15‑20％时，灭酶，离心分离，得到的上清液为富含抗氧化肽的花生粕酶解液；以花生粕发酵曲料的质量为计算基准，蛋白酶的加入量占0.3‑0.6％；(3)两步醇沉分离富集抗氧化肽：真空浓缩花生粕酶解液至固形物含量30‑45％，加入无水乙醇，使得溶液体系乙醇含量达到10‑20％(按质量计)，恒温匀速搅拌1h后，离心，取上清液，得到第一次醇沉上清液；往第一次醇沉上清液中继续加无水乙醇使得乙醇含量为40‑50％，恒温匀速搅拌1h后，离心取沉淀部分，去除沉淀部分残余乙醇，冻干，得到强抗氧化蛋白多肽。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵谋明，张佳男，苏国万，赵容钟，林恋竹，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44