蛋白质偶联物及其药物组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种新型的蛋白质偶联物，该偶联物为蛋白质与胱氨酸或半胱氨酸修饰的内源性物质的偶联物。此外，本发明专利技术还公开了包含上述蛋白质偶联物的药物组合物，以及上述蛋白质偶联物及包含上述蛋白质偶联物药物组合物的制备方法。本发明专利技术不涉及毒性有机溶剂和催化剂，反应简单易行，产物易于分离精制和进行质量控制，而且得到的药物组合物主动靶向性提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物制剂技术，更具体地说，涉及新型的蛋白质偶联物及其 制备方法和含有该蛋白质偶联物的药物组合物。
技术介绍
在药物研究中发现，有近40%的药物是水难溶性的， 一些药物甚至难溶 于有机溶剂，导致其生物利用度低。在制剂过程中，采用环糊精包合技术、 表面活性剂增溶、乳剂、微乳及固体分散技术等可解决一些难溶性药物的低 生物利用度问题，但仍有大量的药物由于生物利用度问题而被放弃使用。而 纳米混悬技术给这些药物提供了重现自身价值的机会。纳米混悬剂系釆用少 量表面活性剂或其它载体稳定纯药物粒子所形成的一种亚微米胶体分散体 系。近年来的研究发现，纳米混悬剂能增加药物溶出度、提高药物的生物利 用度、增加药物稳定性及提高药效，这使得那些溶解性差的抗生素类药物、 抗肿瘤药物和一些治疗窗窄的药物能发挥更好的作用。而且一些水溶性药物也可以制成纳米混悬剂增加靶向性或可以緩释(朱建芬,吴祥根；纳米混悬剂的制备方法及在药剂学中应用的研究进展;中国医药工业杂志；2006年03 期196-200 )。2005年，FDA批准了 American Pharmaceutical Partners公司开发的以人血 清白蛋白(HSA)为载体的紫杉醇产品Abraxane， Abranane具有胜过紫杉醇 注射液(Taxol)的显著优点。该产品是将紫杉醇与人血清白蛋白结合的一种 纳米混悬制剂。由于Abraxane的溶解度较紫杉醇大大提高，不必使用毒性溶 剂，无需前驱给药预防过敏反应，可采用标准静脉输注导管、以较Taxol高 50%的剂量、于30分钟内静脉给药。临床试验显示，Abraxane用于治疗经蒽环 类药物辅助联合化疗失败或6个月内又复发的转移性乳腺癌病人后，其疗效 反应率和病人存活率都显著优于Taxol。研究显示Abraxane在快速生长的肿瘤中可以被动积蓄。Abraxane中紫杉醇纳晶保持长时间稳定的原因在于 一方 面在于人血清白蛋白分子间在高压和高剪切力作用下二硫键交联在紫杉醇纳 晶周围形成一层外壳；另 一方面在于人血清白蛋白分子荷电所形成的空间静 电排斥力。国际专利申请((公布号WO/1998/014174)专利技术名称PROTEIN STABILIZED PHARMACOLOGICALLY ACTIVE AGENTS, METHODS FOR THE PREPARATION THEREOF AND METHODS FOR THE USE THEREOF ) 介绍了 Abraxane的制备方法。人血清白蛋白作为注射用紫杉醇纳米混悬剂的载体已经取得了很大的成 功，但还存在不足 一方面Abraxane为一皮动靶向制剂，尚可进一步研究制成 主动靶向制剂，提高靶向于肿瘤组织的能力；另一方面在我们的研究中发现 对紫杉醇、环孢素A外的其他药物的纳晶稳定性能较弱。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新型的蛋白质偶联物。本专利技术的另 一个目的是提供包含上述蛋白质偶联物的药物组合物。本专利技术的另 一个目的是提供上述蛋白质偶联物及包含上述蛋白质偶联物 药物组合物的制备方法。具体地说，本专利技术公开了一种新型的蛋白质偶联物，该偶联物为蛋白质 与胱氨酸或半胱氨酸修饰的内源性物质的偶联物，其中，所述的蛋白质是血 清白蛋白，选自人血清白蛋白、重组人血清白蛋白或牛血清白蛋白，优选地 为人血清白蛋白；所述内源性物质选自胆酸或其衍生物、寡聚透明质酸、磷 脂酰丝氨酸、叶酸中的一种或者两种以上的组合。所述的胆酸及其衍生物，其中胆酸的化学式为3a,7a, 12a-三羟基胆甾烷 -24隱酸，也称为胆烷酸、colalin 、 cholalic acid等;胆酸衍生物，选自去氧胆 酸、去氢胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、石胆酸、甘氨胆酸、 牛磺胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、牛^黄鹅脱氧胆酸、甘氨去氧胆酸、牛磺去氧胆 酸、甘氨猪去氧胆酸、牛磺猪去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸、 甘氨石胆酸、牛磺石胆酸等。所述的寡聚透明质酸在本专利技术中是指分子量为1000 ~ 10000道尔顿的透明质酸。人血清白蛋白、重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白、叶酸、磷脂酰丝氨 酸在本专利技术中无特殊限制。本专利技术所述内源性物质的羧基任选地与胱氨酸或半胱氨酸的氨基进行酰 胺反应，生成相应的含有二硫键或巯基的衍生物。白蛋白中含有较多的半胱 氨酸残基，在受热的情况下可以和上述含有二硫键或巯基的衍生物进行交联， 得到新型蛋白质偶联物。该偶联物的结构特征为内源性物质的羧基与半胱氨 酸或胱氨酸结构的伯氨基通过酰胺键偶联后再通过半胱氨酸结构与血清白蛋 白以二硫键偶联，蛋白质之间通过二硫键进一步偶联。在本专利技术的新型蛋白质偶联物的结构中，基本上每个血清白蛋白与1 -35 个本专利技术所述内源性物质通过上述方式偶联；而且，基本上每个本专利技术所述 内源性物质有l-25个羧基与l-25个半胱氨酸结构的伯氨基通过酰胺键偶联，再 通过半胱氨酸结构与单个或多个血清白蛋白以l-25个二硫^t偶联；新型蛋白 质偶联物同时可以有半胱氨酸通过二硫4建与之偶联；本专利技术所述内源性物质 中的一种或几种可以混合通过上述方式与血清白蛋白以二石危键偶联；上述结 构均在本专利技术的保护范围内。此外，本专利技术还提供了含有药剂和药用载体的药物组合物，其中的药用 载体含有上述新型蛋白偶联物。任何适当的药剂可用于本专利技术的药物组合物中，适当的药剂包括但不仅 限于解热镇痛剂、平喘药、抗生素、抗抑郁药、抗糖尿病药、抗炎药、抗肿 瘤药、抗焦虑药、免疫制剂、镇静催眠剂、抗心绞痛药、抗精神病药、抗躁 狂药、抗关节炎药、抗心律失常药、抗痛风药、抗凝剂、血栓溶解剂、抗纤 溶剂、血液流变学药物、抗血小板药物、抗惊厥药、抗巴金森药物、抗组胺 药、用于钙调节的药物、抗病毒药物、支气管扩张剂、激素、降脂药、蛋白 质、多肽、核酸、抗溃疡或抗反流药物、止吐药、诊断药剂、和营养性药品。 其中优选地，药剂是抗肺瘤药，具体的包括但不仅限于紫杉醇及其衍生物、 多西他赛、喜树碱及其衍生物、依托泊苷、替尼泊苷、盐酸阿霉素、环磷酰 胺、放线菌素、博来霉素、正定霉素、阿霉素、表阿霉素、丝裂霉素、曱氨 喋呤、5-氟尿嘧啶、卡铂、卡氮芥、洛莫司汀、顺铂、长春碱、长春新碱、三苯氧胺、哌酰硫烷、苯芥胆甾醇。更优选地，药剂是紫杉醇或其衍生物[具 体的紫杉醇衍生物，参见"李燕，王永华，房华，等.紫杉醇类衍生物的定量结构-抗癌活性关系研究进展，《中国药理学通报》，2008, 24 ( 3 ): 288 ~喜树碱或其衍生物。 最优选地，药剂是紫杉醇。本专利技术还提供了上述新型蛋白质偶联物及其药物组合物的制备方法。本专利技术提供了制备本专利技术的蛋白质偶联物的方法，其包括如下步骤1 )所述的蛋白质、和一种以上的胱氨酸或半胱氨酸修饰的内源性物质溶 于适当的溶剂中；2) 步骤l)所得到的混合物受热，温度为20-80度，优选25-70度，最优 选30-60度；3) 分离去除未交联的胱氨酸或半胱氨酸修饰的内源性物质；4) 千燥；这里，所述蛋白质、内源性物质的定义同上，所述适当的溶剂可选自水、 曱醇、无水乙醇、含一定量水的乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、 叔丁醇、二甲基亚砜、N,N - 二曱基曱酰胺、N,N - 二曱基乙酰胺、乙酸 甲酯、乙酸乙酯本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白质偶联物，其特征在于该偶联物为白蛋白与胱氨酸或半胱氨酸修饰的内源性物质偶联。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高缘，张建军，吕慧侠，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]