用于制备稠合杂环激酶抑制剂的方法和中间体技术

本发明专利技术涉及用于制备吡咯并三嗪的中间体和制备所述中间体的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】 相关申请根据Title 35 119(e)，本申请要求享有提交于2004年6月28日的美国临时申请No.0/583,459和提交于2004年9月23日的美国临时申请No.60/612,563的优先权，其内容在此引入作为参考。专利
本专利技术涉及用于制备吡咯并三嗪的中间体和用于制备该中间体的方法。已经发现，吡咯并三嗪可以通过抑制蛋白酪氨酸激酶活性而用于癌症的治疗中。包含这些化合物的药物组合物还可以用于治疗与通过生长因子和抗血管形成受体(比如c-Met)运行的信号转导途径相关的非癌症的疾病。
技术介绍
肝细胞生长因子(HGF)，由于其具有体外破坏群体形成的能力因此也称为分散因子(SF)，是一种已知可以在正常和新塑细胞中诱发多重多向性反应的间充质来源的细胞因子(Sonnenberg等人，J.Cell Biol.123223-235，1993；Matsumato等人，Crit.Rev.Oncog.327-54，1992；和Stoker等人，Nature 327239-242，1987)。熟知上述这些反应包括上皮细胞和内皮细胞增殖、上皮细胞集落分解成单个细胞、刺激上皮细胞运动性(motogenesis)、细胞存活、诱导细胞形态发生(Montesano等人，Cell 67901-908，1991)和促进侵入(Stella等人，Int.J.Biochem.Cell Biol.121357-62，1999和Stuart等人，Int.J.Exp.Path.8117-30，2000)，所有都是构成转移的关键步骤。另外，据报道，HGF可以促进血管形成(Bussolino等人，J.Cell Biol.119629-641，1992)。此外，HGF在组织再生、伤口愈合和正常胚胎进程中都起着决定性的作用，所有这些都有赖于细胞运动性和细胞增殖。 HGF通过与其相关受体(Met蛋白酪氨酸激酶受体，一种确定的原癌基因)的高亲合性结合引发这些生理学过程(Park等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 846379-83，1987和Bottaro等人，Science 251802-4，1991)。Met的成熟形式由具有大胞外域的高度糖基化外部α-亚单位以及β-亚单位、跨膜部分和胞质酪氨酸激酶域组成。配体的占据诱发Met发生二聚作用，从而导致活化受体进行自磷酸化。Met的活化促进了对募集多种效应蛋白负责的关键胞质酪氨酸残基的转磷酸作用所定义的信号转导级联(Furge等人，Oncogene 195582-9，2000)。其中包括PI3-激酶的p85亚单位、磷脂酶Cγ(Gaul等人，Oncogene 191509-18，2000)、Grb2和Shc衔接蛋白、蛋白质磷酸酶SHP2和Gab1。后述衔接蛋白呈现为响应配体占用而进行磷酸化从而形成酪氨酸的主要下游对接分子(Schaeper等人，J.Cell Biol.1491419-32，2000；Bardelli等人，Oncogene181139-46，1999和Sachs等人，J.Cell Biol.1501375-84，2000)。在HGF刺激细胞中已经报道了其它信号分子的活化，其中最显著的为Ras、MAP激酶、STATs、ERK-1、ERK-2和FAK(Tanimura等人，Oncogene1757-65，1998；Lai等人，J.Biol.Chem.2757474-80 2000和Furge等人，Oncogene 195582-9，2000)。许多上述信号分子的作用都已经在细胞增殖中得到了充分证实。 Met，还称为肝细胞生长因子受体(HGFR)，显著表达于上皮细胞中，不过在内皮细胞、成肌细胞、造血细胞和运动神经元中也得到了鉴定。在许多种不同类型的肿瘤以及转移性疾病的加重中，HGF的过量表达和Met活化都与起病和进展有关。通过鉴定激酶域错义突变，将Met与癌症联系起来的初步证据已经得到了支持，其使个体易患乳头状肾癌(PRC)和肝细胞癌(HCC)(Lubensky等人，Amer.J.Pathology，155517-26，1999)。Met的突变形式还在卵巢癌、儿童HCC、胃癌、头部和颈部鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、结肠直肠转移中得到了鉴定(Christensen等人，Cancer Res.，637345-55，2003；Lee等人，Oncogene，194947-53，2000和Direnzo等人，Clin.Cancer Res.，1147-54，1995)。此外，其它支持Met在癌症中作用的证据基于多种肿瘤(包括甲状腺癌、卵巢癌和胰腺癌)中HGF和Met受体的过量表达。此外，还已经表明其在结肠癌的肝转移中得到了扩增(Rong等人，Cancer Res.551963-1970，1995；Rong等人，Cancer Res.535355-5360，1993；Kenworthy等人，Br.J.Cancer 66243-247，1992和Scarpino等人J.Pathology 189570-575，1999)。TPR-Met(一种与CML中BCR/Abl相似的活化形式)已经被公开并且在人类胃癌中得到了鉴定(PNAS 884892-6，1991)。在患有侵入性乳癌的患者中和非小细胞肺癌患者的近期研究中，受体或者配体的表达为降低存活的预示因素，进一步将Met与肿瘤进展联系起来(Camp等人，Cancer 862259-65 1999和Masuya等人，Br.J.Cancer，901555-62，2004)。通常，大多数间质源的人类肿瘤和肿瘤细胞系都不恰当地表达HGFR和/或HGF。 许多试验数据都支持HGF和Met在肿瘤侵入、生长、存活和进展并且最终引起转移中的作用。在潜伏期，HGF的转基因表达引起转移表型(Takayama等人，PNAS，94701-6，1997)并且扩增/过量表达的Met自发转化NIH-3T3细胞(Cooper等人，EMBO J.，52623-8，1986)。 已经表明，靶定HGF或者Met的比如核糖酶、抗体和反义RNA的生物制剂可以抑制肿瘤发生(Stabile等人，Gene Therapy，11325-35，2004；Jiang等人，Clin.Cancer Res，94274-81，2003和Genentech US6,214,344，2001)。由此，预期靶定Met的小分子激酶调节剂对于Met受体活化在原发肿瘤和继发转移的发生和进展中起着决定性作用的癌症的治疗具有治疗学可能性。此外，熟知HGF调节血管形成，血管形成在肿瘤生长和扩散中是一个至关重要的过程。因此，这类调节剂可以影响血管形成依赖疾病以及其它疾病，其中尤其可以包括糖尿病性视网膜病、黄斑变性、肥胖和炎性疾病(比如类风湿关节炎)。 专利技术概述本专利技术涉及制备用于癌症治疗的吡咯并三嗪化合物的方法。 在本专利技术的一种实施方案中，提供了制备式V化合物的方法 其中Ra和Rb为烷基，该方法包括以下步骤使下式化合物其中Rc为C(O)2Re，其中Re为烷基或者取代烷基，比如甲基、乙基、丁基、叔丁基或者苄基，与烷基有机金属试剂(比如格氏试剂或者有机锂试剂)在足以产生化合物V的条件下接触一段时间。在一些优选的实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
式Ⅴ化合物：＊＊＊Ⅴ其中Ｒ↑［ａ］和Ｒ↑［ｂ］各自为甲基、乙基或者丙基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2004-6-28 60/583,459;US 2004-9-23 60/612,563所限定的本发明精神和范围的实施方案。 实施例所有反应都在干燥氮气或者氩气气氛下，在持续磁力搅拌下进行。所有的蒸发和浓缩都在减压下在旋转蒸发器中进行。市售试剂按照得到的纯度进行应用，没有进行进一步纯化。溶剂为市售无水等级并且在不进行进一步干燥或者纯化下进行应用。快速色谱法使用硅胶进行(EMerck Kieselgel 60，0.040-0.060mm)。 分析反相(RP)HPLC使用Phenomenex Luna C18 S5 4.6mm×50mm柱或者YMC S5 ODS 4.6×50mm柱进行。在各种情形中，4分钟的线性梯度(从100％A∶％0B至0％A∶100％B)与以下流动相系统在流速＝4mL/min下一起应用A＝90％H2O/MeOH+0.2％H3PO4；B＝90％MeOH/H2O+0.2％H3PO4，并且在220nm下进行检测。 制备反相(RP)HPLC按照以下方式进行，使用用0.1％三氟乙酸缓冲的H2O/MeOH混合物进行线性梯度洗脱，并且在220nm处在以下一种柱上进行检测Shimadzu S5 ODS-VP 20×100mm(流速＝9mL/min)，或者YMC S10 ODS 50×500mm(流速＝50mL/min)或者YMC S10 ODS30×500mm(流速＝20mL/min)。 所有的最终产品都通过1H NMR、RP HPLC、电喷射离子化(ESIMS)或者气压流离子化(API MS)质谱进行表征。1H NMR光谱得自于500MHz JEOL或者400MHz Bruker仪器。13C NMR光谱在100或者125MHz下进行记录。相对于溶剂峰的信号强度以单位d(百万分之一，ppm)表示，并且峰重叠定义如下s，单峰；d，双重峰；dd，双二重峰；dm，双多重峰；t，三重峰；q，四重峰；br s，宽单峰；m，多重峰。 对于普遍使用的试剂，应用以下缩略语Boc或者BOC氨基甲酸叔丁酯；Fmoc氨基甲酸9H-芴基甲酯；NMMN-甲基吗啉；Ms甲磺酰基；DIEA或者DIPEA二异丙基乙胺或者Hunig’s碱；NMPN-甲基吡咯烷酮；BOP试剂苯并三唑-1-基氧基三(三甲基氨基)六氟磷酸盐；DCC1，3-二环己基碳二亚胺；EDCI1-(二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；RT室温；tR保留时间；h小时；min分钟；PyBrOP溴代三吡咯烷基磷六氟磷酸盐；TBTUO-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟化碳；DMAP4-N，N-二甲基氨基吡啶；HOBt羟基苯并三唑；HATUO-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基六氟磷酸盐；DIBAL-H二异丁基氢化铝；Na(OAc)3BH三乙酰氧基硼氢化钠；HOAc乙酸；TFA三氟乙酸；LiHMDS双(三甲基甲硅烷)氨基锂；m-CPBAm-氯3-氯过苯甲酸；AIBN2，2’-偶氮二异丁腈；DMSO二甲亚砜；MeCN乙腈；MeOH甲醇；EtOAc乙酸乙酯；DMF二甲基甲酰胺；THF四氢呋喃；DCE1，2-二氯乙烷；Et2O乙醚。 实施例1 1-(3-氟-4-(6-甲氧基-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-基氧基)苯基)-3-(2-苯乙酰基)硫脲 A)6-(1-羟基-1-甲基-乙基)-5-甲基-3H-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-酮在惰性气氛下，制备1.9kg 5-甲基-4-氧代-3，4-二氢-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-羧酸乙酯(一般根据美国专利申请No.09/573829中所述方法进行制备)和17.9kg THF的混合物，并且将其冷却至-10℃。以保持反应温度＜35℃的速度向上述混合物中加入14.2kg为3M THF溶液的甲基氯化镁。将上述反应混合物保持在25～45℃，直至反应完全，然后将其冷却至0℃。制备在36.7kg水中溶有9.9kg氯化铵的溶液并且将其冷却至5℃。以保持内部温度＜15℃的速度将上述有机反应混合物加入到氯化铵溶液中。使各相稳定，将下层水相排出并且另外用9.5kg THF对其进行再萃取。向合并的有机相中加入8.6kg EtOAc，并且用7.6kg饱和氯化钠水溶液对混合物进行洗涤。将反应混合物过滤，然后在真空中(温度＜40℃)将溶剂除去至初始体积的约1/3。再将EtOAc加入其中，并且继续对其进行蒸馏，直至THF的浓度＜7％为止。将所得浆液冷却至0～5℃，然后通过过滤对固体进行收集。用冷(-10℃)EtOAc对所得湿滤饼进行洗涤，然后在40℃下在真空中对其进行干燥，从而得到1.5kg 6-(1-羟基-1-甲基-乙基)-5-甲基-3H-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-酮，纯度为96～99％。B)6-羟基-5-甲基-3H-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-酮向1升3口圆底烧瓶配备机械搅拌器和冰/丙酮冷却浴。向此烧瓶中加入20g 6-(1-羟基-1-甲基-乙基)-5-甲基-3H-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-酮、235mL THF和47mL 50％过氧化氢水溶液。观察到其温度从-7℃上升至7.3℃并且上述混合物成为溶液。在40分钟时间内向上述混合物中加入预冷却的28.5mL水和63mL甲磺酸的溶液，保持温度在-5℃和-0.7℃之间。在-2℃下将上述溶液搅拌95分钟，直至HPLC表明反应已经完成为止；通过在15℃～25℃下，在40分钟时间内将其分份加入到28.5mL水、89g NaHSO3和128mL 28％氨水的冷却溶液中，将反应混合物猝灭，同时将其保持在-2℃。在室温下将上述混合物搅拌20分钟；其pH值为6.80并且过氧化值测定为负值。将各层分离并且用100mL THF对水层进行萃取。将两个有机层合并和浓缩，除去280mL溶剂。向上述所得浓浆中加入250mL水并且继续对其进行浓缩，直至除去88mL溶剂为止。将所得浆液过滤并且用25mL水将所得滤饼洗涤两次，然后用25mL乙腈洗涤。通过在过滤器上抽吸将其干燥至恒重，从而得到12.51g 6-羟基-5-甲基-3H-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-酮，产率75.9％，纯度96.5％。C)2，2-二甲基-丙酸5-甲基-4-氧代-3，4-二氢-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基酯将2.9kg 6-羟基-5-甲基-3H-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-酮、4.6kg二异丙基乙胺和17.0kg THF的混合物冷却至0～10℃，然后以保持温度＜20℃的速度用2.6kg新戊酰氯对其进行处理。对上述混合物进行搅拌，直至通过HPLC测定反应进行完全为止，然后将17.8kg甲苯加入其中，随后将20.6kg 15％的磷酸二氢钾水溶液加入其中。将各相分离并且用10.2kg水洗涤有机相。将所得有机相过滤，然后在最高温度为65℃下对其进行真空蒸馏。可以将补充的甲苯加入其中并且继续对其进行蒸馏，直至THF的浓度＜8％并且总反应物体积降低至31L为止。将所得浆液冷却至20～25℃并且用20.3kg庚烷将其处理1.5小时。将所得浆液冷却至0～5℃并且将其保持1小时，然后通过过滤对固体进行收集和对其进行干燥，从而得到4.0kg 2，2-二甲基-丙酸5-甲基-4-氧代-3，4-二氢-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基酯，纯度为95～99％。D)4-氯-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基新戊酸酯向5-甲基-4-氧代-3，4-二氢吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基新戊酸酯(300mg，1.20mmol)、三氨氧化磷(368mg mL，2.4mmol)和DIEA(0.5mL，2.80mmol)的混合物重加入乙腈(10mL)。在85～90℃下将该反应加热4小时，然后将其冷却至室温。用乙酸乙酯(10mL)和水(5mL)对所得混合物进行稀释。将有机层分离，用硫酸钠干燥、在真空中浓缩并且通过硅胶快速色谱法(用1～25％EtOAc/CH2Cl2洗脱)对其进行纯化，从而得到为白色固体的标题化合物(250mg，78％)。E)4-(2-氟-4-硝基苯氧基)-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基新戊酸酯向4-氯-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基新戊酸酯(250mg，0.94mmol)、2-氟-4-硝基苯酚(176mg，1.12mmol，Aldrich)和K2CO3(154mg，1.12mmol)的混合物中加入DMF(5mL)。在室温下将该反应搅拌24小时。用水(5mL)和CH2Cl2(10mL)将反应猝灭。将有机层分离，用硫酸钠干燥、在真空中浓缩并且通过硅胶快速色谱法(用1～25％EtOAc/CH2Cl2洗脱)对其进行纯化，从而得到为白色固体的标题化合物(160mg，44％)。F)4-(2-氟-4-硝基苯氧基)-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-醇向4-(2-氟-4-硝基苯氧基)-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基新戊酸酯(80mg，0.2mmol)的THF(1mL)溶液中加入NaOH的MeOH/H2O溶液(0.2mL，1M)。上述溶液立即变为红色。5分钟之后，用EtOAc(5mL)和H2O(5mL)将反应猝灭。将有机层分离、用硫酸钠干燥并且在真空中对其进行浓缩，从而得到为黄色固体的标题化合物(52mg，85％)。G)4-(2-氟-4-硝基苯氧基)-6-甲氧基-5-甲基吡咯并[2，1-G][1，2，4]三嗪向4-(2-氟-4-硝基苯氧基)-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-醇(52mg，0.17mmol)的DMF(2mL)溶液中加入Cs2CO3(65mg，0.2mmol)，并且在室温下将上述所得混合物搅拌10分钟。将碘代甲烷的DMF溶液(0.2mL，0.2mmol，1M)加入其中并且在室温下将所得反应溶液搅拌2小时。用EtOAc(5mL)和H2O(5mL)将反应猝灭。将有机层分离、用硫酸钠干燥并且在真空中对其进行浓缩，从而得到为黄色固体的标题化合物(35mg，65％)。H)3-氟-4-(6-甲氧基-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-基氧基)苯胺向4-(2-氟-4-硝基苯氧基)-6-甲氧基-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪(35mg，0.11mmol)的THF(1.0mL)溶液中加入MeOH(1.0mL)，随后向其中加入Zn(100mg，1.5mmol)和NH4Cl(43mg，0.80mmol)。在60℃下将上述反应加热3小时。将上述溶液滤过Celite并且在真空下对其进行浓缩。通过SCX萃取柱柱体(用氨水的甲醇溶液(2M)洗脱)对上述产品混合物进行纯化，从而得到为白色固体的标题化合物(15mg，50％)。I)2-苯基-1-氰硫基乙酮(thiocyanatoethanone)向NaSCN(49mg，0.60mmol)的EtOAc(2mL)溶液中加入苯乙酰氯(0.066mL，0.50mmol，Aldrich)，从而得到2-苯基-1-氰硫基乙酮的0.25M溶液。10分钟之后，通过使等分的反应混合物与4-(苯氧基)苯胺反应从而形成通过LCMS(ESI+)m/z 363(M+H)+检测的相应硫氰酸酯，对反应是否完成进行测定。所得的2-苯基-1-氰硫基乙酮可以直接使用，不需要进行分离或者进一步纯化。 J)1-(3-氟-4-(6-甲氧基-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-基氧基)苯基)-3-(2-苯乙酰基)硫脲向3-氟-4-(6-甲氧基-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-基氧基)苯胺(7.5mg，0.026mmol)的CH2Cl2(1mL)溶液中加入2-苯基-1-氰硫基乙酮(0.133mL，0.033mmol，0.25M的乙酸乙酯溶液)溶液。在室温下将上述反应搅拌20分钟，在真空中浓缩并且通过硅胶快速色谱法(用1～25％EtOAc/CH2Cl2洗脱)对其进行纯化，从而得到为浅黄色固体的标题化合物(6.1mg，50％)。1H NMR(CDCl3)δ8.51(s，1H)，7.87(m，1H)，7.83(s，1H)，7.47(m，5H)，7.31(m，4H)，3.89(s，3H)，3.74(d，2H，J＝10.5Hz)，2.44(s，3H)；MS(ESI+)m/z 466(M+H)+. 实施例2 1-(3-氟-4-(6-甲氧基-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-基氧基)苯基)-3-(2-(4-氟苯基)乙酰基)硫脲 A)2-(4-氟苯基)-1-氰硫基乙酮向NaSCN(49mg，0.60mmol)的EtOAc(2mL)溶液中加入4-氟苯基乙酰氯(0.066mL，0.50mmol，Aldrich)。在室温下将上述反应搅拌1小时，从而得到浓度为0.25M的2-(4-氟苯基)-1-氰硫基乙酮的EtOAc溶液，不需要进行进一步纯化即可使用。 B)1-(3-氟-4-(6-甲氧基-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-基氧基)苯基)-3-(2-(4-氟苯基)乙酰基)硫脲按照与实施例1化合物H和J所述相似的方式，由3-氟-4-(6-甲氧基-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-基氧基)苯胺和2-(4-氟苯基)-1-氰硫基乙酮对标题化合物进行制备。1H NMR(CDCl3)δ.8.49(s，1H)，7.88(m，1H)，7.83(s，1H)，7.45(s，1H)，7.28(m，5H)，7.12(m，2H)，3.89(s，3H)，3.71(s，2H)，2.44(s，3H)；MS(ESI+)m/z 484(M+H)+. 实施例3 4-(2-氟-4-(3-(2-(4-氟苯基)乙酰基)脲基)苯氧基)-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基乙基氨基甲酸酯 A)4-(2-氟-4-硝基苯氧基)-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基乙基氨基甲酸酯向4-(2-氟-4-硝基苯氧基)-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-醇(25mg，0.082mmol，实施例1的化合物F)、DIEA(0.017mL，0.1mmol)的CH2Cl2(5mL)混合物中加入异氰酸乙酯(0.078mL，0.1mL)，并且在室温下将其搅拌2小时。用水(5mL)将上述反应猝灭。将有机层分离、干燥和在真空中对其进行浓缩。通过快速色谱法(1～5％甲醇/CH2Cl2)对上述混合物进行纯化，从而得到为白色固体的标题化合物(12.5mg，32％)。B)4-(4-氨基-2-氟苯氧基)-5-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-基乙基氨基甲酸酯向4-(...

【专利技术属性】
技术研发人员：G克里斯皮诺，S巴博萨，范俊英，蔡振伟，
申请(专利权)人：布里斯托尔迈尔斯斯奎布公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]