含有固定化病毒粒子的疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种疫苗，其含有固定化病毒粒子，其中，以作为固定化病毒粒子来源的病毒粒子或对应的灭活病毒粒子的3只兔的发热反应之和为基准，固定化病毒粒子在发热试验中的3只兔的发热反应之和小于80％。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有固定化病毒粒子的疫苗
本专利技术涉及含有固定化病毒粒子的疫苗。更详细而言，本专利技术涉及通过将病毒的粒子结构用固定化剂固定而使副反应得到抑制的含有固定化病毒粒子的疫苗。
技术介绍
由流感病毒和日本脑炎病毒等病毒引起的感染症有时会由于病毒的种类、感染的对象不同而发生重症化。作为对这样的病毒引起的感染症的防御、预防的方法，已知疫苗的接种等。现有技术文献专利文献专利文献1：国际公开第2016/010081号非专利文献非专利文献1：J.Infect.Dis.2009200(6)841-848非专利文献2：Vaccine200927(5)786-791
技术实现思路
本专利技术所要解决的课题对于针对流感病毒和日本脑炎病毒等病毒的疫苗，制造、市售有灭活疫苗和活疫苗这两种。其中，灭活疫苗大致分为用福尔马林等灭活剂对精制后的病毒粒子进行处理而制备的全粒子疫苗和将精制的病毒粒子用有机溶剂或表面活性剂破坏(裂解)而制备的裂解疫苗。全粒子疫苗的免疫原性高，在预防感染的效果方面优异。但是，全粒子疫苗具有局部反应和发热反应等副反应强的倾向。另一方面，裂解疫苗的局部反应降低，几乎没有发热反应，因此安全性优异。但是，在基础免疫未建立的儿童或免疫反应衰退的老年人中，有在裂解疫苗的免疫原性低的倾向。因此，期望开发出显示出优于裂解疫苗的有效性(免疫原性)且安全性高的疫苗。本专利技术是鉴于以上情况而完成的，其目的在于提供一种免疫原性高且副反应得到抑制的疫苗。用于解决课题的手段本专利技术者们等为了解决上述课题进行了深入研究，结果令人惊讶地发现，通过不破坏(裂解)病毒粒子的粒子结构而是用固定化剂进行固定，含有保持了与本来的病毒粒子同等的成分和结构的病毒粒子(以下有时称为“固定化病毒粒子”)的疫苗在免疫原性试验中为同等、而发热试验等副反应的成绩优异，从而完成了本专利技术。即，本专利技术提供以下的[1]～[15]。[1]一种疫苗，其含有固定化病毒粒子，其中，以作为上述固定化病毒粒子的来源的病毒粒子或对应的灭活病毒粒子的3只兔的发热反应之和为基准，上述固定化病毒粒子在发热试验中的3只兔的发热反应之和小于80％。[2]根据[1]所述的疫苗，其中，上述固定化病毒粒子在发热试验中的3只兔的发热反应之和为1.3℃以下。[3]一种疫苗，其含有固定化病毒粒子，其中，以由受到作为上述固定化病毒粒子来源的病毒粒子或对应的灭活病毒粒子刺激的人末梢血单核细胞产生的炎性细胞因子的量为基准，由受到上述固定化病毒粒子刺激的人末梢血单核细胞产生的炎性细胞因子的量小于80％。[4]根据[1]～[3]中任一项所述的疫苗，其中，作为上述固定化病毒粒子来源的病毒粒子包含正黏病毒粒子、黄病毒粒子或小核糖核酸病毒粒子。[5]根据[4]所述的疫苗，其中，上述病毒粒子包含流感病毒粒子、日本脑炎病毒粒子或甲型肝炎病毒粒子。[6]根据[5]所述的疫苗，其中，上述病毒粒子包含流感病毒粒子。[7]根据[6]所述的疫苗，其中，上述流感病毒粒子包含甲型流感病毒粒子或乙型流感病毒粒子。[8]根据[6]或[7]所述的疫苗，其中，上述流感病毒粒子包含被分类为H1N1亚型株、H2N2亚型株、H3N2亚型株、H3N8亚型株、H5N1亚型株、H5N2亚型株、H5N6亚型株、H6N1亚型株、H7N3亚型株、H7N7亚型株、H7N9亚型株、H9N2亚型株、或H10N8亚型株的流感病毒粒子。[9]根据[5]所述的疫苗，其中，上述病毒粒子包含日本脑炎病毒粒子。[10]根据[9]所述的疫苗，其中，上述日本脑炎病毒粒子包含北京-1株、中山株、SA14-14-2株或P3株。[11]根据[1]～[10]中任一项所述的疫苗，其中，上述固定化病毒粒子表面的蛋白的0％～90％未被固定化。[12]根据[1]～[11]中任一项所述的疫苗，其中，上述固定化病毒粒子的比活性相对于作为上述固定化病毒粒子来源的病毒粒子的比活性(抗原含量/蛋白含量)的相对值为0％～95％。[13]根据[1]～[12]中任一项所述的疫苗，其中，上述固定化病毒粒子具有作为上述固定化病毒粒子来源的病毒粒子或对应的灭活病毒粒子的粒径的80％～150％的平均粒径。[14]根据[1]～[13]中任一项所述的疫苗，其中，在用蔗糖密度梯度离心测定上述固定化病毒粒子的情况下，在蔗糖浓度35％以上检测到峰。[15]根据[1]～[14]中任一项所述的疫苗，其中，在用高效液相色谱法测定上述固定化病毒粒子的情况下，确认到单峰性的峰。[16]根据[1]～[15]中任一项所述的疫苗，其中，在免疫小鼠的情况下，与对上述固定化病毒粒子特异性的IgG1相比，更为诱导对上述固定化病毒粒子特异性的IgG2a。此外，本专利技术还提供以下的[17]～[31]。[17]一种固定化病毒粒子的制造方法，其包含在含有作为来源的病毒粒子或对应的灭活病毒粒子的悬浮液中加入固定化剂的工序。[18]根据[17]所述的制造方法，其中，所述固定化剂包含醛类。[19]根据[18]所述的制造方法，其中，上述醛类选自甲醛、多聚甲醛、戊二醛、以及它们的组合。[20]根据[19]所述的制造方法，其中，所述醛类包含甲醛。[21]根据[20]所述的制造方法，其中，以上述悬浮液及上述固定化剂的总量为基准，上述甲醛的浓度为0.005～0.5w/v％。[22]根据[19]所述的制造方法，其中，所述醛类包含戊二醛。[23]根据[22]所述的制造方法，其中，以上述悬浮液及上述固定化剂的总量为基准，上述戊二醛的浓度为0.001～0.06w/v％。[24]根据[17]所述的制造方法，其中，上述固定化剂包含碳二亚胺类。[25]根据[24]所述的制造方法，其中，上述碳二亚胺类选自二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、它们的类似物及它们的组合。[26]根据[25]所述的制造方法，其中，上述碳二亚胺类包含1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐。[27]根据[26]所述的制造方法，其中，以上述悬浮液及上述固定化剂的总量为基准，上述1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的浓度为0.05～1500mM。[28]根据[17]～[27]中任一项所述的制造方法，其中，作为来源的上述病毒粒子是通过感染培养细胞、鸡蛋或小鼠大脑而回收的病毒粒子。[29]根据[28]所述的制造方法，其中，上述培养细胞包含原代细胞或细胞系。[30]根据[29]所述的制造方法，其中，上述培养细胞包含Vero细胞或MDCK细胞。[31]一种疫苗的制造方法，其包含添加通过[17]～[30]中任一项所述的制造方法得到的固定化病毒粒子的工序。专利技术效果根据本专利技术，可以提供免疫原性高且副反应得到抑制的疫苗。附图说明图1是用电子显微镜拍摄固定化流感病毒粒子的照片(福尔马林处理)。图2是用电子显微镜拍摄固定化流感病毒粒子的照片(戊二醛处理)。图3是用电子显微镜拍摄固定化流感病毒粒子的照片(EDC处理)。图4是用电子显微镜拍摄固定化日本脑炎病毒粒子的照片(戊二醛处理)。图5是用电子显微镜拍摄固定化日本脑炎病毒粒子的照片(福尔马林处理)。图6是用电子显微镜拍摄固定化日本脑炎病毒粒子的照片(EDC处理)。具体实施方式以下，对本专利技术的优选实施方式进行详细说明。但是，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种疫苗，其含有固定化病毒粒子，其中，以作为所述固定化病毒粒子来源的病毒粒子或对应的灭活病毒粒子的3只兔的发热反应之和为基准，所述固定化病毒粒子在发热试验中的3只兔的发热反应之和小于80％。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.15 JP 2016-0061331.一种疫苗，其含有固定化病毒粒子，其中，以作为所述固定化病毒粒子来源的病毒粒子或对应的灭活病毒粒子的3只兔的发热反应之和为基准，所述固定化病毒粒子在发热试验中的3只兔的发热反应之和小于80％。2.根据权利要求1所述的疫苗，其中，所述固定化病毒粒子在发热试验中的3只兔的发热反应之和为1.3℃以下。3.一种疫苗，其含有固定化病毒粒子，其中，以由受到作为所述固定化病毒粒子来源的病毒粒子或对应的灭活病毒粒子刺激的人末梢血单核细胞产生的炎性细胞因子的量为基准，由受到所述固定化病毒粒子刺激的人末梢血单核细胞产生的炎性细胞因子的量小于80％。4.根据权利要求1～3中任一项所述的疫苗，其中，作为所述固定化病毒粒子来源的病毒粒子包含正黏病毒粒子、黄病毒粒子或小核糖核酸病毒粒子。5.根据权利要求4所述的疫苗，其中，所述病毒粒子包含流感病毒粒子、日本脑炎病毒粒子或甲型肝炎病毒粒子。6.根据权利要求5所述的疫苗，其中，所述病毒粒子包含流感病毒粒子。7.根据权利要求6所述的疫苗，其中，所述流感病毒粒子包含甲型流感病毒粒子或乙型流感病毒粒子。8.根据权利要求6或7所述的疫苗，其中，所述流感病毒粒子包含被分类为H1N1亚型株、H2N2亚型株、H3N2亚型株、H3N8亚型株、H5N1亚型株、H5N2亚型株、H5N6亚型株、H6N1亚型株、H7N3亚型株、H7N7亚型株、H7N9亚型株、H9N2亚型株、或H10N8亚型株的流感病毒粒子。9.根据权利要求5所述的疫苗，其中，所述病毒粒子包含日本脑炎病毒粒子。10.根据权利要求9所述的疫苗，其中，所述日本脑炎病毒粒子包含北京-1株、中山株、SA14-14-2株或P3株。11.根据权利要求1～10中任一项所述的疫苗，其中，所述固定化病毒粒子表面的蛋白的0％～90％未被固定化。12.根据权利要求1～11中任一项所述的疫苗，其中，所述固定化病毒粒子的比活性即抗原含量/蛋白含量相对于作为所述固定化病毒粒子来源的病毒粒子的比活性的相对值为0～95％。13.根据权利要求1～12中任一项所述的疫苗，其中，所述固定化病毒粒子具有作为所述固定化病毒粒子来源的病毒粒子或对应的灭活病毒粒子的粒径的80％～150％的平均粒径。14.根据权利要求1～13中任...

【专利技术属性】
技术研发人员：小沼浩人，鹤留由香里，池田千将，山上亮，来海和彦，阿部元治，渡边彰大，大原有树，
申请(专利权)人：一般财团法人化学及血清疗法研究所，
类型：发明
国别省市：日本,JP