Orexin‑A聚乙二醇化修饰物制备及用途制造技术

本发明专利技术公开了一种Orexin‑A聚乙二醇化修饰物制备及用途，包括以下步骤：S1：将摩尔比为3：8‑3：80的Orexin‑A和巯基乙酸聚乙二醇酯、甲氧基聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇丙醛加入反应容器中；S2：控制反应容器内的PH值为5‑10，然后将应容器内的温度升温至20‑50℃，反应10‑25h后，向反应容器内加入小分子活性肽，接着在40‑45℃下反应6‑10h后，终止反应，得到反应物；S3：将反应物用色谱柱除盐，然后将除盐后收集的蛋白用阴离子交换柱进行离子交换反应，接着用10‑15mM PB缓冲液洗脱后，收集洗脱峰，再将洗脱峰进行浓缩并冷冻干燥。本发明专利技术制备的Orexin‑A聚乙二醇化修饰物能够保留原有蛋白活性，未改变原有蛋白的功能，产物均一性好，分离纯化简单，方法简单，使用方便，成本低。

Orexin A PEGylation of preparation and use

The invention discloses a Orexin A PEGylation of material preparation and use, which comprises the following steps: S1: Molby 3:8 3:80 Orexin A and polyethylene glycol thioglycolate, methoxy polyethylene glycol or methoxy polyethylene glycol propylaldehyde into a reaction vessel; S2: control of the reaction vessel pH 5 10, then the temperature should be within the container to 20 50 C, 10 reaction after 25h into the reaction vessel with small molecule peptides, then reaction of 6 10h in 40 under 45 DEG C after termination of reaction, reaction was obtained; S3: the reaction with chromatographic column removal salt, then after desalting collected protein by anion exchange column by ion exchange reaction, followed by 10 15mM PB buffer after elution, collecting elution peaks, the elution peak concentration and freeze drying. The prepared Orexin A PEGylated products can retain the original protein activity, protein function did not change the original product, good uniformity, simple purification, simple method, convenient use, low cost.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药化学
，尤其涉及一种Orexin-A聚乙二醇化修饰物制备及用途。
技术介绍
蛋白质和多肽类药物聚乙二醇化技术是指利用聚乙二醇衍生物对蛋白和多肽类药物进行化学修饰的一项热门技术，随着现代基因工程手段的使用，人们能够大量获取所需的蛋白质，但由于天然或重组的未经任何修饰的蛋白质类药物易引起免疫反应，以及其在体内半衰期较短等原因而减弱了临床效果，也大大限制了它们的使用，相比之下，部分聚乙二醇修饰的蛋白质包括聚乙二醇与蛋白质和多肽类药物的物理结合物和化学修饰物，可改变蛋白质药物的一些性质，如：增加此类药物的溶解度和稳定性，减少或消除免疫原性，抗原性和毒性；改善药物体内的药动学性质，增加药物在体内的半衰期；增加药物的治疗指数，扩大临床使用等；因此，近年来有越来越多的聚乙二醇修饰化蛋白药物上市或者进入临床。Orexin-A是存在于下丘脑的一种神经多肽，参与调节饮食，睡眠-觉醒周期、生殖、体温、血压、激素分泌和感觉等生理功能，研究发现Orexin-A具有促觉醒和抗脑缺血损伤的作用，然而，目前仍然没有克服Orexin-A不稳定的方法，这大大限制了Orexin-A的开发应用。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了Orexin-A聚乙二醇化修饰物制备及用途。本专利技术提出的Orexin-A聚乙二醇化修饰物的制备方法，包括以下步骤：S1：将摩尔比为3：8-3：80的Orexin-A和巯基乙酸聚乙二醇酯、甲氧基聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇丙醛加入反应容器中；S2：控制反应容器内的PH值为5-10，然后将应容器内的温度升温至20-50℃，反应10-25h后，向反应容器内加入小分子活性肽，接着在40-45℃下反应6-10h后，终止反应，得到反应物；S3：将反应物用色谱柱除盐，然后将除盐后收集的蛋白用阴离子交换柱进行离子交换反应，接着用10-15mMPB缓冲液洗脱后，收集洗脱峰，再将洗脱峰进行浓缩并冷冻干燥，即得Orexin-A聚乙二醇化修饰物。优选地，所述S1中，将摩尔比为3：10-3：70的Orexin-A和巯基乙酸聚乙二醇酯、甲氧基聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇丙醛加入反应容器中。优选地，所述S2中，控制反应容器内的PH值为6-9，然后将应容器内的温度升温至30-40℃，反应15-20h后，向反应容器内加入小分子活性肽，接着在41-44℃下反应7-9h后，终止反应，得到反应物。优选地，所述S3中，将反应物用色谱柱除盐，然后将除盐后收集的蛋白用阴离子交换柱进行离子交换反应，接着用11-14mMPB缓冲液洗脱后，收集洗脱峰，再将洗脱峰进行浓缩并冷冻干燥，即得Orexin-A聚乙二醇化修饰物。本专利技术制备的Orexin-A聚乙二醇化修饰物能够用于制备治疗促觉醒和抗脑缺血损伤的药物。本专利技术中，所述Orexin-A聚乙二醇化修饰物的制备方法能够提供一种稳定性好，体内半衰期长和安全性好的Orexin-A聚乙二醇化修饰物，克服了Orexin-A不稳定的缺点，制备的Orexin-A聚乙二醇化修饰物能够保留原有蛋白活性，未改变原有蛋白的功能，产物均一性好，分离纯化简单，方法简单，使用方便，成本低。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步解说。实施例一本实施例提出了Orexin-A聚乙二醇化修饰物的制备方法，包括以下步骤：S1：将摩尔比为3：8的Orexin-A和巯基乙酸聚乙二醇酯、甲氧基聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇丙醛加入反应容器中；S2：控制反应容器内的PH值为5，然后将应容器内的温度升温至20℃，反应10h后，向反应容器内加入小分子活性肽，接着在40℃下反应6h后，终止反应，得到反应物；S3：将反应物用色谱柱除盐，然后将除盐后收集的蛋白用阴离子交换柱进行离子交换反应，接着用10mMPB缓冲液洗脱后，收集洗脱峰，再将洗脱峰进行浓缩并冷冻干燥，即得Orexin-A聚乙二醇化修饰物。实施例二本实施例提出了Orexin-A聚乙二醇化修饰物的制备方法，包括以下步骤：S1：将摩尔比为3：44的Orexin-A和巯基乙酸聚乙二醇酯、甲氧基聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇丙醛加入反应容器中；S2：控制反应容器内的PH值为8，然后将应容器内的温度升温至35℃，反应18h后，向反应容器内加入小分子活性肽，接着在43℃下反应8h后，终止反应，得到反应物；S3：将反应物用色谱柱除盐，然后将除盐后收集的蛋白用阴离子交换柱进行离子交换反应，接着用13mMPB缓冲液洗脱后，收集洗脱峰，再将洗脱峰进行浓缩并冷冻干燥，即得Orexin-A聚乙二醇化修饰物。实施例三本实施例提出了Orexin-A聚乙二醇化修饰物的制备方法，包括以下步骤：S1：将摩尔比为3：80的Orexin-A和巯基乙酸聚乙二醇酯、甲氧基聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇丙醛加入反应容器中；S2：控制反应容器内的PH值为10，然后将应容器内的温度升温至50℃，反应25h后，向反应容器内加入小分子活性肽，接着在45℃下反应10h后，终止反应，得到反应物；S3：将反应物用色谱柱除盐，然后将除盐后收集的蛋白用阴离子交换柱进行离子交换反应，接着用15mMPB缓冲液洗脱后，收集洗脱峰，再将洗脱峰进行浓缩并冷冻干燥，即得Orexin-A聚乙二醇化修饰物。以上所述，仅为本专利技术较佳的具体实施方式，但本专利技术的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术揭露的技术范围内，根据本专利技术的技术方案及其专利技术构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
Orexin‑A聚乙二醇化修饰物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将摩尔比为3：8‑3：80的Orexin‑A和巯基乙酸聚乙二醇酯、甲氧基聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇丙醛加入反应容器中；S2：控制反应容器内的PH值为5‑10，然后将应容器内的温度升温至20‑50℃，反应10‑25h后，向反应容器内加入小分子活性肽，接着在40‑45℃下反应6‑10h后，终止反应，得到反应物；S3：将反应物用色谱柱除盐，然后将除盐后收集的蛋白用阴离子交换柱进行离子交换反应，接着用10‑15mM PB缓冲液洗脱后，收集洗脱峰，再将洗脱峰进行浓缩并冷冻干燥，即得Orexin‑A聚乙二醇化修饰物。

【技术特征摘要】
1.Orexin-A聚乙二醇化修饰物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将摩尔比为3：8-3：80的Orexin-A和巯基乙酸聚乙二醇酯、甲氧基聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇丙醛加入反应容器中；S2：控制反应容器内的PH值为5-10，然后将应容器内的温度升温至20-50℃，反应10-25h后，向反应容器内加入小分子活性肽，接着在40-45℃下反应6-10h后，终止反应，得到反应物；S3：将反应物用色谱柱除盐，然后将除盐后收集的蛋白用阴离子交换柱进行离子交换反应，接着用10-15mMPB缓冲液洗脱后，收集洗脱峰，再将洗脱峰进行浓缩并冷冻干燥，即得Orexin-A聚乙二醇化修饰物。2.根据权利要求1所述的Orexin-A聚乙二醇化修饰物的制备方法，其特征在于，所述S1中，将摩尔比为3：10-3：70的O...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐珞，郭菲菲，孙向荣，徐然，张小千，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：山东;37