本发明专利技术涉及一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白的锌螯合胶原肽的制备方法，具体讲是以金枪鱼鱼骨为原料，采用酸法提取胶原蛋白，利用胃蛋白酶和胰蛋白酶对胶原蛋白进行酶解，采用超滤、大孔树脂柱层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到锌螯合胶原肽Gly-Lys-Thr-Gly-Trp-Pro-Gly（GKTGWPG），ESI/MS检测分子量为701.73Da。锌螯合胶原肽由于其独特的螯合和转运机制，吸收利用度高，又可同时补充多肽/氨基酸和锌，是一种理想的补锌物质。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源锌螯合胶原肽及其制备方法和用途
本专利技术涉及一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源锌螯合胶原肽及其制备方法和用途，属于水产品精深加工
技术介绍
胶原肽以其在医药、保健品、食品和化妆品等应用上的独特功效被越来越多的消费者所青睐，使其成为食品行业和保健品行业、日化行业所竞相关注的焦点。锌是人体必须的微量元素，其缺乏可导致儿童生长发育不良、智力发育落后、免疫力降低等病症。传统的锌补充剂(如葡萄糖酸锌、柠檬酸锌)稳定性差，吸收利用率低，肠胃刺激大，不易长期服用。而锌与金属螯合肽形成的螯合盐，即可促进微量元素的吸收，同时又能满足机体对活性肽、氨基酸等的需求，得到了国内外学者的广泛关注。金枪鱼是远洋渔业的重要鱼类，年捕获量超过600万吨。金枪鱼加工过程中，占总重量25%- 30%鱼骨多数加工成鱼骨粉或者作为废弃物丢掉，浪费的宝贵的渔业资源。经检索，以金枪鱼鱼骨胶原蛋白制备锌螯合胶原肽未见报道。基于此，本专利技术根据锌螯合胶原肽和金枪鱼鱼骨的研宄现状，提供一种具有金属锌螯合活性的胶原肽，并提供这种锌螯合胶原肽的制备方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的第一个技术问题是针对上述的技术现状提供一种源于金枪鱼鱼骨胶原蛋白的锌螯合胶原肽。本专利技术所要解决的第二个技术问题是提供一种源于金枪鱼鱼骨胶原蛋白的锌螯合胶原肽的制备方法。本专利技术为解决上述第一个技术问题所采取的技术方案为:一种源于金枪鱼鱼骨胶原蛋白的锌螯合胶原肽，其特征在于该胶原肽的氨基酸序列为Gly-Lys-Thr-Gly-Trp-Pro-Gly (GKTGWPG)，ESI/MS 检测分子量为 701.73 Da0本专利技术为解决上述第二个技术问题所采取的技术方案为:一种源于金枪鱼鱼骨胶原蛋白的锌螯合胶原肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤: I)金枪鱼鱼骨的预处理:按照料液比I g:10~15 mL向金枪鱼鱼骨中加0.1 mol/L NaOH溶液于4°C下浸泡3~5 h，脱除非胶原蛋白；处理后鱼骨用蒸馏水反复洗涤至pH 6.5-7.0,沥干，按照料液比I g: 5-10 11^加入0.5 mol/L EDTA溶液(pH 7.4)，于4°C下浸泡3~5天，每天更换I次EDTA溶液，脱除鱼骨中的钙，干燥、粉碎，得脱钙鱼骨粉。2)金枪鱼鱼骨胶原蛋白的制备:按照料液比I g:3~5 mL向脱钙鱼骨粉加入0.5mol/L乙酸溶液并在4°C下浸泡2~3 d，12 000 g离心30 min后取上清液，加入NaCl至溶液终浓度为0.8~1.0 mol/L，静置30~60 min, 15 000 g离心25~30 min得沉淀物，冷冻干燥即为鱼骨胶原蛋白。)金枪鱼鱼骨胶原蛋白的酶解:按照料液比Ig:15-20 mL向胶原蛋白中加入超纯水，用HCl调溶液pH到1.5-2.5，按照胶原蛋白质量的1.5-2.0%向胶原蛋白溶液中加入胃蛋白酶(酶活力彡1.6X105 U/g)，酶解3~5 h后，将溶液升温至90 °C ~ 95°C，并于此温度保持10~15min后，冷却至室温；用NaOH调溶液pH到7.5-8.5，按照胶原蛋白质量的1.2-1.5%向溶液中加入胰蛋白酶(酶活力彡2.5 X 14 U/g)，于温度35~45°C下酶解3~4 h，得酶解产物； 4)金枪鱼鱼骨锌螯合胶原肽的制备:将制备的胶原蛋白酶解产物采用3 kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于3 kDa部分，得超滤酶解液，超滤酶解液按照体积比加入到装有10?15倍DlOl大孔树脂的层析柱中，用3?5倍柱体积水洗脱除去杂质，然后用5?8倍柱体积的95%乙醇进行洗脱，乙醇洗脱液于50 V以下低压旋蒸除去乙醇、冷冻干燥得胶原肽混合物，胶原肽混合物依次经凝胶柱层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化，得到金枪鱼鱼骨锌螯合胶原肽。作为优选，所述步骤4)的凝胶柱层析和RP-HPLC纯化的具体过程为: 凝胶柱层析:将上述胶原肽混合物溶于双蒸水配成浓度为10~20 mg/mL的溶液，经过葡聚糖凝胶G-25柱层析分离，用双蒸水进行洗脱，根据214 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，具有最高Zn螯合活性的峰为凝胶层析酶解物； RP-HPLC纯化:将上述凝胶层析酶解物用双蒸水配成45~55 μ g/mL的溶液，利用RP-HPLC进行纯化，根据对Zn的螯合活性得I个高Zn螯合活性胶原肽Gly-Lys-Thr-Gly-Trp-Pro-Gly (GKTGWPG)。再优选，所述RP-HPLC条件为:进样量15~20 μ L ;色谱柱为Zorbax C18 ;流动相:30%乙腈；洗脱速度0.8-1.0 mL/min ;紫外检测波长214 nm。本专利技术基于多肽与金属离子螯合的理论基础，以及多肽-Zn螯合物的独特功效(可同时补充多肽/氨基酸和Zn)，以金枪鱼鱼骨为原材料，通过对胃蛋白酶和胰蛋白酶的酶解条件控制，制备具有高Zn螯合活性的胶原肽。本专利技术即为补锌保健食品和药物开发提供了一种技术支持，同时也为金枪鱼鱼骨的高值化利用提供了一条新思路。【附图说明】图1是本专利技术的葡聚糖凝胶G-25层析图。图2是本专利技术的葡聚糖凝胶G-25制备酶解物的RP-HPLC分析图。图3 是本专利技术的 Gly-Lys-Thr-Gly-Trp-Pro-Gly (GKTGWPG)的质谱图。【具体实施方式】以下结合实施例对本专利技术作进一步详细描述。一种源于金枪鱼鱼骨胶原蛋白的锌螯合胶原肽的制备方法，制备工艺流程如下:金枪鱼鱼骨"胶原蛋白提取"酶解"酶解物"超滤"大孔树脂纯化"凝胶过滤层析"RP-HPLC制备〃锌螯合胶原肽。实施例: I)金枪鱼鱼骨的预处理:按照料液比I g:15 mL向金枪鱼(鲣鱼)鱼骨中加0.1 mol/L NaOH溶液于4°C下浸泡5 h，脱除非胶原蛋白；处理后鱼骨用蒸馏水反复洗涤至pH 7.0、沥干，按照料液比I g: 5 111]^加入0.5 mol/L EDTA溶液(pH 7.4)，于4°C下浸泡3天，每天更换I次EDTA溶液，脱除鱼骨中的钙，干燥、粉碎，得脱钙鱼骨粉。2)金枪鱼鱼骨胶原蛋白的制备:按照料液比I g:3 mL向脱钙鱼骨粉加入0.5 mol/L乙酸溶液并在4°C下浸泡3 d，12 000 g离心30 min后取上清液，加入NaCl至溶液终浓度为0.9 mol/L，静置60 min, 15 000 g离心30 min得沉淀物，冷冻干燥即为鱼骨胶原蛋白。)金枪鱼鱼骨胶原蛋白的酶解:按照料液比Ig:15 mL向胶原蛋白中加入超纯水，用HCl调溶液pH到2.0，按照胶原蛋白质量的1.5%向胶原蛋白溶液中加入胃蛋白酶(酶活力彡L 6X 15 U/g)，酶解3~5 h后，将溶液升温至90 °C~ 95°C，并于此当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种源于金枪鱼鱼骨胶原蛋白的锌螯合胶原肽，其特征在于该锌螯合胶原肽的氨基酸序列为Gly‑Lys‑Thr‑Gly‑Trp‑Pro‑Gly，ESI/MS检测分子量为701.73 Da。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谭洪亮，王斌，迟长凤，邓尚贵，孙坤来，
申请(专利权)人：浙江海洋学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。