本发明专利技术公开了一种微量元素螯合肽的制备方法、以及凡纳滨对虾养殖饲料，微量元素螯合肽的制备方法包括如下步骤：1)酶解将鱼糜制作为pH为7.0±0.1的浆液，静置后，加入生姜蛋白酶，42℃水浴、搅拌酶解6h，酶解过程中控制pH在7.8±0.1；2)水解酶解结束后，95℃水浴加热10min，钝化生姜蛋白酶，得到的水解产物离心分离，获得中间清液为鱼蛋白水解肽溶溶液；3)介入微量元素调节鱼蛋白水解肽溶液的pH值至7.0，加入0.5mol/L FeCl2溶液、0.5mol/L ZnCl2溶液、0.5mol/L CaCl2溶液、Vc，35℃水浴振荡25min，离心分离，获得上清液；采用纳滤膜分离设备，截留分子量1000～5000Da部分；经冷冻干燥后即得本发明专利技术微量元素螯合肽。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种富含微量元素的螯合肽的制备方法、以及利用这种螯合肽的凡纳滨对虾养殖饲料。
技术介绍
凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)是世界主要养殖对虾之一，也是中国主要对虾养殖品种。在集约化养殖过程中，传染性疾病的暴发是制约对虾养殖效益的主要因素。由于使用药物防病可能存在药物残留及病菌耐药性等风险，通过营养途径改善机体的免疫机能并由此提高机体的抗病能力是营养饲料学的重要发展方向和研究热点。有关对虾的营养免疫研究，已有报道主要集中在维生素、多糖、中草药等免疫添加剂对机体抗病能力及免疫相关指标的影响。但免疫添加剂使用会使养殖动物出现免疫耐受现象。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供了一种富含微量金属元素的螯合肽；本专利技术的另一目的是提供一种可有效提高凡纳滨对虾生长成活率、增重率及品质的凡纳滨对虾养殖饲料。本专利技术的目的通过以下技术方案来具体实现：一种微量元素螯合肽的制备方法，包括如下步骤：1)酶解将鱼糜制作为pH为7.0±0.1的浆液，静置后，加入生姜蛋白酶，42℃水浴、搅拌酶解6h，酶解过程中控制pH在7.8±0.1；2)水解酶解结束后，95℃水浴加热10min，钝化生姜蛋白酶，得到的水解产物离心分离，获得中间清液为鱼蛋白水解肽溶溶液；3)介入微量元素调节鱼蛋白水解肽溶液的pH值至7.0，加入0.5mol/L FeCl2溶液、0.5mol/L ZnCl2溶液、0.5mol/L CaCl2溶液、Vc，35℃水浴振荡25min，离心分离，获得上清液；采用纳滤膜分离设备，截留分子量1000～5000Da部分；经冷冻干燥后即得本专利技术微量元素螯合肽。优选的，所述步骤1)中，所述鱼糜浆液的制作方法为：将鱼糜溶于200mL去离子水，再调节混合浆液pH值至7.0±0.1，其中每200mL去离子水溶20±0.5g鱼糜。优选的，所述步骤1)中，静置过程为40℃保温20min。优选的，所述步骤1)中，按30000U/g比例加入生姜蛋白酶。优选的，所述步骤1)中，pH值的控制方法为：酶解过程中每1h用1mol/L HCl/NaOH溶液调一次酶解液控制pH在7.8±0.1。优选的，所述步骤2)中，离心分离工艺为：5000r/min离心20min。优选的，所述步骤3)中，FeCl2溶液、ZnCl2溶液、CaCl2溶液的加入量均为鱼蛋白水解肽溶液体积的1.0％，Vc的加入量为鱼蛋白水解肽溶液体积的0.03％。优选的，所述步骤3)中，离心分离工艺为：8000r/min离心15min。一种凡纳滨对虾养殖饲料，包括基础饲料和上述方法所得到的微量元素螯合肽。优选的，微量元素螯合肽的用量占基础饲料浓度为的2000mg/kg以上，优选2000-2500mg/kg。优选的，所述基础饲料配方中，各组分按重量份计：鱼粉30.0-40.0份、豆粕15.0-20.0份、大豆油2.5-3.0份、鱼油2.5-3.0份、玉米粉8.0-10.0份、小麦粉10.0-15.0份、复合维生素及各种矿质元素2.0-3.0份、羧甲基纤维素钠1.0-2.0份。本专利技术的有益效果是：本专利技术将蛋白水解肽可与机体必需微量金属元素结合，形成蛋白肽-金属配合物，其在提高生物体生长繁殖、增强抗病免疫力、调节生理代谢等方面均有重要作用。在微量元素螯合肽制基础上，在养殖对虾饲料中添加微量元素螯合肽，通过测定养殖对虾存活率、特定增长率、增重率及出肉率，以及血清和肝胰腺组织中非特异性免疫因子活性(OP，SOD，LZM，AKP)。并且，制备微量元素螯合肽对养殖水产动物生长性能及非特异性免疫功能的产生了有利的影响。以期为微量元素螯合肽在养殖水产动物免疫调节及提高品质中的应用提供支持。说明书附图图1为饲料中添加微量元素螯合肽对养殖对虾生虾硬度指标的影响；图2为饲料中添加微量元素螯合肽对养殖对虾生虾咀嚼性指标的影响；图3为饲料中添加微量元素螯合肽对养殖对虾生虾弹性指标的影响；其中，1、对照组：基础饲料饲喂；2、添加500mg/kg微量元素螯合肽饲喂；3、添加1000mg/kg微量元素螯合肽饲喂；4、添加1500mg/kg微量元素螯合肽饲喂；5、添加2000mg/kg微量元素螯合肽饲喂；6、添加2500mg/kg微量元素螯合肽饲喂；同列中不同小写字母，表示显著性差异P<0.05。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。1、材料与方法1.1试验材料杂鱼鱼糜。生姜蛋白酶(酶活力30000IU/g)1.2微量元素螯合肽制备取杂鱼鱼糜约20g，溶于200mL去离子水，调节混合浆液值至7.0±0.1，40℃保温20min；按30000U/g比例加入生姜蛋白酶，42℃水浴、搅拌酶解6h；酶解过程中每1h用1mol/L HCl/NaOH溶液调一次酶解液控制pH在7.8左右。酶解结束后，95℃水浴加热10min，钝化生姜蛋白酶；得到的水解产物5000r/min离心20min，获得中间清液为鱼蛋白水解肽。将蛋白水解肽溶液以1.0mol/L NaOH调节鱼蛋白水解肽值至7.0，按体积的1.0％加入0.5mol/L FeCl2、0.5mol/L ZnCl2、0.5mol/L CaCl2溶液(同时加入体积0.03％Vc保护)，35℃水浴振荡25min，8000r/min离心15min，获得上清液；采用纳滤膜分离设备，截留分子量1000～5000Da部分；经冷冻干燥后即微量元素螯合肽。1.3对虾饲料制备及组成基础饲料：鱼粉30.0-40.0％、豆粕15.0-20.0％、大豆油2.5-3.0％、鱼油2.5-3.0％、玉米粉8.0-10.0％、小麦粉10.0-15.0％、复合维生素及各种矿质元素2.0-3.0％、羧甲基纤维素钠1.0-2.0％。将以上组分粉碎至80目，混合均匀，分别添加0、500、1000、1500、2000、2500mg/kg微量元素螯合肽，加少量水搅拌。采用双螺杆压条机制成直径0.5～1.5mm颗粒饲料，室温晾干后于4℃保存、备用。1.4试验分组及管理实验对虾由舟山海洋研究所虾苗场提供，挑选规格整齐(8.5±0.3)cm、质量(0.92±0.01)g活力好的健康活泼的凡纳滨虾960尾随机分为6组，每组4个重复，每个重复40尾，驯养1周.在实验期间，每天喂料3次，喂料时间分别为8:30、14:30和20:30，日投喂率为对虾体质量的5％～25％(根据虾的摄食情况来调节投喂率)实验持续采用循环过滤水系统，保持充氧。试验期间，控制水体PH 7.8～8.0、温度26±0.1℃盐度为5.3左右，NH4+水平低于0.005mg/L，溶解氧高于6.0mg/L。生长实验的饲养周期为56d。试验分组：①对照组：基础饲料饲喂；②微量元素螯合肽饲喂组1：以添加500mg/kg微量元素螯合肽基础饲料饲喂；③微量元素螯合肽饲喂组2：以添加1000mg/kg微量元素螯合肽基础饲料饲喂；④微量元素螯合肽饲喂组3：以添加1500mg/kg微量元素螯合肽基础饲料饲喂。⑤微量元素螯合肽饲喂组4：以添加2000mg/kg微量元素螯合肽基础饲料饲喂；本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种微量元素螯合肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：1)酶解将鱼糜制作为pH为7.0±0.1的浆液，静置后，加入生姜蛋白酶，42℃水浴、搅拌酶解6h，酶解过程中控制pH在7.8±0.1；2)水解酶解结束后，95℃水浴加热10min，钝化生姜蛋白酶，得到的水解产物离心分离，获得中间清液为鱼蛋白水解肽溶溶液；3)介入微量元素调节鱼蛋白水解肽溶液的pH值至7.0，加入0.5mol/L FeCl2溶液、0.5mol/L ZnCl2溶液、0.5mol/L CaCl2溶液、Vc，35℃水浴振荡25min，离心分离，获得上清液；采用纳滤膜分离设备，截留分子量1000～5000Da部分；经冷冻干燥后即得本专利技术微量元素螯合肽。
【技术特征摘要】
1.一种微量元素螯合肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：1)酶解将鱼糜制作为pH为7.0±0.1的浆液，静置后，加入生姜蛋白酶，42℃水浴、搅拌酶解6h，酶解过程中控制pH在7.8±0.1；2)水解酶解结束后，95℃水浴加热10min，钝化生姜蛋白酶，得到的水解产物离心分离，获得中间清液为鱼蛋白水解肽溶溶液；3)介入微量元素调节鱼蛋白水解肽溶液的pH值至7.0，加入0.5mol/L FeCl2溶液、0.5mol/L ZnCl2溶液、0.5mol/L CaCl2溶液、Vc，35℃水浴振荡25min，离心分离，获得上清液；采用纳滤膜分离设备，截留分子量1000～5000Da部分；经冷冻干燥后即得本发明微量元素螯合肽。2.根据权利要求1所述的微量元素螯合肽的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述鱼糜浆液的制作方法为：将鱼糜溶于200mL去离子水，再调节混合浆液pH值至7.0±0.1，其中每200mL去离子水溶20±0.5g鱼糜。3.根据权利要求1所述的微量元素螯合肽的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，静置过程为40℃保温20min。4.根据权利要求1所述的微量元素螯合肽的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，按30000U/g比例加入生姜蛋白酶。5.根据权利要求1所述的微量元素螯合肽的制备方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：张翰卿，林慧敏，邓尚贵，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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