抗-运甲状腺素蛋白人抗体制造技术

包括包含SEQ ID NO:1‑3所示的氨基酸序列的H链互补决定区和包含SEQ ID NO:4‑6所示的氨基酸序列的L链互补决定区的人抗体。该人抗体适合于在人中使用，并显示特异性结合已经历结构变化的运甲状腺素蛋白(TTR)的活性，和抑制TTR纤维化的活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供有效地抑制淀粉样蛋白原纤维的形成和其通过运甲状腺素蛋白(TTR)沉积至组织的抗体，以及使用所述抗体的治疗方法。该抗体疗法基于正常TTR不受影响，但仅异常TTR的淀粉样蛋白发生受到抑制的新治疗策略，并预期是在安全性方面出色的新治疗方法。
技术介绍
淀粉样变是其中形成纤维结构的蛋白在全身器官中沉积以诱导功能紊乱的一系列疾病，并包括各种疾病例如阿尔茨海默痴呆和朊病毒病(非专利文献1)。家族性淀粉样蛋白多神经病(FAP)是由TTR、载脂蛋白A1、凝溶胶蛋白等的基因的点突变或缺失引起的常染色体显性的遗传性系统淀粉样变(非专利文献2)。在这些当中，由TTR的遗传突变引起的FAP是最常见的。已知突变体TTR形成淀粉样蛋白原纤维，在中年后其通常沉积在全身几乎所有的组织中，例如周围神经、心、肾、消化道、眼、脑和脑膜。它是一种顽固性疾病，表现出极差的患者康复和在疾病发生后大约10年内致死。到目前为止，已经报道了超过100种TTR基因的点突变和缺失。特别是，其中TTR的第30位缬氨酸被突变为甲硫氨酸的Val30Met突变(后文称为\V30M\)是最常见的。在葡萄牙、瑞典和日本存在许多患者。因为在葡萄牙已经确认超过6,000例FAP患者，FAP尚未被调查的区域并非少数并且预期世界范围FAP患者的发现将会持续，因此猜测在整个世界范围内存在超过10,000名患者。从最近的研究得知，FAP的临床特征(发生的年龄、沉积器官特异性等)极大地受TTR基因的突变类型的影响(非专利文献3)。例如，关于FAP的发生年龄，L55P突变显示疾病在十几岁发生的急性临床特征，而关于V122I突变，疾病在60岁和以后发生。另一方面，已知V30M突变显示其中疾病在较小年龄和在较大年龄发生的两种类型的疾病。关于沉积器官特异性，D18G突变导致在脑和脑膜中沉积，引起中枢神经紊乱，而V30M突变导致在全身组织中沉积，引起周围神经紊乱和心肌紊乱(非专利文献3和4)。TTR是由127个氨基酸残基组成的蛋白，其分子量为14kDa并具有内部存在的8个β-链形成2个反向平行的β-片的结构(非专利文献5)。TTR主要在肝中产生，但也在心室脉络丛、视网膜的视网膜色素上皮细胞、脾等中产生。TTR通常通过在血液中形成分子量为55kDa的四聚体而形成稳定结构，并且主要在血液和脑脊液中作为维生素A/视黄醇-结合蛋白复合物和甲状腺激素T4的载体发挥作用。其血液水平高达200-400μg/mL，但其半寿期短至2天(非专利文献2-6)。已知在TTR四聚体的中心存在两个同源T4-结合位点，T4与其结合以稳定四聚体结构(非专利文献3)。存在关于TTR的另一种功能的各种报道，例如胰岛素分泌促进活性、脑神经保护活性和关于脂质代谢的活性(非专利文献2。另一方面，尽管视黄醇和甲状腺激素的血液水平在TTR基因敲除小鼠中降低，但未能见到在表型(例如存活率和生育力性质)上的显著改变(非专利文献7)，因此仍然未知TTR对于维持实际的生物学活性是否是直接必需的。对于TTR导致的淀粉样蛋白发生，从四聚体离解成单体和单体的结构变化是非常重要的步骤(非专利文献3)。在这些当中，已经显示从四聚体离解成单体是反应的速率决定步骤。另一方面，在其中TTR形成在组织中沉积和损坏全身器官的淀粉样蛋白的过程中，对组织产生毒性的分子形式尚未完全阐明。据报道，单体和低分子量寡聚体例如二聚体显示细胞毒性，而100kDa或更大的TTR淀粉样蛋白并非如此(非专利文献5)，因此希望未来的研究将澄清毒性和分子形式之间的关联。对起源于TTR的遗传异常的FAP的治疗策略主要分为以下四类。(1)抑制变体TTR的产生水平(2)稳定包含变体TTR的TTR四聚体结构(3)防止从四聚体离解的TTR的淀粉样蛋白形成(4)除去组织中沉积的TTR淀粉样蛋白因为在血液中几乎所有的TTR在肝中产生(非专利文献2)，目前最常见的疗法是归类为上文(1)的肝移植。尽管通过肝移植观察到疾病进展延迟，整个生命中使用免疫抑制剂是不可避免的，其对捐赠者和患者是极大的负担。此外，在数种器官(包括眼和心)中沉积仍继续，因此在不少病例中可见到在这些器官中症状恶化(非专利文献8)。因此，这是有问题的，由此开发有效的治疗方法是迫切需要的。对于肝移植以外的其它治疗方法，在策略(1)的情况下使用siRNA或反义寡核苷酸的治疗方法处于临床开发阶段。然而，对于所有这些方法，不仅变体TTR而且野生型TTR的产生受到抑制，因此当长期使用时应仔细进行它们的安全性评价。关于策略(2)，已经开发与TTR四聚体的T4-结合位点结合从而稳定四聚体结构的药物。根据该策略开发的新药VyndaqelR已在2011年在欧盟和2013年在日本获得批准。作为长达30个月的临床试验的结果，VyndaqelR显示在FAP患者中延迟周围神经病的作用，但不能完全抑制症状的进展(非专利文献9)。并且对于策略(3)和(4)，尽管多种药物处于临床开发阶段，现状是无一疗法可为根治疗法。专利文献专利文献1:WO2010030203专利文献2:JP2010-195710非专利文献非专利文献1:Glenner,G.G.:Amyloiddepositsandamyloidosis:thebeta-fibrilloses(secondoftwoparts).:NEnglJMed,302:1333-1343,1980非专利文献2:Ando,Y.&Jono,H.:Pathogenesisandtherapyfortransthyretinrelatedamyloidosis.:RinshoByori,56:114-120,2008非专利文献3:YoshikiSekijima:MolecularmechanismofTTRamyloiddepositionanditscontrol:Igaku-No-Ayumi,229:349-356,2009非专利文献4:YukoMotozaki,ShojiYamada:Molecularepidemiologyoffamilialamyloidoticpolyneuropathy(FAP):Igaku-No-Ayumi,229:357-362,2009非专利文献5:Hou,X.,Aguilar,M.I.&Small,D.H.:Transthyretinandfamilialamyloidoticpolyneuropathy.Recentprogressinunderstandingthemolecularmechanismofneurodegeneration.:FEBSJ,274:1637-1650,2007非专利文献6:Araki,S.&Ando,Y.:Transthyretin-relatedfamilialamyloidoticpolyneuropathy-ProgressinKumamoto,Japan（1967-2012)-.:ProcJpnAcadSerBPhysBiolSci,86:694-706,2010非专利文献7:Episkopou,V.,Maeda,S.,Nishiguchi,S.,Shimada,K.,Gaitanaris,G.A.,本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有抑制运甲状腺素蛋白(下文称为“TTR”)的原纤维化的活性的人抗体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.01.29 JP 2014-0149121.具有抑制运甲状腺素蛋白(下文称为“TTR”)的原纤维化的活性的人抗体。2.权利要求1的人抗体，其特异性识别具有结构改变的TTR。3.权利要求1或2的人抗体，其特异性结合TTR淀粉样蛋白。4.权利要求1-3中任一项的人抗体，其结合自两种或更多种变体TTR衍生的TTR淀粉样蛋白。5.权利要求4的人抗体，其中变体TTR是具有选自D18G、V30M、E54K、L55P、Y114C、Y116S和V122I的突变的TTR。6.权利要求1-5中任一项的人抗体，其促进TTR淀粉样蛋白的去除。7.权利要求1-6中任一项的人抗体，其促进巨噬细胞对TTR淀粉样蛋白的吞噬能力。8.权利要求1-7中任一项的人抗体，其中表位是包含TTR的位置79至位置89的序列。9.权利要求8的人抗体，其中表位是TTR的位置79至位置89。10.权利要求1-9中任一项的人抗体，其对TTR淀粉样变具有治疗作用和/或预防作用。11.权利要求10的人抗体，其中所述TTR淀粉样变是家族性淀粉样蛋白多神经病(下文称为“FAP”)。12.权利要求10的人抗体，其中所述TTR淀粉样变是老年系统性淀粉样变(下文称为“SSA”)。13.权利要求1-12中任一项的人抗体，其是通过噬菌体展示获得的抗体。14.权利要求1-13中任一项的人抗体，其包含由下文(a)或(b)的多肽组成的H链互补决定区和由下文(c)或(d)的多肽组成的L链互补决定区：(a)由SEQIDNO:1-3所示的氨基酸序列组成的多肽；(b)由SEQIDNO:1-3所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或几个氨基酸残基被取代、缺失、插入和/或添加，所述多肽可为TTR的H链互补决定区；(c)由SEQIDNO:4-6所示的氨基酸序列组成的多肽；(d)由SEQIDNO:4-6所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或几个氨基酸残基被取代、缺失、插入和/或添加，所述多肽可为TTR的L链互补决定区。15.权利要求1-13中任一项的人抗体，其包含由下文(e)或(f)的多肽组成的H链互补决定区和由下文(g)或(h)的多肽组成的L链互补决定区：(e)由SEQIDNO:7-9所示的氨基酸序列组成的多肽；(f)由SEQIDNO:7-9所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或几个氨基酸残基被取代、缺失、插入和/或添加，所述多肽可为TTR的H链互补决定区；(g)由SEQIDNO:10-12所示的氨基酸序列组成的多肽；(h)由SEQIDNO:10-12所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或几个氨基酸残基被取代、缺失、插入和/或添加，所述多肽可为TTR的L链互补决定区。16.权利要求1-13中任一项的人抗体，其包含由下文(i)或(j)的多肽组成的H链可变区和由下文(k)或(l)的多肽组成的L链可变区：(i)由SEQIDNO:13所示的氨基酸序列组成的多肽；(j)由SEQIDNO:13所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或几个氨基酸残基被取代、缺失、插入和/或添加，所述多肽可为TTR的H链可变区；(k)由SEQIDNO:14所示的氨基酸序列组成的多肽；(l)由SEQIDNO:14所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或几个氨基酸残基被取代、缺失、插入和/或添加，所述多肽可为TTR的L链可变区。17.权利要求1-13中任一项的人抗体，其包含由下文(m)或(n)的多肽组成的H链可变区和由下文(o)或(p)的多肽组成的L链可变区：(m)由SEQIDNO:15所示的氨基酸序列组成的多肽；(n)由SEQIDNO:15所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或几个氨基酸残基被取代、缺失、插入和/或添加，所述多肽可为TTR的H链可变区；(o)由SEQIDNO:16所示的氨基酸序列组成的多肽；(p)由SEQIDNO:16所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或几个氨基酸残基被取代、缺失、插入和/或添加，所述多肽可为TTR的L链可变区。18.包含由下文(a)或(b)的多肽组成的H链互补决定区的H链可变区片段：(a)由SEQIDNO:1-3所示的氨基酸序列组成的多肽；(b)由SEQIDNO:1-3所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或几个氨基酸残基被取代、缺失、插入和/或添加，所述多肽可为TTR的H链互补决定区。19.包含由下文(c)或(d)的多肽组成的L链互补决定区的L链可变区片段：(c)由SEQIDNO:4-6所示的氨基酸序列组成的多肽；(d)由SEQIDNO:4-6所示的氨基酸序列组成的多肽，其中一个或几个氨基酸残基被取代、缺...

【专利技术属性】
技术研发人员：鸟饲正治，细井亚树彦，竹尾智予，上野真代，副岛见事，中岛敏博，安东由喜雄，城野博史，苏宇，水口峰之，
申请(专利权)人：一般财团法人化学及血清疗法研究所，
类型：发明
国别省市：日本;JP