一种鳄鱼骨胶原蛋白肽粉的制备方法及其用途技术

本发明专利技术涉及一种鳄鱼骨胶原蛋白肽粉的制备方法，包括：A.在溶剂中高压蒸煮已去除肌肉、脂肪的鳄鱼骨，浓缩得鳄鱼骨胶；B.将得到的鳄鱼骨胶用蛋白酶处理，得到酶解液；C.将所述酶解液离心分离，取上清干燥，得到鳄鱼骨胶原蛋白肽粉。本发明专利技术的制备方法简单、方便，适合大规模生产，不仅可以提高鳄鱼产品开发的附加值，避免资源浪费，还可以减少环境污染，带来良好的经济效益和社会效益。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物制品领域，更具体地，涉及一种鳄鱼骨胶原蛋白肽粉的制备方法及其用途。
技术介绍
胶原蛋白是人体或其他动物体内含量最丰富的一类蛋白质，主要存在于骨、皮、肌腱、血管等组织，作为结缔组织中极为重要的一种蛋白质，起着支撑器官、保护机体的功能。胶原蛋白作为天然的高分子化合物，具有合成高分子材料无法比拟的生物相容性和可降解性，所以用途非常广泛，遍及医药、食品、化妆品等领域。胶原蛋白肽是一种新型胶原蛋白类产品，是以胶原蛋白或富含胶原蛋白的物质为原料制备的。它具有原胶原蛋白或组成氨基酸所不具有的独特生理功能，可完全溶解于水，水溶液粘度低，分子量较小，因此，它更容易透过表皮被真皮吸收，也容易通过消化道被消化，在日化、保健食品领域有广阔的应用前景。关于胶原蛋白肽的制备，目前多见于以猪、牛的皮和骨、或水产来源酶解处理获得的胶原蛋白肽的研究。而以鳄鱼特别是鳄鱼骨为原料的胶原蛋白肽还少见报道。随着鳄鱼人工养殖与繁殖技术的日趋成熟，食用鳄的量大增，每年都有大量的鳄鱼骨被丢弃，不仅造成资源浪费，而且还会污染环境。如果能合理利用鳄鱼骨的价值，将变废为宝，并带来显著的经济价值和社会价值。目前胶原蛋白肽的制备，多采用酶解的生物学方法。酶法作用条件较温和，产品的相对分子质量分布较窄，反应条件和过程容易控制，安全性较高。酶法制备的胶原蛋白肽不仅可应用于功能性食品上，在医学和药学方面的应用也被广泛关注。由于原料为鳄鱼骨，成分质地比较特殊，普通蛋白酶无法对鳄鱼骨胶原蛋白进行彻底地水解，且水解得到的产物其生物学效应不显著。因此，对鳄鱼骨进行水解的难点在于水解酶的选择以及不同酶间的组合。由于不同底物的分子结构和氨基酸序列存在差异，而不同的蛋白酶的水解作用位点又不同，这直接导致不同蛋白酶的水解产物具有不同的生物学性质和不同的相对分子质量分布范围。酶的不同组合方式是调整产物分子质量及分布的有效方法。在选择用于水解鳄鱼骨的蛋白酶时，酶系、酶作用的强弱、酶的作用位点等都会对最终产物产生重要影响，对多肽产品开发起着至关重要的作用。
技术实现思路
本专利技术涉及一种鳄鱼骨胶原蛋白肽粉的制备方法，包括：A.在溶剂中高压蒸煮已去除肌肉、脂肪的鳄鱼骨，浓缩得鳄鱼骨胶；B.将得到的鳄鱼骨胶用蛋白酶处理，得到酶解液；C.将所述酶解液离心分离，取上清干燥，得到鳄鱼骨胶原蛋白肽粉。在所述制备方法的优选的实施方案中，所述在溶剂中高压蒸煮的时间可以是30±5分钟，其中所述溶剂可以是水，优选蒸馏水，其中所述鳄鱼骨的重量与所述溶剂的体积的比例可以为1:3，其中所述浓缩可以是浓缩至溶液的总体积的50％。在所述制备方法的优选的实施方案中，其中所述蛋白酶可以为木瓜蛋白酶，所述木瓜蛋白酶与所述鳄鱼骨胶的重量比例可以为0.8％-1.8％，优选为1.6％。在所述制备方法的优选的实施方案中，其中所述蛋白酶处理的条件可以是在保持所述蛋白酶活性的pH下、在55℃±2℃的温度下水解4小时±5分钟。在所述制备方法的优选的实施方案中，其中所述离心可以是在室温以4500rpm离心15±5分钟。在所述制备方法的优选的实施方案中，其中所述干燥可以包括冷冻干燥和喷雾干燥，优选冷冻干燥。本专利技术还涉及由本专利技术的制备方法制备的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉。本专利技术还涉及包含本专利技术的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉的用于保健品或化妆品的抗氧化剂、抗DNA损伤剂或美白添加剂。本专利技术还涉及本专利技术的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉作为保健品或化妆品中的抗氧化剂、抗DNA损伤剂或美白添加剂的用途。鳄鱼骨含有丰富的胶原蛋白，通过现代生物技术的酶法适当处理后，能够获得优质的胶原蛋白肽。本申请的实施方案中，本专利技术人所选择的木瓜蛋白酶为巯基蛋白酶，是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶，可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羧基端，并能优先水解那些在肽键的N-端具有两个羧基的氨基酸或芳香L-氨基酸的肽键。本申请的实施例示出，木瓜蛋白酶水解鳄鱼骨胶原蛋白的产物为具有还原性末端的产物，具有很好的生物学效应。此外，本申请公开的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉的制备方法，不同于以往处理原材料的复杂工序，而是跳过了从原料中提取胶原蛋白的工艺，直接对原材料进行处理，获得了功效良好的优质胶原蛋白肽，达到了简化制备工艺的目的。本申请制备的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉不仅可以提高鳄鱼生产加工的附加值，同时可减少环境污染、避免资源浪费，从而取得良好的社会价值和经济价值。本申请实施例中的实验结果表明，本申请的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉在抗氧化、体外抗DNA损伤方面效果显著；在对蘑菇酪氨酸酶活性的实验中，本申请的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉对酪氨酸酶活性具有显著的抑制效果，说明其具有很好的美白功效。附图说明图1显示了不同蛋白酶对鳄鱼骨胶水解的影响。在图1中，横坐标为不同蛋白酶(中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶和胰蛋白酶)，纵坐标为羟脯氨酸含量。图2显示了不同酶量对鳄鱼骨胶水解的影响。其中，横坐标为不同酶量(0.8％、1.0％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％)，纵坐标为羟脯氨酸含量。图3显示了不同时间对鳄鱼骨胶水解的影响。其中，横坐标为不同酶解时间(1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h)，纵坐标为羟脯氨酸含量。图4显示了本申请的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉的全波长扫描结果。其中，横坐标为波长，纵坐标为吸光度值。图5是本申请的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉的抗氧化活性检测，显示了本申请的不同浓度的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉对DPPH和OH的清除率及相对总还原力的影响。图6显示了本申请的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉对小鼠线粒体肿胀的影响。横坐标为不同的时间(0min、5min、10min、15min、20min、25min)，纵坐标为吸光度值OD520nm。图7是DNA琼脂糖凝胶电泳图，显示了本申请的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉在体外对由羟自由基引发的DNA损伤的保护作用。其中，泳道1：无损伤对照组，泳道2：损伤对照组，泳道3：0.5mg/mL的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉组，泳道4：1.0mg/mL鳄鱼骨胶原蛋白肽粉组。图8显示了本申请的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉对蘑菇酪氨酸酶活性的影响。横坐标为不同浓度的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉(0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4、0.5mg/mL)，纵坐标为酪氨酸酶的相对活性。图9显示了本申请的鳄鱼骨胶原蛋白肽粉对小鼠B16黑本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鳄鱼骨胶原蛋白肽粉的制备方法，包括：A.在溶剂中高压蒸煮已去除肌肉、脂肪的鳄鱼骨，浓缩得鳄鱼骨胶；B.将得到的鳄鱼骨胶用蛋白酶处理，得到酶解液；C.将所述酶解液离心分离，取上清干燥，得到鳄鱼骨胶原蛋白肽粉。

【技术特征摘要】
1.一种鳄鱼骨胶原蛋白肽粉的制备方法，包括：
A.在溶剂中高压蒸煮已去除肌肉、脂肪的鳄鱼骨，浓缩得鳄鱼骨胶；
B.将得到的鳄鱼骨胶用蛋白酶处理，得到酶解液；
C.将所述酶解液离心分离，取上清干燥，得到鳄鱼骨胶原蛋白肽粉。
2.如权利要求1所述的制备方法，其中所述在溶剂中高压蒸煮的时
间是30±5分钟，其中所述溶剂是水，优选蒸馏水，其中所述鳄鱼骨的重
量与所述溶剂的体积的比例为1:3，其中所述浓缩是浓缩至溶液的总体积
的50％。
3.如权利要求1所述的制备方法，其中所述蛋白酶为木瓜蛋白酶，
所述木瓜蛋白酶与所述鳄鱼骨胶的重量比例为0.8％-1.8％，优选为1.6％。
4.如权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其中所述蛋白酶处理的
...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈清西，曹兴梅，李华亮，董欣，熊佑熊，
申请(专利权)人：广州市鼍龙生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44