细胞外非胶原基质网络蛋白的多肽抗体及其制备方法和应用技术

一种细胞外非胶原基质网络蛋白的多肽抗体，是以氨基酸序列作为抗原选择部分，采用抗体制备标准方法合成、分离纯化得到的IgG抗体，该氨基酸序列如下ALEDSGGRQDSAAWDLPQQAHQPTEPEPVTIKIKDLLSCSNFAVQHRFLFEEDNLSRSTQKLFHSTKSSGNPLEE。该多肽抗体可用于特异性检测两种不同长度的基质素2。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，尤其涉及一种细胞外基质网络蛋白的多肽抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
细胞是生命的单位。我们身体里的每个细胞都生活在细胞外基质(ExtracellularMatrix，ECM)中。细胞外基质就象土壤，合适的土壤是保证作物生长(组织器官功能)的必要条件。细胞外基质合成与降解的平衡破坏，最终导致此处细胞外基质过度聚集。细胞外基质合成与降解是受多种因素相互影响、综合调控的复杂过程。深入研究细胞外基质合成与降解综合调控机理对临床干预基质过度聚集、预防纤维化、研发临床治疗药物具有重要意义。基质素2(Matrilin-2)作为信息转换器(Adaptor)分子是连接细胞外胶原纤维网络、非胶原微丝蛋白网络、蛋白多糖及细胞膜表面受体的重要成分，在细胞内外信息传递和交换等多种生理功能上扮演着十分重要的角色。细胞外非胶原基质网络结构的稳态取决于该蛋白(基质素2)的合成与降解的动态平衡，同时也直接影响细胞外基质与细胞、细胞与细胞、以及基质与基质间的通信关系。我们课题组新近的研究表明，基质素2独特功能域有一个57碱基、19个氨基酸的剪接，因此在生理状态下存在两种不同长度的基质素2，而且在不同小鼠组织中二者的比例存在差异。我们进一步的研究首次证实，这两种不同长度的基质素2具有生理学的异质性。没有19个氨基酸剪接的长基质素2主要形成自身四聚体、三聚体，同时还很容易形成多聚体，而且相对比较不稳定，容易被酶切断；然而，有19个氨基酸剪接的短基质素2主要形成自身四聚体、三聚体，没有发现形成自身多聚体，而且相对比较稳定，不容易被酶切断。基质素2在细胞外可自身形成多聚体或与其它基质素结合形成杂合多聚体。每个多聚体蛋白的亚基都能与细胞外基质中的胶原蛋白、蛋白多糖或其它非胶原蛋白分子形成胶原依赖性和胶原非依赖性细胞外基质网络。在生理状态下独特功能域存在没有剪接、有剪接两种形式的mRNA和蛋白质，这也许说明两种不同的基质素2协同作用对维持基质素2自身结构稳定性和其与其它细胞外基质蛋白之间的稳态具有重要意义。我们课题组以及部分科研人员的研究工作证实，基质素2在多种组织中均有表达(参见图1、图2)。由于基质素2广泛分布在各器官和组织中(参见图3)，在研究各种组织(如心、肝、肾、肺、脑、皮肤、阴茎等器官)的生理功能时，基质素2的研究可能具有应用前景。另外，由于各种疾病的预后都与纤维组织增生、包裹有关，因此深入研究基质素2对阐明非胶原网络蛋白基质素2结构的稳定与多种疾病导致纤维组织增生、纤维化过程也将具有指导作用(参见图4)。我们的研究认为，如果能生产一个同时识别两种不同长度基质素2的抗体，则该抗体将可以应用到基质素在各种组织分布方面的研究工作，这将是认识基质素2在不同组织中生理功能以及在疾病发生发展过程中(特别是细胞外基质紊乱、纤维组织增生、疾病纤维包裹、纤维化)病理意义的关键突破点，也将具有肯定的应用前景。另外，深入研究基质素2的剪切及其在细胞外基质网络中的作用也许可能为治疗延缓糖尿病、肾小球硬化、肝硬化等等所致基质过度聚集具有一定的启发作用，也将具有可观的社会效益和经济效益。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，克服以上
技术介绍
中提到的特异性不够，不能明确证实是否能够检测具有明显异质性的两种不同长度的基质素2等不足和缺陷，提供一种能够同时识别两种不同长度的基质素2的细胞外非胶原基质网络蛋白的多肽抗体，还相应提供该细胞外非胶原基质网络蛋白的多肽抗体的制备方法和应用。为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为一种细胞外非胶原基质网络蛋白的多肽抗体，所述多肽抗体是以氨基酸序列作为抗原选择部分，采用抗体制备标准方法合成、分离纯化得到的IgG抗体，该氨基酸序列如下(以上表示氨基酸序列时，均是以氨基酸三字母缩写的单字母符号表示)：ALEDSGGRQDSAAWDLPQQAHQPTEPEPVTIKIKDLLSCSNFAVQHRFLFEEDNLSRSTQKLFHSTKSSGNPLEE。三字母表示的氨基酸及其单字母缩写如下所示。甘氨酸GlycineGlyG丙氨酸AlanineAlaA缬氨酸ValineValV亮氨酸LeucineLeuL异亮氨酸IsoleucineIleI脯氨酸ProlineProP苯丙氨酸PhenylalaninePheF酪氨酸TyrosineTyrY色氨酸TryptophanTrpW丝氨酸SerineSerS苏氨酸ThreonineThrT半胱氨酸CystineCysC蛋氨酸MethionineMetM天冬酰胺AsparagineAsnN谷氨酰胺GlutarnineGlnQ天冬氨酸AsparticacidAspD谷氨酸GlutamicacidGluE赖氨酸LysineLysK精氨酸ArginineArgR组氨酸HistidineHisH上述的多肽抗体，优选的，所述氨基酸序列的确定源自基质素2的独特功能域。上述的多肽抗体，优选的，所述独特功能域的氨基酸序列如下：SRSTQKLFHSTKSSGNPLEE。作为一个总的技术构思，本专利技术还提供一种上述的细胞外非胶原基质网络蛋白的多肽抗体的合成方法，包括以下步骤：以细胞外非胶原基质网络蛋白基质素2(Matrilin2)的独特功能域C-末端部分的氨基酸序列为基础进行多肽合成；再以合成的多肽的C-末端部分的氨基酸序列作为抗原选择部分，采用抗体制备标准方法合成、分离纯化IgG抗体，制备所得多克隆抗体。上述的合成方法中，优选的：所述合成的具有独特功能域多肽的氨基酸序列如下所示：ALEDSGGRQDSAAWDLPQQAHQPTEPEPVTIKIKDLLSCSNFAVQHRFLFEEDNLSRSTQKLFHSTKSSGNPLEE。上述的合成方法中，优选的：所述C-末端部分的氨基酸序列如下所示：SRSTQKLFHSTKSSGNPLEE。作为一个总的技术构思，本专利技术还提供一种上述的多肽抗体在特异性检测两种不同长度的基质素2中的应用。上述的应用中，优选的，所述多肽抗体用于制作可特异性检测两种不同长度的基质素2的试剂盒。上述的应用中，优选的，所述多肽抗体用于作为骨关节炎发病机制研究实验的指示剂。上述本专利技术设计生产的针对基质素2独特功能域的多肽抗体建立在我们多方位研究的基础上，经过多种实验方法验证证实，这是目前能够同时识别两种不同长度的基质素2的多肽抗体。我们的抗体与目前可供商业基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞外非胶原基质网络蛋白的多肽抗体，所述多肽抗体是以氨基酸序列作为抗原选择部分，采用抗体制备标准方法合成、分离纯化得到的IgG抗体，该氨基酸序列如下：ALEDSGGRQDSAAWDLPQQAHQPTEPEPVTIKIKDLLSCSNFAVQHRFLFEEDNLSRSTQKLFHSTKSSGNPLEE。

【技术特征摘要】
1.一种细胞外非胶原基质网络蛋白的多肽抗体，所述多肽抗体是以氨基酸序列作为抗原
选择部分，采用抗体制备标准方法合成、分离纯化得到的IgG抗体，该氨基酸序列如下：
ALEDSGGRQDSAAWDLPQQAHQPTEPEPVTIKIKDLLSCSNFAVQHRFLFEEDNLSRST
QKLFHSTKSSGNPLEE。
2.根据权利要求1所述的多肽抗体，其特征在于，所述氨基酸序列的确定源自基质素2
的独特功能域。
3.根据权利要求2所述的多肽抗体，其特征在于，所述独特功能域的氨基酸序列如下：
SRSTQKLFHSTKSSGNPLEE。
4.一种如权利要求1所述的细胞外非胶原基质网络蛋白的多肽抗体的合成方法，包括以
下步骤：
以细胞外非胶原基质网络蛋白基质素2的独特功能域C-末端部分的氨基酸序列为基础进
行多肽合成；再以合成的多肽的C-末端部分的氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗俊铭，王懿春，
申请(专利权)人：罗俊铭，王懿春，
类型：发明
国别省市：湖南;43